IL-28B基因rs129798600多态性治疗HCV基因型1患者早期应答的关系

许建平,邝永辉

(广东省河源市源城人民医院检验科 517000)



·论 著·

IL-28B基因rs129798600多态性治疗HCV基因型1患者早期应答的关系

许建平,邝永辉

(广东省河源市源城人民医院检验科 517000)

目的 探讨在白细胞介素28B(IL-28B)基因多态性基础上对丙型肝炎病毒(HCV)基因型1患者的持续性病毒学应答(SVR)做出的预测，为患者治疗提供科学参考依据。方法 应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HCV定量值；使用基因测序方法检测rs129798600的基因型。结果 发生完全早期病毒性应答(cEVR)患者的年龄显著低于未发生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例与丙氨酸转氨酶水平则显著高于后者；IL-28B基因型CC和年龄小于40岁为发生cEVR的独立相关因素。结论 HCV rs129798600位点CT基因型的患者，则可以考虑对年龄小于40岁的患者进行PEG-IFN联合利巴韦林治疗，而对其他患者可以进行三联治疗。

丙型肝炎； 多态性； 干扰素； 利巴韦林

丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，80%的丙型肝炎病毒(HCV)感染者可发展成慢性肝炎，如果不治疗大多数患者在20年后可发展成肝硬化，少数可发展成肝癌(HCC)，故HCV是严重威胁人类健康的社会和公共卫生问题,其治疗也成为非常紧迫的问题[1-2]。影响HCV治疗效果的因素既有宿主因素，也有病毒因素。宿主因素包括白细胞介素28B(IL-28B)基因多态性、年龄、性别、种族、肝纤维化程度和肥胖等，病毒因素包括HCV基因型、病毒载量、治疗过程中病毒的动力学等[3]。其中IL-28B基因多态性是慢性丙型肝炎(CHC)患者治疗持续病毒学应答(SVR)最强的预测因素[4-5]。

本研究回顾性分析感染HCV基因型1的中国CHC患者rs129798600基因多态性与完全早期病毒性应答(cEVR)的关系，探讨在IL-28B基因多态性基础上对HCV基因型1患者的持续性病毒学应答(SRV)做出进一步的预测，为治疗前剔除难治性患者提供科学参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究的所有对象来自广东省河源市人民医院2009年5月至2015年4月的门诊患者。诊断标准符合2004年中华医学会肝病学分会制定的《丙型肝炎防治指南》中的规定。纳入标准：HCV抗体阳性且HCV RNA阳性；未接受过针对CHC的治疗；具有实验室检测资料；具备全血和血清标本可进行IL-28B和HCV基因分型检测；接受聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)联合利巴韦林(RBV)标准治疗且具有基线和第12周HCV定量数据。排除标准：人类免疫缺陷病毒(HIV)及其他肝炎病毒感染；酒精性或药物性肝病。选择其中HCV基因型1的患者共356例进行分析。cEVR的判断标准为治疗第12周 HCV RNA较治疗前下降大于2 Log;SVR的判断标准为治疗结束之后12周或者24周HCV RNA检测不到。标本收集及核酸提取：所有标本均在患者治疗前进行收集并分装保存于-80 ℃。基因组DNA及HCV RNA采用Qiagen离心柱试剂盒，按照说明书进行操作。所有参与患者签署知情同意书并获医院伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 血球计数仪及配套试剂由日本希森美康公司提供，全自动生化分析仪由日本日立公司生产，配套试剂由上海复星诊断提供。荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪为美国ABI公司产品7500。基因组DNA及HCV RNA提取试剂盒为深圳凯杰生物技术公司产品。HCV RNA采用实时荧光定量PCR试剂盒为深圳凯杰生物技术公司产品，检测下限为100 IU/mL。

1.3 方法 IL-28B与HCV基因分型：IL-28B及HCV基因分型采用测序法检测，测序的引物提供给Invitrogen公司合成；提取好的IL-28B DNA和HCV RNA直接送Invitrogen公司进行测序及结果分析。

1.4 统计学处理 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。等位基因频率进行哈代-温伯格平衡分析。分类变量采用χ2检验或Fisher精确检验。连续变量之间的比较采用t检验。各因素与SVR的关系采用多元Logistic回归分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 患者基本特征比较 发生cEVR患者的年龄显著低于未发生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例与丙氨酸转氨酶(ALT)水平则显著高于后者，其他指标差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 cEVR与Non-cEVR患者的基本资料

