趋化因子受体4在乳腺癌组织中的表达变化及意义

赵海宁，谢莹莺，马德寿，才旦多杰，刘震，陈鹏，刘燕

(青海大学附属医院，西宁810001)



趋化因子受体4在乳腺癌组织中的表达变化及意义

赵海宁，谢莹莺，马德寿，才旦多杰，刘震，陈鹏，刘燕

(青海大学附属医院，西宁810001)

目的 观察乳腺癌组织中趋化因子受体4(CXCR4)的表达变化并探讨其意义。方法 采用SP法检测60例乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中CXCR4表达,分析其表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果 乳腺癌组织中CXCR4表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织，差异有统计学意义(P<0.01)；CXCR4表达与乳腺癌的临床 TNM 分期及淋巴结转移有关(P均<0.05)，与患者年龄、肿瘤大小及病理类型无明显相关性(P均>0.05)。结论 乳腺癌组织中CXCR4表达明显升高，检测CXCR表达有助于乳腺癌的临床诊断及预后判断。

乳腺肿瘤;趋化因子受体4；基质细胞衍生因子-1α受体

乳腺癌是起源于乳腺导管、小叶的恶性肿瘤，严重威胁女性健康。当今社会每年全世界约800万人死于癌症，其中女性最主要的癌症包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌等。乳腺癌的发病率呈逐年递增趋势[1,2]，且发病年龄趋于年轻化[3]，目前乳腺癌的治疗方式仍主要为手术切除治疗，辅以化疗、内分泌治疗、放疗、靶向治疗等综合治疗方法。其早期诊断、早期治疗及预后是现今研究的热点。趋化因子受体4(CXCR4)为趋化因子CXCL12，即基质细胞衍生因子-1α的受体。近年来，有研究显示CXCR4与CXCL12间相互作用，在乳腺癌发生、进展、转移中起一定作用[4]。因而在乳腺癌早诊断、早治疗的同时，能找到可合理预测乳腺癌浸润、转移等生物学行为的标记物，对于判断乳腺癌的预后和指导治疗有重要意义。2012年12月～2014年12月，我们采用SP法检测了CXCR4在乳腺癌组织中的表达，并探讨了其与乳腺癌患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2012年12月～2014年12月青海大学附属医院行乳腺癌根治术的60例女性乳腺癌患者癌组织及癌旁(距肿瘤边缘5 cm)正常组织新鲜标本，患者术前均未行放化疗、内分泌治疗及其他针对肿瘤的特殊治疗，且患者的临床资料完整，术后标本HE切片后经两位高年资病理医师双盲法确诊为乳腺癌及癌旁正常组织。患者均为女性，年龄27～61岁,平均42.1岁，其中≤35岁者16例，>35岁者44例；肿块直径>2 cm者42例,其中2～5 cm者38例，>5 cm者4例，≤2 cm者18例;浸润性导管癌47例、导管内癌13例;按WHO(2012)乳腺肿瘤标准对乳腺癌进行分期：Ⅰ期4例、Ⅱ期27例、Ⅲ期29例；伴腋窝淋巴结转移38例、无腋窝淋巴结转移22例。

1.2 CXCR4表达检测 取60例乳腺癌及癌旁组织石蜡包埋，行HE染色，免疫组化法检测。严格参照试剂盒的说明书进行操作，用试剂盒所带阳性切片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性。取厚度4 μm的甲醛固定、石蜡包埋组织切片，采用SP(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法)免疫组化技术检测 CXCR4表达。二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水,3%H2O237 ℃孵育10 min，PBS冲洗3×5 min。抗原修复：置0.01 mol/L枸橼酸缓冲液(pH 6.0)中煮沸(95 ℃，15～20 min)，自然冷却20 min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3×5 min。封闭：山羊血清用PBS稀释，稀释比例1∶20，封闭1 h。封一抗，室温1 h或过夜孵育。PBS浸泡3次，每次5 min。加入生物素标记二抗工作液室温孵育15 min，在37 ℃下避光孵育1 h。PBS浸泡3次，每次5 min。DAB显色，苏木素复染。常规脱水，透明，干燥，用中性树脂封片。显微镜下观察拍照。阳性结果为棕褐色产物，主要定位于细胞核。每张切片选取5个高倍镜视野，由两名高年资病理医师采用双盲法判读。细胞数≥10%为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。率的比较用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CXCR4在乳腺癌及癌旁组织中表达水平比较 乳腺癌及癌旁组织中CXCR4表达阳性分别为35、7例，阳性率分别为58.33%、11.67%，二者比较，P<0.01。

