丁吡吗啉对烟草黑胫病的防治效果研究

徐传涛， 薛 冬， 王 川， 王李芳， 赵锦超， 屈 旭

(1.四川省烟草公司泸州市公司， 四川 泸州 646000；2.青岛中烟种子有限责任公司， 山东 青岛 266100)



丁吡吗啉对烟草黑胫病的防治效果研究

徐传涛1， 薛 冬1， 王 川1， 王李芳1， 赵锦超1， 屈 旭2*

(1.四川省烟草公司泸州市公司， 四川 泸州 646000；2.青岛中烟种子有限责任公司， 山东 青岛 266100)

通过菌丝生长速率法测定丁吡吗啉对烟草黑胫病菌的EC50为2.19 mg·L-1。温室盆栽试验表明，丁吡吗啉600、800、1 200 mg·L-1对烟草黑胫病的防效分别为：(57.7±3.8)%、(67.7±4.8)%和(74.4±1.1)%。田间试验发现，丁吡吗啉540、864、1 080 g·(hm2)-1灌根处理对烟草黑胫病的防效分别为(57.4±6.5)%、(66.7±4.8)% 和(71.8±2.9)%。以上研究表明，丁吡吗啉可用于防治烟草黑胫病。

丁吡吗啉； 烟草黑胫病； 防治效果

烟草黑胫病(Phytophthoraparasiticavar.nicotiane)是烟草生产上最具毁灭性的病害之一。1896年，Breda de Haan 在印尼爪哇烟草上首次发现，主要侵染烟草根和茎基部，故称“黑胫病”，世界各主要烟区均报道过烟草黑胫病的发生。目前该病已经遍布温带、亚热带和热带各烟区(朱贤朝等，2002)。该病害在我国主要产烟区均有不同程度的发生，其中发生较重的省(自治区)有河南、山东、四川、云南，在长江以南烟区由于烟草黑胫病又常与烟草青枯病混合发生，更加重了对烟草的为害。据统计，烟草黑胫病年发病面积约76 373 hm2，造成的产量损失约2 869.26 万kg，产值损失超过1.23亿元，造成的经济损失仅次于烟草病毒病(陈瑞泰等，1997)。目前我国防治烟草黑胫病主要以化学药剂为主,常用药剂有甲霜灵，烯酰吗啉(DMM)，霜霉威，甲霜灵·锰锌等。

丁吡吗啉(E-3-(2-氯吡啶-4)-基)-丙烯酰吗啉)是中国农业大学、江苏耕耘化学有限公司和中国农业科学院植物保护研究所联合开发的一种具有自主知识产权的新型杀菌剂(秦维彩，2010)。有关丁吡吗啉的抑菌谱和作用机理、作用方式已有相关的报道，丁吡吗啉对致病疫霉(Phytophthorainfestans)、辣椒疫霉(PhytophthoracapsiciLeonian)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)有较好的抑菌效果(陈小霞等，2007)；温室盆栽试验表明，丁吡吗啉对番茄疫病具有很好的保护防治效果(黄雄英等，2007)；丁吡吗啉对常见卵菌病害有很好的防治效果，如番茄晚疫病、黄瓜霜霉病、辣椒疫病等，还具有低毒低成本的特点(齐淑华等，2007)；丁吡吗啉通过作用于线粒体复合物Ⅲ的方式，抑制辣椒疫霉的呼吸作用(李畅，2009)。为研究丁吡吗啉对烟草黑胫病的防治效果,寻找防治烟草黑胫病的新药,本文开展了丁吡吗啉对烟草黑胫病菌毒力和防效的研究, 以期为应用丁吡吗啉防治烟草黑胫病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

96%丁吡吗啉原药(Pyrimorph)，由中国农业大学理学院提供。96.2%烯酰吗啉原药(Dimethomorph)，由江苏耕耘化学有限公司提供。供试药剂先用二甲基亚砜溶解，再用无菌蒸馏水配成1 000 mg·L-1母液备用。

供试菌株: 采自中国农业科学院烟草研究所即墨实验基地，菌株分离方法见参考文献(方中达，1998)，经鉴定为烟草黑胫病菌(0号小种)(Phytophtoraparasiticavar.nicotianae)，于燕麦培养基培养保存 (28 ℃,4 d)。

