儿童急性下呼吸道感染非典型病原体病原学分析

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(1.湖南医药学院检验医学院，湖南 怀化 418000；2.怀化市第一人民医院检验科)

·临床医学·

儿童急性下呼吸道感染非典型病原体病原学分析

周秀萍1*，杨长顺2，林梅1

(1.湖南医药学院检验医学院，湖南 怀化 418000；2.怀化市第一人民医院检验科)

目的调查分析儿童急性下呼吸道感染非典型病原体的流行情况，为临床合理用药提供病原学依据。方法采集1 759例急性下呼吸道感染患儿的血清标本，采用间接免疫荧光法进行呼吸道九联检的检测，得出病原体分布情况，并对其结果进行分析。结果在1 759例儿童急性下呼吸道感染患者中，总阳性率为38.7%，其中检出率最高的是肺炎支原体，占19.6%，其次为嗜肺军团菌12.3%，呼吸道合胞病毒4.1%，未检出Q热立克次体和肺炎衣原体。共发现混合感染患者47例，混合感染率达6.9%。结论本地区儿童急性下呼吸道感染的非典型病原体以肺炎支原体和嗜肺军团菌较常见，亦存在其他病原体感染，不同地区的病原菌分布存在着一定的差异，在临床用药中应根据病原体的不同选择用药。

儿童； 急性下呼吸道感染； 呼吸道九联检； 非典型病原体

急性下呼吸道感染是儿科门诊及住院患者中的常见病及多发病，其感染病原体的种类多，临床表现错综复杂，并且由于儿童免疫系统发育不完善，更易引起多种严重并发症，如呼吸衰竭、心肌炎、心力衰竭等，甚至危及到患者的生命。本研究拟对本地区呼吸道九联检的检测结果进行分析，了解本地区儿童急性下呼吸道感染非典型病原体的分布与流行情况，为临床治疗及合理用药提供可靠的病原学依据。

1 资料与方法

1.1一般资料病例来源为2015年1月～2015年12月期间，在怀化市第一人民医院儿科门诊就诊及住院的0～7岁下呼吸道感染患儿1 759例。空腹抽取静脉血，分离血清，当天完成呼吸道九联检各项目(嗜肺军团菌，肺炎支原体，Q热立克次体，肺炎衣原体，腺病毒，呼吸道合胞病毒，甲型流感病毒，乙型流感病毒，副流感病毒)的检测。

1.2试剂和仪器九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法indirectimmuno fluorescence assay，IFA)，购自郑州安图生物工程股份有限公司。该检测是基于待测样本中的IgM抗体与吸附在载玻片上相应抗原所发生的反应。样本中若存在特异性抗体则与抗原结合不被洗脱，而其他未与抗原结合的抗体在洗涤步骤中被除去。下一步骤中抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白结合，再用水洗去未结合的标记抗体，最后用荧光显微镜观察结果。仪器为BX-51奥林巴斯荧光显微镜。

1.3方法在30 μL 1∶1稀释的血清中加入150 μL吸附剂，混匀，3 000 rpm离心15 min；在载玻片的每孔中加15 μL稀释剂处理后的血清，在另一张载玻片的每孔中加入15 μL不稀释的阳性对照和阴性对照；湿盒内37 ℃温育90 min；PBS冲洗后浸泡其中，水平摇床上摇动10 min，再用蒸馏水蘸洗；晾干，每孔加入15 μL FITC标记物，湿盒内37 ℃温育30 min；重复上述洗涤步骤，加封闭介质，盖上盖玻片，镜检。

1.4结果判断腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及副流感病毒的整个包被孔中有1%～15%细胞的细胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光(在副流感病毒和呼吸道和胞病毒中能同时观察到着色的合胞)；军团菌、衣原体或立克次体中所有的菌体呈现苹果绿色荧光；支原体出现细胞外围苹果绿色荧光。见图1。

2 结 果

2.1九种病原体检测结果在1 759例急性下呼吸道感染患儿中，非典型病原体总的阳性率为38.7%(684/1759)，其中肺炎支原体的检出率最高为19.6%，共检出345例，占到了阳性病例的一半(345/684)，其次为嗜肺军团菌，检出率为12.3%，呼吸道合胞病毒的检出率为4.1%，未检出Q热立克次体和肺炎衣原体，见表1。

