湖南永州地区猪弓形虫病的血清学调查

廖光宇，刘 成，肖建华，陈名海，李阳玉，陈名锋

（1.湖南永州市蓝山县畜牧水产局动物卫生监督所，湖南 永州 425800；2.湖南永州职业技术学院生物科学技术系，湖南 永州 425000；3.湖南永州市蓝山县楠市镇动物防疫站，湖南 永州 425800）

试验研究

湖南永州地区猪弓形虫病的血清学调查

廖光宇1，刘 成2，肖建华3，陈名海1，李阳玉1，陈名锋1

（1.湖南永州市蓝山县畜牧水产局动物卫生监督所，湖南 永州 425800；
2.湖南永州职业技术学院生物科学技术系，湖南 永州 425000；
3.湖南永州市蓝山县楠市镇动物防疫站，湖南 永州 425800）

为掌握湖南永州地区规模猪场猪弓形虫的感染情况及流行趋势，2015年3月至2016年2月分别采集湖南永州地区9县2区猪血清样本共1302份，其中:冷水滩区182份，零陵区130份，祁阳县186份，东安县168份，双牌县66份，道县140份，江永县46份，江华县76份，宁远县138份，蓝山县92份,新田县78份。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中的弓形虫抗体。结果显示:1302份猪血清中，阳性样本351份，弓形虫感染阳性率为26.96%，其中规模养猪场感染率较低19.39%，散养户感染率较高36.37%，表明湖南永州地区猪弓形虫病感染具有一定的普遍性。且从不同季节猪的感染情况看，弓形体感染率为夏秋＞冬春；从不同饲养阶段猪的感染情况看，弓形体感染率为育肥猪＞肥猪＞哺乳仔猪。

弓形虫病；血清学；调查；猪

弓形虫病又称弓形体病，是由刚地弓形虫在人体内寄生而导致的人畜共患寄生性原虫病。弓形虫最早于1908年由Nieolle和Manceaux在北非突尼斯的啮齿类动物体内发现，现广泛分布于南极洲以外的世界各地。自1955年我国人兽共患病专家于思庶等从猪体内发现弓形虫以后，全国各地陆续报道了猪群感染本病的情况。据国外报道，人群的平均感染率大约为25%～50%，有人推算全世界约有至少5亿人感染弓形虫。弓形虫病能造成广泛的人畜损害，对免疫抑制的个体和孕妇可造成严重的后果，亦是艾滋病（AIDS）患者的死亡原因 之一。近年来，随着我国养猪业的发展,交通便利、运输频繁、犬猫泛滥等因素,该病流行越来越普遍,并逐渐成为危害养猪业和人畜健康的重要疫病之一。据国外报道,弓形虫病多发于乳猪阶段,死亡率约30%～40%，成年猪急性发病较少，多数呈隐性感染。到目前为止，我国已发现猪、羊、牛、马、骆驼、兔、鸡等均有感染弓形虫病的可能，尤以猪弓形虫病感染最严重，多发于25kg以上的架子猪和育肥猪，乳猪则较为少见。为查明猪弓形虫病在湖南永州地区的流行情况，笔者于2015年3月至2016年2月运用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法（以下简称ELISA法）对湖南永州地区猪弓形虫进行了血清学调查，目的是为防控该病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 主要仪器及器材 酶标仪（MULTISKAN MK3），购自Thermo公司；台式高速冷冻离心机（5810R），购自德国Eppendorf公司。洗涤器，50μL、100μL精确微量移液器，一次性移液器吸头，稀释样品的U型96孔稀释板等。

1.1.2 主要试剂 猪弓形虫IgG抗体诊断试剂盒，购自上海邦奕商贸有限公司，批号为20150108。

1.1.3 待检血清 对湖南永州地区的冷水滩区、零陵区、祁阳县、东安县、双牌县、道县、江永县、江华县、宁远县、蓝山县和新田县共9县2区的52个猪场随机采集1302头猪的血样，用台式高速冷冻离心机（5810R）离心血样，分离血清，血清样品清亮，无溶血，置冰箱4℃保存备用。

1.2 检测方法

1.2.1 样品稀释 用诊断试剂盒样品稀释液将待检血清按100倍稀释（如5μL血清加入495μL样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。

1.2.2 洗涤液配制 诊断试剂盒浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

1.2.3 加样反应 每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100μL）。样品检测孔每孔加已稀释血清样本100μL。37℃避光反应30min后，甩去孔内液体，每孔注满洗涤液洗涤3次，每次均需停留1min后再甩净，拍干。

