肾茶总黄酮抗大鼠慢性细菌性前列腺炎活性研究

陈 涛，杨全伟

武汉市中西医结合医院(湖北 武汉 430022)



·论著·

肾茶总黄酮抗大鼠慢性细菌性前列腺炎活性研究

陈 涛，杨全伟

武汉市中西医结合医院(湖北 武汉 430022)

目的 探究肾茶总黄酮对大鼠的慢性细菌性前列腺炎的治疗效果。方法 随机选择60例成年雄性SD大鼠作为研究对象并将其平均分为6组，通过给予这6组大鼠不同的药物治疗来观察其体内氧化应激水平及炎症因子的变化差异。结果 相对于假手术组，注射大肠埃希菌使模型组大鼠炎症因子TNF-α含量由(36.87±3.02)上升到(102.83±11.64)ng/L，前列腺含量由(21.64±1.91)上升到(72.42±5.88)ng/L和IL-8含量由(7.66±0.62)上升到(20.56±1.69)ng/L和前列腺由(32.63±2.02)上升到(114.75±11.32)ng/L，比较均有显著性差异(P<0.01)。同时模型组前列腺抗氧化酶(SOD)活力由(42±3)下降到(14±3)U/mg(P<0.01)。前列腺脂质过氧化产物(MDA)由(3.3±0.4)上升到(14.2±1.0)(P<0.01)。相对于模型组，各剂量组的肾茶总黄酮均能显著性抑制前列腺和血清TNF-α和IL-8上升(P<0.01)，升高SOD活力并降低MDA水平。结论 肾茶总黄酮具备潜在的抗细菌性前列腺炎活性。

肾茶总黄酮；大鼠；氧化应激；慢性细菌性前列腺炎

肾茶(ClerodendranthusSpicatus(Thunb) c.y.wu ex H.W.Li)为唇形科多年生草本植物，主要产自我国云南南部，富含多种黄酮类成分，具有抗氧化、利尿健肾、保肝和抗肿瘤等多样性的生物活性[1]。肾茶对泌尿系统相关的一系列疾病均有较高的治疗效果，并且对于伴有糖尿病的大鼠在治疗泌尿系统疾病时具有保护其肾脏的功效[2]。研究发现，含有肾茶的方剂分清肾茶片能有效改善细菌性和非细菌性的前列腺炎[3]。而肾茶总黄酮能抑制非细菌性的大鼠慢性前列腺炎[4]。然而，肾茶总黄酮对细菌性慢性前列腺炎的影响尚不完全清楚。本研究通过使用不同剂量的肾茶总黄酮来观察对大鼠慢性细菌性前列腺炎的治疗效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料和仪器 肾茶药材购于武汉市中西医结合医院，取干燥药材，适当粉碎，按照液料比为20∶1，用54%的乙醇在70℃条件下超声提取[5]。过滤，回收滤液至流浸膏，冻干备用。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白细胞介素-8(IL-8)ELISA试剂盒(批号：20151201,20151219)及超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)(批号：20160804)试剂盒均由南京建成生物工程研究所购入。乳酸左氧氟沙星分散片(商品名：全星，0.2 g/片，批号：20150906)。SZ93型双蒸水制备仪(上海市亚荣生化仪器厂)，30BⅣ型粉碎机(常州范群鼎力化工设备有限公司)，AL104型电子天平(上海市梅特勒-托利多仪器有限公司)，Bencbtopk型冷冻干燥机(美国VirTis公司)，KQ5200DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，765型紫外分光光度计(上海市分析仪器厂)。