2.2混合感染结果共发现混合感染患者47例，混合感染率6.9%，以肺炎支原体合并腺病毒、肺炎支原体合并呼吸道合胞病毒最为常见。

3 讨 论

近年来，随着各种抗生素的广泛应用，细菌如肺炎链球菌等引起的儿童呼吸道感染的感染率有所下降，但研究表明其他非典型病原体的感染率呈上升趋势[1-2]。明确病原体对呼吸道感染的诊断和治疗具有重要的意义，长期以来检测呼吸道感染病原体的“金标准”是分离培养出病原体。由于多数患儿在入院前均已用药，故分离培养阳性率低，同时由于实验条件的限制，细胞培养在许多基层医院没有办法开展。一般情况下当病原体感染人体1～2周后，血清中特异IgM抗体会急剧升高，3～4周左右达到高峰。因此，检测血清中特异IgM抗体可作为急性感染的诊断指标[3]。

表1呼吸道九联检结果图

病原体阳性数阳性率嗜肺军团菌21612.3%肺炎支原体34519.6%Q热立克次体00.0%肺炎衣原体00.0%腺病毒181.0%呼吸道合胞病毒724.1%甲型流感病毒70.4%乙型流感病毒90.5%副流感病毒130.7%总阳性率68438.7%

本组1 759例下呼吸道感染患儿中，共有684例检出病原体特异性IgM抗体，阳性率达38.7%,低于长春[4]，北京[5]地区。其中肺炎支原体的检出率最高，占19.6%(345/1759)，可见引起本地区下呼吸道感染的病原体仍以支原体为主。排在第二位的病原体为嗜肺军团菌占12.3%(216/1759)，分析原因可能是随着生活水平的提高，空调已经成为日常家用电器，由于很多家庭对于空调的清洗及消毒没有引起足够的重视，导致军团菌在空调设备冷却水中检出率较高，如长沙市公共场所集中空调通风系统检出率18%，冷却水的检出率24.3%，冷凝水检出率5.5%[6]。冬季由于天气寒冷，很多家长不愿意带小孩出门，长时间呆在空调房里，故嗜肺军团菌的感染率较其他季节明显升高。军团菌肺炎的临床症状复杂且不具有特异性，临床医生在诊疗时不易判断，此时进行血清病原学检测就显得尤为重要。排在第三位的是呼吸道合胞病毒，该病毒是婴幼儿毛细支气管炎最常见的病原体。本地区未检出Q热立克次体和肺炎衣原体。我国占地面积广，幅员辽阔，儿童急性下呼吸道感染的病原体的分布在不同地区存在着明显差别，研究显示，泸州地区以呼吸道合胞病毒感染为主[7],濮阳地区[8]以肺炎支原体感染为主。因此各地区均需对本地区病原体的流行情况进行调查统计，以指导临床。

通过检测共发现混合感染者47例，混合感染的病原体中以肺炎支原体合并腺病毒、肺炎支原体合并呼吸道合胞病毒最为常见。肺炎支原体的高混合感染率提示，该病原体的感染可促进其他病原体的感染，但具体机制尚有待进一步研究。

本研究中呼吸道常见九种病原体特异IgM抗体的检测的方法为间接免疫荧光法(IFA)，该技术将抗原抗体反应的高特异性和荧光素标记的高敏感性结合起来，能够快速而准确地检测多种病原体，可作为儿童呼吸道感染病因诊断的重要试验手段。该法操作简便，不需要特殊的仪器，各级医院均可开展，且不受是否用过抗生素的干扰，具有良好的应用前景，为防治本地区儿童下呼吸道急性感染提供了重要的病原学依据。

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AnalysisofAtypicalPathogensinChildrenwithAcuteLowerRespiratoryTractInfections

ZHOU Xiuping，YANG Changshun，LIN Mei

(CollegeofLaboratoryMedicine,HunanMedicineUniversity，Huaihua,Hunan418000,China)

ObjectiveTo analyse the distribution of atypical pathogens in children with acute lower respiratory tract infections and give guidance of therapy based on our study.MethodNine tests of respiratory tract of 1 759 patients which serum was collected were examined by indirectimmuno fluorescence assay.The distribution of pathogens was analysed.

ResultsIn 1 759 patients,the total positive rate of pathogens was 38.7%,and Mycoplasma pneumonia was the most common pathogen of infection(19.6%),followed by Legionella pneumophila(12.3%),Respiratory syncytial virus(4.1%).We didn’t detect Richettsia query and Chlamydia pneumoniae.Mixed infections were found in 47 cases,with the positive rate of 6.9%.ConclusionThe common atypical pathogens of acute lower respiratory tract infections are Mycoplasma pneumonia and Legionella pneumophila.Species difference exits in different ages.Treatments should be given based on pathogens.

children; acute lower respiratory tract infections; nine tests of respiratory tract; atypical pathogens

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.021

2015-12-25；

2016-03-30

*通讯作者，E-mail：changshunyang@sohu.com.

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