1.2.4 加酶反应 除空白对照孔外，每孔加酶结合物1滴。37℃避光反应30min后，甩去孔内液体，按1.2.3洗涤操作步骤进行，拍干。

1.2.5 显色反应 加底物液和显色剂各1滴，混匀，37℃避光显色10min，加终止液1滴，终止反应。观察并用酶标仪（MULTISKAN MK3）测定。

1.3 结果判定

用空白孔调零，于450nm（630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450nm）。正常情况下，阴性对照孔A450nm值≤0.10；正常情况下，阳性对照孔A450nm值≥0.3；样品A450nm值大于0.18，判为阳性；样品A450nm值小于0.18，判为阴性。

2 结果

2.1 调查的县（区）及猪场猪弓形虫的感染情况

对湖南永州地区的冷水滩区、零陵区、祁阳县、东安县、双牌县、道县、江永县、江华县、宁远县、蓝山县和新田县共9 县2区的52个猪场血样进行了检测，检测结果见表1。结果显示，湖南永州地区9县2区的猪场生猪均有猪弓形虫的不同程度感染，其中感染程度较高区域为32.96%，平均感染率为26.96%。

表1 永州地区猪弓形虫的感染情况

2.2 不同季节猪弓形虫血清抗体阳性率

在1302份猪血样中，不同季节采集的猪血清弓形虫抗体阳性率变化较大，检测结果见表2。结果显示，夏季弓形虫阳性率最高为41.43%，阳性率最低的冬季为12.81%，从不同季节猪的感染情况看，弓形体感染率为夏秋＞冬春。

表2 不同季节猪血清弓形虫抗体检测结果

2.3 不同饲养阶段猪的感染情况

在1302份猪场血样中，不同饲养阶段猪采集的猪血清弓形虫抗体阳性率变化较大，检测结果见表3。结果显示，育肥猪高达39.55%，肥猪24.72%，哺乳仔猪13.04%。从不同饲养阶段猪的感染情况看，猪弓形体感染率为育肥猪＞肥猪＞哺乳仔猪。

表3 不同饲养阶段猪血清弓形虫抗体检测结果

2.4 不同规模的猪场感染情况

在1302份猪场血样中，不同规模的猪场采集的猪血清弓形虫抗体阳性率变化较大，检测结果见表4。结果显示，规模猪场的猪弓形体感染率明显比散养户低下，规模户感染率平均为19.39%，散养户感染率平均为36.37%。

表4 不同规模猪场血清弓形虫抗体检测结果

3 小结与讨论

3.1 通过猪弓形虫IgG抗体诊断试剂盒检测，目前湖南永州地区猪弓形虫感染阳性率为26.96%,表明湖南永州地区猪弓形虫病感染具有一定的普遍性。夏季弓形虫阳性率最高为41.43%，阳性率最低的冬季为12.81%，从不同季节猪的感染情况看，弓形虫感染率为夏秋＞冬春。不同饲养阶段猪采集的猪血清弓形虫抗体阳性率育肥猪高达39.55%，肥猪24.72%，哺乳仔猪13.04%，猪弓形体感染率为育肥猪＞肥猪＞哺乳仔猪。不同规模猪场之间的抗体阳性率有一定差异，规模户感染率平均为19.39%，散养户感染率平均为36.37%，规模猪场的猪弓形体感染率明显比散养户低下。上述结果与国内外的报道基本一致，表明湖南永州地区猪弓形体病感染在比较普遍，并且感染率极高，给湖南永州地区养猪业的发展和人民健康带来了严重的危害和威胁。

3.2 猪弓形虫在猪群中的感染率很高，隐性率较高，而发病率较低，大多数发病死亡猪都有不同度的继发感染。本检测结果表明，湖南永州地区猪弓形虫的感染率较高，可能与不少区域的养猪业出现了将一个完整的词养管理过程人为地分割成母猪和仔猪饲养，仔猪和架子猪育肥异地进行的多个阶段饲养，从而多出了仔猪和架子猪长途运输的一个应激环节，是本地区猪弓形虫病发生大量增加的一个重要原因。因此，猪场采用全进全出的科学饲养方式，猪的应激减少，卫生条件良好，饲养管理比较有序，猪生活比较有规律，猪的自身免疫力也大大增强，这样使规模猪场感染率明显比散养户降低。

3.3 生的鲜肉等是人类弓形虫病的传染来源，特别是家养犬、猫是不容忽视的传染来源。鉴于弓形虫病对养猪业造成巨大经济损失以及先天性弓形虫病对人类优生优育的重要影响和获得性弓形虫病对免疫功能低下病人的严重危害，有必要对弓形虫病加强防控工作。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.012

作者筒介：廖光宇（1958～），湖南省永州市蓝山县人，大专，兽医师，主要从事动物养殖与疫病防控和动物疫病检疫