2.2 CXCR4表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系 CXCR4表达与乳腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移有关，分期越晚，CXCR4阳性表达率越高(P<0.01)；伴淋巴结转移的乳腺癌组织CXCR4阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(P<0.05)。而CXCR4阳性表达率与患者年龄、肿瘤大小及病理类型无明显相关性(P均>0.05)，见表1。

表1 CXCR4表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系

3 讨论

近年来，随着“精准医疗”概念的提出，肿瘤的治疗不仅要求规范化、个体化，更是进入一个诊断治疗一体化的新时代。由于分子生物学的研究进展，乳腺癌分为Luminal(A)、Luminal(B)、基底细胞型、正常细胞型、Her-2过表达型。不同分型的乳腺癌有其规范化的诊疗流程[5]，如何提高乳腺癌的预后成为当下研究热点。乳腺位于体表，其病变能通过查体及临床辅助检查手段，如乳腺浅表B超检查、MRI及乳腺细针穿刺等，使病变相较其他癌肿更易发现，这些均为肿瘤标志物的基础和临床应用研究奠定了基础。

肿瘤标志物为肿瘤组织产生，并可以反映肿瘤细胞存在于生物体内的化学分子。伴随医学检验学发展，肿瘤标志物的应用得到了普及。近年来，对于乳腺癌的肿瘤标志物研究热点为21基因、nm23基因、p53基因、CA19-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)等，目前已发现约50多种趋化因子，20多种趋化因子受体，CXCR4的研究逐渐受到重视。

CXCR4为编码352个氨基酸的受体，属于GPCRs超家族，参与信号传导。CXCR4与Gi蛋白链接，表达于部分特定细胞，如T细胞、巨噬细胞等淋巴细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞表面[6～8]。CXCR4的组成部分为胞外N端、7次跨膜域、细胞外环路(ECL)、细胞内环路(ICL)、胞内C-末端。

趋化因子受体分为四个家族：CXC受体、C受体、CX3C受体。当趋化因子与其相应配体结合后，激活相互偶联G蛋白，引起下游信号激活从而传导。CXCR4是趋化因子CXCL12的受体。CXCL12的cDNA克隆首次是从鼠骨髓基质细胞系中分离得出，而该基因最初命名为SDF-1，故此CXCR12亦被称为SDF-1[9]。SDF-1溶液立体结构为单倍体，包含68个氨基酸，其中3个反平行β折叠和1个C末端α螺旋。

CXCR4与SDF-1构成的生物学轴，SDF-1通过G蛋白与CXCR4结合后，激活下游信号通路开放，进行信息传导[10]。已有报道CXCR4表达于多种肿瘤组织中，如胃癌、乳腺癌、胰腺癌、大肠癌等。是肿瘤组织细胞中趋化因子受体表达最普遍的，大多与肿瘤进展、转移及病变预后有关[8]。张孟贤等[11]提出CXCR4在大肠癌中的表达，与患者年龄、性别、肿瘤类型无关，与肿瘤临床分期、肿瘤复发、无病生存率有关。

本研究结果显示，乳腺癌癌组织中CXCR4表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织，差异有统计学意义；CXCR4表达与乳腺癌的临床TNM分期及淋巴结转移有关，而与患者的年龄、肿瘤大小及病理类型无明显相关性，与研究[12]结果一致。侵袭和转移是恶性肿瘤的标志，能判断患者预后、制定合理的治疗方案。CXCR4与SDF-1的作用机制目前较为统一的认知是表达CXCR4的肿瘤细胞，在SDF-1趋化下，趋化因子的浓度梯度使肿瘤细胞做定向运动，从而形成肿瘤的转移。

现如今学者们的研究已指出，肿瘤组织中确实存在CXCR4，CXCR4表达与肿瘤的进展存在一定作用，但其准确性、可靠性，具体的分子作用机制仍不十分清晰。本实验研究出CXCR4在肿瘤组织中的表达与肿瘤生物学特性间的关系，对于判定肿瘤的预后十分关键。检测CXCR4表达对于乳腺癌的临床诊断及预后判断有一定指导意义。

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青海大学中青年科研基金项目(2014-QYY-5)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.41.027

R737.9

B

1002-266X(2016)41-0079-03

2016-06-10)