1.2 动物分组与方法 SPF级雄性健康SD大鼠，体质量200～250 g，6周龄，由华中科技大学同济医学院购入，许可证号：SCXK(鄂)2015-0018。实验大鼠于22±3℃、湿度50%±10%、按照光照12 h，黑暗12 h节律下饲养，自由饮水饮食。标准大肠埃希菌(菌种：ATCC25922)由武汉市中西医结合医院病原实验室提供。随机选取60例成年的雄性SD大鼠作为本次实验的研究对象并将其平均分为6组：对照组、模型组、左氧氟沙星组、高剂量(400 mg/kg)肾茶总黄酮组、中剂量(200 mg/kg)肾茶总黄酮组以及低剂量(100 mg/kg)肾茶总黄酮组。其中对照组大鼠为身体健康的大鼠，剩余5组大鼠均是由以下步骤构建而成：大鼠麻醉后沿下腹部正中线切口，暴露前列腺，向前列腺两侧各注射大肠埃希菌悬液0.1 mL(1.0×108cfu/mL)，制备大鼠的慢性细菌性前列腺炎模型。开始实验后，为对照组大鼠和模型组大鼠灌胃等量的生理盐水进行处理，而左氧氟沙星组大鼠则灌胃浓度为44 mg/kg的左氧氟沙星，高剂量肾茶总黄酮组大鼠灌胃的浓度为400 mg/kg的肾茶总黄酮，中剂量和低剂量肾茶总黄酮组大鼠分别灌胃浓度为200 mg/kg和100 mg/kg的肾茶总黄酮，6组大鼠给药频率均为1次/d。

1.3 指标检测 给药14 d后，处死动物，取大鼠血液1 mL放置于4℃下1 h，然后于4 000 r/min条件下离心10 min，收集血清用于评估各组大鼠血清中TNF-α、IL-8含量。分离前列腺组织，用0.9%氯化钠溶液制备10%组织匀浆用于SOD、MDA水平和TNF-α、IL-8这两类炎症因子进行评估，操作步骤均按说明书进行。

2 结果

2.1 氧化应激结果 与对照组相比较，模型组前列腺组织中SOD活性显著下降而MDA水平则大幅上升(P<0.01)。相较于模型组，高、中、低肾茶总黄酮组前列腺组织中SOD活性有明显的恢复，MDA水平降低(P<0.01)，前列腺的氧化应激状态得到了缓解，且呈现出剂量依赖性，见表1。

组别剂量/(mg·kg-1)SODMDA对照组—42±33．3±0．4模型组—14±3∗114．2±1．0∗1左氧氟沙星组4433±3∗1∗28．1±1．4∗1∗2肾茶总黄酮组40028±11∗1∗2a9．6±0．8∗1∗2a20025±2∗1∗2b10．7±0．9∗1∗2b10019±2∗1∗2c12．3±1．1∗1∗2c

注：与对照组比较，*1:P<0.01；与模型组相比较，*2:P<0.01；a、b、c不同上标之间P<0.05。

2.2 炎症因子浓度 模型组、左氧氟沙星组和肾茶总黄酮组这5组大鼠体内血清与前列腺中的IL-8和TNF-α含量均高于对照组(P<0.01)。与模型组比较，肾茶总黄酮高剂量组和中剂量组大鼠体内IL-8和TNF-α浓度则显著下降(P<0.01)。 其中，在调控前列腺IL-8和TNF-α时，200和100 mg/kg的给药剂量没有显著性差异(P>0.05)，见表2。

表2 6组大鼠炎症因子浓度比较 ng/L)

注：与对照组比较，*1:P<0.01；与模型组相比较，*2:P<0.01；a、b、c不同上标之间P<0.05。

3 讨论

前列腺炎是男性中一种非常普遍的综合征，常表现为骨盆和会阴部的疼痛、尿路刺激等症状[6]，其中慢性细菌性前列腺炎是50岁以下人群中比较普遍的一种类型，它由病原菌引起，呈现迁延不愈，反复发作的特点，严重影响了患者的正常生活[7]。

引起慢性细菌性前列腺炎的发病因素有很多，近些年来的研究显示前列腺炎症是以细胞因子为中介产生的连锁反应。慢性细菌性前列腺炎患者前列腺按摩液中细胞因子的表达水平常发生变化，如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的表达异常。其中TNF-α和IL-8这两类炎症因子的表现最为突出，TNF-α通过促进巨噬细胞释放炎症介质和促进炎症细胞的游走、黏附、局部浸润参与炎症反应。而IL-8则具有促进中性粒细胞等到达患者体内的炎症部位，加重体内组织的损伤的特点[8]。