燕麦培养基：将30 g燕麦于1 000 mL蒸馏水中煮沸，过滤，加入18 g琼脂，于120 ℃灭菌20 min。

黑胫病菌谷制备：小米谷子加水煮开至半数谷粒呈开花状，装入500 mL三角瓶，于120 ℃灭菌30 min。无菌条件下取1 cm×1 cm的黑胫病菌菌块转接到含有谷子的三角瓶内，28 ℃培养14 d备用。

1.2 试验方法

1.2.1 对烟草黑胫病菌菌丝生长影响 采用菌丝生长速率法，将在燕麦培养基上培养菌龄一致的黑胫病菌株，在距菌落中心等距、菌丝生长均匀处用直径5 mm的打孔器，打取菌圆饼,移到含有丁吡吗啉或烯酰吗啉的燕麦平板上。其中丁吡吗啉终浓度为0、 0.5、 1、 2、 5、10、 20 mg·L-1，烯酰吗啉终浓度为0.05、0.1、0.25、0.5、1、5 mg·L-1，每个处理重复4次。28 ℃ 黑暗条件下培养5 d，用(自动菌落分析仪)测定菌落直径，按公式(1)计算各浓度药剂对菌丝生长的抑制率(%),DPS统计软件获得毒力回归方程及EC50值。

(1)

1.2.2 温室盆栽条件下丁吡吗啉对烟草黑胫病的防治效果 烟苗移栽到直径10 cm，高10 cm的花盆中，用灭菌土壤、草炭与珍珠岩培养(V∶V∶V=2∶2∶1)，每盆1株。移栽缓苗后于根部加入菌谷10 g·株-1，将烟苗置于人工气候室内培养，白天30 ℃，黑夜28 ℃，光照∶黑暗(12 h∶12 h),相对湿度95%。，使烟苗发病。在黑胫病发病前使用药剂对烟苗进行灌根处理。所用药剂为浓度分别为600、800和1 200 mg·L-1的丁吡吗啉，对照药剂为浓度800 mg·L-1的烯酰吗啉，用药量为10 mL·株-1。0、7 d各施药一次,共计2次，每个处理10株，重复3次，14 d后调查发病情况，计算病情指数。

病级分级方法，0级：全株无病；1级：茎部病斑不超过茎围的三分之一，个别叶片萎蔫；3级：茎部病斑不超过茎围的二分之一，或半数以下叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑；5级：茎部病斑超过茎围的二分之一，或半数以上叶片轻度凋萎；7级：茎部病斑环绕茎围，或三分之二以上叶片凋萎；9级：病株全部叶片凋萎或枯死。

1.2.3 田间防治效果 供试药剂：21%丁吡吗啉油悬浮剂A(实验室自制), 50%烯酰吗啉可湿性粉剂B(巴斯夫欧洲有限公司)。药剂使用剂量,A1为21%丁吡吗啉油悬浮剂540 g·(hm2)-1，A2为21%丁吡吗啉油悬浮剂864 g·(hm2)-1，A3为21%丁吡吗啉油悬浮剂1 080 g·(hm2)-1；B为50%烯酰吗啉可湿性粉剂300 g·(hm2)-1； CK为清水。

实验地点：中国农业科学院烟草研究所即墨实验基地烟草黑胫病病圃。

供试品种：小黄金

于烟草黑胫病发病前进行灌根处理，0、7 d各施药一次，50 mL·株-1。小区面积30 m2，随机排列，重复4次。

药效调查：第二次药后14 d调查1次，记录各烟株的病级，计算病情指数和防治效果，防治效果采用新复极差测验进行统计分析

调查方法为：采用五点取样法，每点调查10株，记录调查总株数及各级病株数，病级分级方法与温室相同(中华人民共和国农业部农药检定所,2004)。

2 结果与分析

2.1 对烟草黑胫病菌菌丝的抑制效果

丁吡吗啉、烯酰吗啉对烟草黑胫病菌菌丝的抑制效果见表1。室内抑菌试验表明，丁吡吗啉、烯酰吗啉对烟草黑胫病菌丝生长抑制的EC50分别为2.19、1.32 mg·L-1。丁吡吗啉对烟草黑胫病菌菌丝生长抑制的EC50大于烯酰吗啉对烟草黑胫病菌菌丝生长速率抑制的EC50值，表明在离体培养基培养条件下，丁吡吗啉对烟草黑胫病菌丝生长的抑制作用低于对照药剂烯酰吗啉。

