磁微粒化学发光法检测醛固酮肾素检测限功能与灵敏度研究

张 靖，倪媛媛，张厚亮

天津医科大学静海临床学院(天津 301600)



磁微粒化学发光法检测醛固酮肾素检测限功能与灵敏度研究

张 靖，倪媛媛，张厚亮

天津医科大学静海临床学院(天津 301600)

目的 评价磁微粒化学发光法检测肾素、醛固酮的空白限、检出限、功能灵敏度。方法 根据(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)文件，利用空白样品和系列梯度样品在AutoLumo A2000全自动化学发光系统上检测，来确定配套试剂的空白限、检出限、功能灵敏度。结果 醛固酮的空白限为4.93 pg/mL，检出限为13.08 pg/mL，20%变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为10.0 pg/mL。肾素的空白限为0.482 pg/mL，检出限为1.15 pg/mL，20%变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为1.5 pg/mL。 结论 AutoLumo A2000全自动化学法测定仪测定醛固酮，肾素的空白限、检出限、功能灵敏度的建立为临床诊断提供了有价值信息。

醛固酮；肾素；化学发光法；空白限；检出限；功能灵敏度

醛固酮及肾素的检测从最早的放射免疫法、酶联免疫法，发展到化学发光法，检测方法在不断地改进，而且各个指标的检测手段也都日益科学化、简便化。美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)是目前指定临床试验诊断标准和流程的重要机构，并发布相关试验诊断的操作流程和方法，为临床检验提供重要参考[1]。本实验利用全自动化学发光免疫分析仪，按照《医学实验室质量和能力认可准则CNAS-CL02;2012/ISO15189:2012》[2]、《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明CNAS-CL39》及CLSI的相关文件介绍方法[3]，对醛固酮肾素磁微粒化学发光法检测试剂的空白限(limit of bank,LoB)、检出限(limit of detection,LoD)、功能灵敏度(functional sensitivity，FS)进行研究，探讨其临床应用价值，报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 郑州按图生物股份有限公司生产的全自动化学发光测定仪Autolumo 2000及其配套醛固酮肾素检测试剂(醛固酮批号：150825；肾素批号：150831，均购自郑州安图生物工程股份有限公司)，配套标准品稀释液，置于4℃冰箱保存。

1.2 标本收集 收集天津医科大学静海临床学院新鲜血浆20例(要求为健康的体检者)年龄18～22岁，平均19.7岁，男10例，女10例。分别采血2 mL置于装有EDTA-K2的采血管中，要求标本足量、澄清，无脂血、黄疸、溶血。离心后分离血清。

1.3 实验方法

1.3.1 仪器维护与质控 定期对仪器进行维护与保养，严格按照说明书操作，定期校准，利用质控品进行实验前的室内质控。

1.3.2 建立LoB的程序 要求分析系统稳定状态，试剂、校准物批号不变。但需要实验批和标本间的变异。根据CLSI EP17-A文件进行[4]按ISO推荐在规定水平的I类错误(假阳性)下，规定α=5%，有5%的可能性含有待测物。采用非参数检验，准备5份标准品稀释液，每个样本重复3次，总共做4 d，得到60个数据，将结果由小到大排序，第95百分数即为LoB[1]。

1.3.3 建立LoD的程序 根据CLSI EP17-A文件[4]， 建立LoD时要求标准差来自多个低浓度样本的重复检测，浓度在1～4 LoB之间。准备5份浓度范围为1～4倍LoB的系列临床样本，每个样本重复3次，总共做4 d，得到60个数据，记录数据，将每个项目的60个数据由小到大排列。为了强调II类错误(假阴性)规定β=5%，采用非参数估计LoD[1]。

1.3.4 建立FS FS即日间重复结果变异系数(coefficient of variation,CV)等于20%时所对应的检测量。可用于确定检测系统可报告低值。采用LoD实验中的数据，5个浓度样本每天测3次，总共测4 d，每个样本得到12个结果，计算每个样本的均值和CV%，最接近20%的浓度为FS。

2 结果

2.1 LoB结果 采取非参数检验，将空白样品测定值从小到大排序，第95百分数值即为LoB[1]。P(1-α)=(1-α)%×NB+0.5，其中α为I类错误，设定为5%；P(1-α)为在(1-α)百分数位置的值；NB为重复检测次数。由公式可知，第95百分位数值为空白样本检测值由低到高排列的第57.5位，现将数据摘录如下。各项目空白样品检测结果排序后的第51位～第60位数值见表1。计算各项目第57位的结果即为此项目的LOB，其中醛固酮为4.93(pg/mL)，肾素为0.482(pg/mL)。

表1 醛固酮肾素第51-60位空白值测定结果(pg/mL)

序号醛固酮空白值肾素空白值序号醛固酮空白值肾素空白值513．250．437564．250．476523．480．446574．90．481533．770．447584．970．484544．020．449595．280．496554．020．457605．740．506

2.2 LoD计算 5个浓度在将所在1～4 LoB之间的样本浓度(pg/mL)，将测定结果由小到大排序，第1～10位和第26～35位结果，见表3。根据公式LoD=LoB+Dsβ，其中，Dsβ是中位数值和第5个百分位数值的间距。中位数值所在位置为[N(50/100+0.5)]，即第30.5位置结果，第5百分位数值所在位置为[N(5/100+0.5)]，即为第3.5位置结果。Dsβ=第30.5位的结果-第3.5位的结果[5]，结果醛固酮LoD为13.08(pg/mL)，肾素为1.15(pg/mL),见表2。