另一方面，氧化损伤与慢性前列腺炎亦密切相关。正常生理条件下体内生成的自由基将被SOD等抗氧化酶消除，然而当组织受到氧化损伤时，体内抗氧化酶活力下降，自由基富集，脂质过氧化成分MDA含量大幅上升，最终造成前列腺组织的损伤[9]。此外TNF-α和白介素家族可与氧自由基互相促进，使氧化应激加重，前列腺炎的进程加快，形成恶性循环[10]。通过本次研究发现，肾茶总黄酮干预能够有效抑制细菌性前列腺炎大鼠血清及组织中TNF-α和IL-8两类炎症因子的分泌，并抑制氧化应激，恢复抗氧化酶的活性。

综上所述，肾茶总黄酮能够有效抑制大鼠慢性细菌性前列腺炎，其作用机制与调控TNF-α和IL-8两类炎症因子与抑制氧化应激有关。

[1] 丹萍,黄荣桂.肾茶研究新进展[J].海峡药学，2013，25(11)：56-60.

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[3] 张建军,杨琦,王淳,等.分清肾茶片对角叉菜胶致大鼠前列腺炎的治疗作用及对肿瘤坏死因子-α、前列腺素E2的影响[J].中华中医药杂志,2013,28(10):2 909-2 913.

[4] 姜帅,邹德志,徐建平,等.肾茶的传统应用调查与研究进展[J].中国现代中药,2015,17(9):980-987.

[5] 汤须崇,叶静,徐伟,等.猫须草总黄酮的超声提取工艺[J].食品与发酵工艺,2011,37(11):229-234.

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[8] 莫敦胜.磷霉素氨丁三醇散对慢性细菌性前列腺炎大鼠的治疗作用及机制研究[D].南方医科大学,2015.

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[10] Byeon HE,Um SH,Yim JH,et al.Ohioensin F suppresses TNF-α-induced adhesion molecule expression by inactivation of the MAPK,Akt and NF-κB pathways in vascular smooth muscle cells[J].Life Sci,2012,90 (11-12):396-406.

责任编辑：牟冬生

Study on the Protective Effect of Total Flavonoids of Clerodendranthus Spicatus Against Chronic Bacterial Prostatitis in Rats

Chen Tao，Yang Quanwei

(DepartmentofPharmacy,WuhanIntegratedTCMandWesternMedicineHospital,Wuhan430022,China)

Objective To explore the therapeutic action of total flavonoids of Clerodendranthus Spicatus for chronic bacterial prostatitis in rats.Methods 60 adult male SD rats were randomly divided into 6 groups.The oxidative stress and inflammatory factors in rats were observed by the different drug therapy for the six groups.Results Compared with the sham-operation group,the level of TNF-α (from 36.87±3.02 to 102.83±11.64 ng/L) and the prostatic level (from 21.64±1.91 to 172.42±5.88 ng/L) in the model group were increased.The IL-8 (from 7.66±0.62 to 20.56±1.69 ng/L) and the prostatic level (from 32.63±2.02 to 114.75±11.32 ng/L) were significantly enhanced (P<0.01).The activities of prostatic SOD in the model group were significantly decreased from 42±3 to 14±3 U/mg(P<0.01).The prostatic level of MDA were significantly increased from 3.3±0.4 to14.2±1.0 (P<0.01) .Compared with the sham-operation group,the total flavonoids of Clerodendranthus Spicatus in each dose group can suppress the enhancement of the levels of TNF-α and IL-8 in serum and prostate (P<0.01),improve the activities of SOD and decrease the level of MDA (P<0.01).Conclusion The total flavonoids of Clerodendranthus Spicatus are able to exert protective effect against chronic bacterial prostatitis in rats.

total flavonoids of clerodendranthus spicatus;rats;oxidative stress;chronic bacterial prostatitis

湖北省自然科学基金(2015CFB250)。

陈涛(1989- )，男，湖北武汉人，硕士，药师，主要从事药物制剂工作。

R332

A

1008-8164(2016)04-0001-03

2016-09-02