表1 丁吡吗啉、烯酰吗啉对烟草黑胫病菌丝生长抑制

Table 1 Inhibting of mycelial growth of tobacco black shank by Pyrimorph and Dimethomorph

药剂名称回归方程EC50/mg·L-1相关系数r丁吡吗啉Y=4.3457+1.9213X2.190.99烯酰吗啉Y=4.7788+1.8465X1.320.96

2.2 温室盆栽试验

温室盆栽试验结果见表2，丁吡吗啉600、800和1 200 mg·L-1对烟草黑胫病防治效果分别为(57.7±3.8)%、(67.7±4.8)%和(74.4±1.1)%。对照药剂烯酰吗啉800 mg·L-1对烟草黑胫病防治效果为(64.1±2.9)%。由试验结果可知，随着药剂浓度的增加，对烟草黑胫病的防治效果逐渐升高；温室盆栽条件下，相同浓度的丁吡吗啉与烯酰吗啉对烟草黑胫的防效差异不显著，说明在活体条件下丁吡吗啉与烯酰吗啉防治烟草黑胫病的活性相当。

表2 丁吡吗啉、烯酰吗啉对烟草黑胫病的防治效果1)

Table 2 Control efficiency of Pyrimorph and Dimethomorph against tobacco black shank

处理药剂浓度/mg·L-1病情指数防治效果/%CK57.8烯酰吗啉800.020.764.1±2.9BCbc丁吡吗啉600.024.457.7±3.8Cc丁吡吗啉800.019.367.7±4.8ABb丁吡吗啉1200.014.874.4±1.1Aa

1)同列数据后不同大写字母表示差异达0.01极显著水平，不同小写字母表示差异达0.05显著水平。

2.3 田间防治效果

田间防治效果见表3。第一次施药后14 d ，21%丁吡吗啉油悬浮剂540 、864、1 080 g·(hm2)-1对烟草黑胫病防效分别为(57.4±6.5)%、(64.7±5.3)%、(70.4±4.8)%，50%烯酰吗啉可湿性粉剂375 g·(hm2)-1的防效为(62.8±3.8)%；1%极显著水平条件下各处理间差异不显著。药后观察, 各处理烟株均未出现药害症状。说明21%丁吡吗啉油悬浮剂对烟草植株安全。

表3 丁吡吗啉、烯酰吗啉对烟草黑胫病的田间防效1)

Table 3 Field control efficiency of Pyrimorph and Dimethomorph against tobacco black shank

处理药剂浓度/g·(hm2)-1病情指数防治效果/%CK67.6烯酰吗啉375.025.162.8±3.8Aab丁吡吗啉540.028.557.4±6.5Ab丁吡吗啉864.023.664.7±5.3Aab丁吡吗啉1080.019.870.4±4.8Aa

1)同列数据后不同大写字母表示差异达0.01极显著水平，不同小写字母表示差异达0.05显著水平。

3 结论与讨论

烟草黑胫病菌是半水生的兼性腐生菌，喜高温高湿，主要分布于土表0-5 cm处，在茎基部和根系上发生侵染，且现蕾前为感病阶段，根据这些特点，结合我国烟草生产实际，防治烟草黑胫病的主要方法是在移栽后3-6周，采用向茎基部及土表浇灌，实施局部保护(朱贤朝等，2002)。

甲霜灵是我国目前使用最为广泛的烟草黑胫病防治药剂，但其对病原菌的作用位点单一，容易造成病原菌抗性升高(袁宗胜等，2001)。目前研究表明，连续使用甲霜灵及其复配制剂后，已导致烟草黑胫病菌对甲霜灵的抗药性升高(马国胜等，2001)。烯酰吗啉(DMM)是一种肉桂酸类化合物的衍生物,是一种新的防治霜霉属(Peronosporales)病原真菌病害的高效内吸性杀菌剂,在实际应用中, 烯酰吗啉是继甲霜灵之后防治卵菌病害的又一种理想的杀菌剂, 特别适合于苯酰胺类杀菌剂抗性病原个体占优势的田间进行抗药性治理。虽然烯酰吗啉作用方式独特, 但因其作用位点单一仍不可避免易使病原菌产生抗药性(黄青春等，2000)。