表2 梯度样品浓度(pg/mL)

表3 各项目梯度样品第1-10位和第26到35位结果(pg/mL)

序号醛固酮肾素序号醛固酮肾素14．230．222612．780．8824．660．322712．810．8935．080．352812．860．9445．470．412913．32155．580．473013．351．0567．250．483113．421．0677．480．493213．751．1287．870．493313．931．1798．030．523413．991．19108．060．523514．031．2

2.3 FS结果 计算2个项目5个浓度梯度测定结果的平均值CV(表4)，结果醛固酮为10.0(pg/mL)，肾素为1.5(pg/mL)。

表4 2个项目5个浓度态度测定结果的平均值，CV

梯度醛固酮平均值CV/%肾素平均值CV/%第一梯度19．6413．640．4831．44第二梯度13．611．110．85829．44第三梯度6．8325．091．00725．71第四梯度14．5712．191．4420．74第五梯度11．8119．602．16615．12

3 讨论

肾素、血管紧张素、醛固酮三者是一个相连的作用系统，称为肾素-血管紧张素-醛固酮系统，通过对血容量和外周阻力的控制，从而调节人体血压、水和电解质平衡，来维持机体内环境的稳定性。当血压降低时，肾脏开始分泌肾素，肾素可以使血管紧张素原转化为血管紧张素Ⅰ，并在血管紧张素转化酶的作用下生成血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ使血管收缩，导致血压升高，同时也可作为效应分子刺激醛固酮的释放，醛固酮有保钠排钾的作用，能引起血压增高，导致高血压[6]。所以检测肾素醛固酮对疾病的诊断有重要的意义。

医学实验室在应用某种检测系统或检验方法前需要对该系统或方法的分析性能进行评价与分析，选择优良的检测系统或方法是保证被检测者结果真实可靠的前提。随着全自动检测仪器的广泛应用，检验者更要注重完成一个检验项目所涉及的仪器，试剂的组成和检测系统的可靠性、准确性。实际操作中，参考CLSI发布的方法性能评价系列文件对检测方法进行性能评价已经成为趋势。本文中的LoD、LoB、FS均是评价检测系统或检测方法灵敏度性能的指标，但容易与分析灵敏度混淆。张秀明等针对临床实验室，仪器和试剂生产厂商及检验医学期刊中不能正确理解和区别灵敏度和检出限的现象，进行了详细的分析比较，并给出了正确的使用方法[7]。目前大多数实验室都只按常规方法得出LLD。本研究结果显示，醛固酮的空白限为4.93 pg/mL，检出限为13.08 pg/mL，20%变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为10.0 pg/mL。肾素的空白限为0.482 pg/mL，检出限为1.15 pg/mL，20%变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为1.5 pg/mL。本实验参照EP-17A文件得出LoD、LoB、F.S，与常规方法相比具有很大的优势[8]。多次重复检验，可令实验结果的精密度更高；可根据实验数据是否符合正态分布，选择参数检验或非参数检验测定LoD、LoB；使用分析浓度计算，而不选择原始信号结果计算，更符合实验室需要。

综上所述，参照EP-17A文件进行测定是评价检测系统灵敏性的LoD、LoB、FS标准方法。但该方法也存在不足[9-10]：测定LoD时，规定样本浓度在1～4 LoB之间，但未规定检测限样本浓度之间的浓度差，不同浓度差的检测限样本浓度测出的值存在LoD差异，使结果很难统一。随着EP文件的普及，利用此文件检测系统及方法的性能建立及评价已成为首选，也必将成为性能评价方法的金标准。

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责任编辑：牟冬生

Study on Functional Sensitivity and LOD of Aldosterone and Renin by Magnetic Particle Chemiluminescence Detection

Zhang Jing,Ni Yuanyuan,Zhang Houliang

(TheJinghaiHospitalofTianjinMedicalUniversity,Tianjin301600,China)

Objective To evaluate the limit of bank (LoB),limit of detection (LoD) and functional sensitivity (F.S) of aldosterone and renin by the magnetic particle chemiluminescence detection.Methods according to the Laboratory Standards Institute Clinical (CLSI),blank samples and series of gradient samples were detected in the AutoLumo A2000 automatic chemiluminescence system to determine the LoB,LoD and F.S of matching reagent.Results The LoB of aldosterone was 4.93 pg/mL,the LoD of aldosterone was 13.08 pg/mL and F.S of 20% of coefficient of variation (CV) was 10.0 pg/mL.The LoB of Renin was 0.482 pg/mL,the LoD of Renin was 1.15 pg/mL and F.S of 20% of coefficient of variation (CV) was 1.5 pg/mL.Conclusion The limit of bank (LoB),limit of detection (LoD) and functional sensitivity (F.S) of aldosterone and renin by A2000 automatic chemiluminescence system detection can provide useful information for clinical diagnosis.

aldosterone；renin；chemiluminescence；limit of bank；limit of detection；functional sensitivity

张靖(1982- )，女 天津人，主管检验师，主要从事临床检验工作与研究。

R586.24

A

1008-8164(2016)04-0017-03

2016-11-02