2.2 患者各项指标异常率比较 患者中小于40岁、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT>90 U/L、其他各项指标处于正常参考范围以外(异常)的患者比例见表2。cEVR患者中小于40岁、男性、IL-28B基因型CC、ALT>90 U/L比例显著高于Non-cEVR患者。

表2 cEVR与Non-cEVR患者各项指标异常率比较[n(%)]

2.3 与cEVR相关的独立因素 以cEVR为因变量，患者中小于40岁、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT大于90 U/L、其他各项指标异常为自变量进行Logistic条件回归分析，只有IL-28B基因型CC和年龄小于40岁为发生cEVR的独立相关因素。见表3。

表3 cEVR相关因素的多元Logistic条件回归分析

3 讨 论

目前针对CHC的标准治疗方案为聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)联合利巴韦林(RBV)，但SVR的患者只有54%～63%，感染HCV基因型1的患者SVR率仅为40%～50%[1-2]。2006年一项根据早期病毒学应答的差异而采用不同疗程治疗基因1型CHC的研究，在基因1型患者中,A组和B组的SVR分别只有28%和44%[4-6]。

以往的研究表明，PEG-IFN联合RBV治疗CHC的主要影响因素为HCV基因型，感染HCV基因型1的患者SVR显著低于感染其他基因型的患者[1]。但在中国IL-28B基因多态性是影响治疗效果的最重要因素，中国人感染HCV基因型1的患者SVR却显著高于欧美人群[5]。其原因是患者IL-28B基因rs129798600位点CC型CHC患者接受PEG-IFN联合RBV治疗时具有更高的SVR[4]，中国人CC型频率显著高于CT型频率，而SVR最差的TT型在中国人群中比例极低[7]。即便IL-28B基因rs129798600位点CC型具有更高的SVR，仍然有相当比例的HCV基因型1且rs129798600位点CC型的CHC患者无法产生SVR。鉴于cEVR是SVR非常重要的指标，也是判断治疗是否有效的基本依据，本文分析了HCV基因型1患者接受PEG-IFN联合RBV治疗时cEVR与患者年龄、性别、rs129798600基因型、HCV RNA载量以及常规肝功能指标的关系，发现年龄和rs129798600基因型与cEVR独立相关，这一结论与其他研究一致[5,8]。

本研究结果表明，rs129798600位点CT型患者，则可以考虑对年龄小于40岁的患者进行PEG-IFN联合RBV治疗，对其他患者进行三联治疗。然而，本研究结果仅仅是初步结果，这一方案是否具有临床应用价值还需要大量的临床验证进行支持。美国肝脏病学会于2011年的更新指南中推荐采用三联疗法进行治疗，即在PEG-IFN和RBV联合治疗的基础上增加直接抗病毒治疗[9]。即使采用三联疗法，IL-28B基因多态性仍然是影响治疗效果的最重要因素[10]。考虑到三联疗法的昂贵成本、不良反应及可能出现的病毒耐药，对HCV基因型1的患者在治疗之前进行分类，选择合适的患者接受合适的治疗方案，在临床上具有重要意义。

总之，本研究结果初步表明，IL-28B基因多态性可以为感染HCV基因型1的CHC患者的治疗方案提供进一步的信息，对CHC患者的个性化治疗具有重要参考价值。

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[2]Manns MP,McHutchison JG,Gordon SC,et al.Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2a plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C:a randomized trial[J].Lancet，2001，358(9286):958-965.

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Research of IL-28B gene rs129798600 polymorphism in the treatment of HCV genotype 1 patients with early response

XUJianping,KUANGYonghui

(YuanchengPeople′sHospitalHeyuanCity,Heyuan,Guangdong517000,China)

Objective To explore the prediction of sustained virological response(SVR)in the patients with hepatitis C virus(HCV)genotype 1 based on the polymorphism of IL-28B gene to provide scientific reference basis for the treatment of the patients.Methods the quantitative value of HCV was detected by fluorescence quantitative PCR method,and the genotype of rs129798600 was detected by gene sequencing method.Results The age in the patients with cevr was significantly lower than that in the patients with no cevr(Non-cEVR),while the male proportion and the level of ALT level were significantly higher than those in the latter; IL-28B genotype CC and age less than 40 years old were independent related factors of cEVR occurrence.Conclusion In the patients with HCV rs129798600 site CT genotype,it can be considered that the PEG-IFN combined RBV treatment is conducted in the patients aged less than 40 years old,while the other patients could be treated by the triple therapy.

HCV; polymorphism; interferon; ribavirin

许建平，男，主管技师，主要从事临床分子检验研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.018

A

1673-4130(2016)23-3288-03

2016-03-07

2016-05-25)