目前烯酰吗啉已经成为烟草农药使用推荐目录上的推荐产品，但由于其应用成本较高，烟农接受程度较低。丁吡吗啉是我国自主研发，拥有完全自主知识产权的新型杀菌剂，其作用位点特殊，制造成本低廉，通过丁吡吗啉对烟草黑胫病菌丝生长抑制试验、盆栽试验和田间试验表明，丁吡吗啉对烟草黑胫病菌具有很好的抑制效果，生产上可以与甲霜灵、烯酰吗啉等药剂交替使用，以便延缓药剂抗性，提高防治效果。

陈瑞泰,朱贤朝,王智发,等,1997.全国16个主产烟省(区)烟草侵染性病害调研报告[J].中国烟草科学,4:1-7.

陈小霞,袁会珠,覃兆海,等,2007.新型杀菌剂丁吡吗啉的生物活性及作用方式初探[J].农药学学报,9(3):229-234.

方中达,1998.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社.

黄雄英,袁会珠,覃兆海,等,2007.丁吡吗啉对致病疫霉的作用机制初探[J].农药学学报,9(4):376-382.

黄青春,叶钟音,2000.烯酰吗啉(DMM)的特性及其作用机制[J].农药科学与管理,21(5):28-31.

李畅,2009.新型杀菌剂丁吡吗啉的作用机理研究[D].北京:中国农业大学.

马国胜,高智谋,陈娟,2001.烟草黑胫病研究进展[J].烟草科技,(9):44-48.

秦维彩,2010.丁吡吗啉对辣椒疫霉菌的作用方式及作用机理探讨[D].合肥:安徽农业大学.

齐淑华,周夫辰,赵梅素,等,2007.20%丁吡吗啉悬浮剂对番茄晚疫病防效的初步研究[C]∥中国植物保护学会.植物保护与现代农业——中国植物保护学会2007年学术年会论文集.北京：中国农业科学技术出版社.

中华人民共和国农业部农药检定所,2004.农药田间药效试验准则(二)[S].北京:中国标准出版社:217-221.

袁宗胜,张广民,刘延荣,等,2001.烟草黑胫病菌对甲霜灵的敏感性测定[J].中国烟草科学,22(4):9-12.

朱贤朝,王彦亭,王智发,2002.中国烟草病害[M].北京:中国农业出版社:21-36.

(责任编辑：陈晓雯)

Control efficiency of Pyrimorph against tobacco black shank

XU Chuan-Tao1, XUE Dong1, WANG Chuan1, WANG Li-Fang1, ZHAO Jin-Chao1, QU Xu2*

(1.LuzhouTobaccoCompany,LuZhou,Sichuan646000,China;2.QingdaoZhongyanTobaccoSeedCo.Ltd.,Qingdao,Shandong266101,China)

Pyrimorph could strongly inhibit mycelial growth of tobacco black shank, with the EC50value of 2.19 mg·L-1. The greenhouse tests showed that the control efficiency of Pyrimorph with concentration of 600, 800, 1200 mg·L-1against tobacco black shank was (57.7±3.8)%, (67.7±4.8)% and (74.4±1.1)% respectively. While the field control efficiency of Pyrimoph with concentration of 540, 864,1 080 g·(hm2)-1was (57.4±6.5)%, (66.7±4.8)% and (71.8±2.9)% respectively. The results indicated that Pyrimorph could be used to control tobacco black shank disease.

Pyrimorph； tobacco black shank； control efficiency

2016-04-06; 发表日期： 2016-10-31

徐传涛(1984-)，硕士。研究方向：植物保护。Email：chuantao.x@gmail.com。*

S482.2

A

1001-4276-(2016)01-0078-05

徐传涛,薛冬,王川,等,2016.丁吡吗啉对烟草黑胫病的防治效果研究[J].武夷科学，32：78-82.