下颌持续前导对成年大鼠髁突软骨骨形态发生蛋白表达及超微结构的影响

杨帅 李雪 高洁 蔡毅志 李荣慧 王明国

1.潍坊医学院口腔医学院，潍坊 261053；2.潍坊口腔医院口腔科，潍坊 261000；3.中国人民解放军第401医院口腔科，青岛 266071；4.山东大学口腔医学院，济南 250012；5.山东大学附属济南市中心医院口腔科，济南 250013

·髁突软骨专栏·

下颌持续前导对成年大鼠髁突软骨骨形态发生蛋白表达及超微结构的影响

杨帅1李雪2高洁3蔡毅志4李荣慧4王明国5

1.潍坊医学院口腔医学院，潍坊 261053；2.潍坊口腔医院口腔科，潍坊 261000；3.中国人民解放军第401医院口腔科，青岛 266071；4.山东大学口腔医学院，济南 250012；5.山东大学附属济南市中心医院口腔科，济南 250013

目的 观察成年期大鼠在下颌持续前导作用下髁突软骨的改建以及超微结构的变化。方法 将30只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组，实验组佩戴上颌斜面导板，对照组不做任何处理，分别在第3、7、14、21、30 天处死动物并取材，免疫组织化学染色检测骨形态发生蛋白2（BMP-2）在髁突中的表达及分布，透射电镜观察髁突软骨细胞的超微结构，Micro CT分析髁突骨质的变化。结果 与对照组相比，实验组髁突中部和后部软骨增生明显，软骨细胞BMP-2阳性细胞率及灰度值在第7天开始增多，随时间延长而增强，髁突软骨细胞的超微结构出现细胞核固缩，核周微丝变少、脂滴变小、内质网腔隙肿胀、细胞外基质增宽变多等。Micro-CT显示实验组的新生骨和骨小梁厚度、骨小梁数量和分离度随时间延长而增加。结论 在下颌持续前导下，成年期大鼠髁突软骨出现增生性改建，并存在BMP-2的高表达。

髁； 软骨； 超微结构； 骨形态发生蛋白

1 材料和方法

1.1 实验动物和材料

同源性9周龄成年SD大鼠30只，均为雄性，质量250～300 g，由山东鲁抗医药股份有限公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2009-0017。饲养条件：室内自然光照，自然通风，温度20～25 ℃。

格鲁玛齿科酸蚀剂（Heraeus Kulzer Dental）（贺利氏古莎齿科有限公司，德国），可乐丽菲露光固化复合树脂（可乐丽公司，日本），BMPs单克隆抗体、SABC免疫组织化学试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），显微镜及显微成像系统（BX51TPHD-J11型，奥林巴斯公司，日本），多功能真彩色细胞图像分析管理系统（Image-Pro Plus型，Media Cybernetics公司，美国），透射电镜（transmission electron microscope，TEM）（JEM-100CX型，Delong公司，美国），Micro CT（SkyScan 1176 型，Bruker公司，比利时）。

1.2 实验设计和方法

本实验采用随机对照动物实验，于2014年3月—2015年8月在山东大学口腔医院山东省口腔生物医学重点实验室完成。30只成年SD大鼠随机分为实验组和对照组，实验组佩戴自制上颌斜面导板，对照组不做任何处理，在相同环境下饲养，在佩戴导板后的第3、7、14、21、30天分别处死6只动物，切取髁突，一侧髁突切取切片进行苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE）和免疫组织化学染色，另一侧进行Micro CT检测和透射电镜观察。

1.2.1 上颌斜面导板动物模型的制备和取材 大鼠适应性喂养7 d，1 mL·kg-1戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，牵拉大鼠下颌使口持续张开以保证良好的视角，清洁大鼠上前牙，酸蚀，树脂粘接，在舌侧面形成2 mm的导板，使下颌产生向前3.5 mm和向下3 mm的前伸位移，并且保证斜面导板与上颌咬合平面呈20°～25°。实验过程中对SD大鼠的下颌前伸矫治器的配戴适应情况进行严密监控，一旦发现有损坏和脱落，及时修理和安装，使其不影响下颌持续性前伸的矫治效果。按相应时间点（3、7、14、21、30 d）处死大鼠，获取标本。

1.2.2 免疫组织化学染色检测BMP-2的表达 多聚甲醛固定后的髁突软骨常规脱水石蜡包埋，髁突矢状面低温连续切片，BMP-2免疫组织化学染色（SABC法），在显微镜下应用多功能真彩色细胞图象分析管理系统Image-Pro Plus对样本的BMP-2染色结果进行图像分析，每个样本分别选取各组髁突软骨前、中、后部3个区域进行分析，计算BMP-2阳性细胞率以及所有阳性细胞的灰度值之和。

1.2.3 TEM观察髁突软骨细胞的超微结构 将取下来的标本于体积分数2.5%的戊二醛在4 ℃的环境中固定2 h，然后用缓冲液多次清洗，再用体积分数1%的锇酸与4 ℃的环境中固定 2 h，切取1 mm切片行HE染色，为TEM行超微定位，然后制成超薄切片，JEM-100CXTEM观察髁突软骨细胞的超微结构。1.2.4 Micro CT分析髁突骨质的变化 将标本固定于SkyScan 1176 Micro-CT的特制的样本床内，设置扫描条件为50 kV、500 μA，空间分辨率设定为18 μm，像素1 336×2 000，曝光时间为225 ms，角度增益为0.7°，扫描后采用NRecon（Version:1.6.3.3）软件重建CT图。CTAn（Version:1.10.11.0）分析软件对样品校准霍氏值（Holzknecht’s unit，HU）和密度，检测其骨痂总体积（total callus volume，TV）、矿化骨总体积（mineralized callus volume，BV）、骨小梁厚度（trabecular thickness，Tb.Th）、骨小梁数量（trabecular number，Tb.N）、骨小梁分离度（trabecular separation，Tb.Sp），并重建ROI三维图。

1.3 统计学分析

采用SPSS 15.0软件进行分析。实验组和对照组组间比较用t检验，组内比较用单因素方差分析。

2 结果

30只实验大鼠均健康存活，无死亡和感染情况发生。

2.1 成年大鼠髁突软骨的组织形态学变化及软骨厚度变化

实验组动物的髁突软骨解剖取出后，可见其表面粗糙不光滑，与对照组软骨组织表面有明显的差别。与同一时间点对照组相比较，实验组的髁突中部和后部软骨增生明显（P<0.05），前部软骨厚度无明显差异（P>0.05）。实验组髁突总体积随改建时间呈增大趋势。髁突软骨的中后部组织中的纤维层未发现明显差异；实验组增殖层的细胞层数显著增加且细胞核体积增大，钙化软骨层细胞的体积变大，肥大层细胞层数增加且细胞外基质也增加（图1）。各时间点髁突软骨厚度的比较见表1。

图1 大鼠髁突软骨组织的改变 HE × 10Fig 1 Variations of condylar cartilage of rats HE × 10

表1 大鼠髁突软骨厚度的变化Tab 1 Variations of condylar cartilage thickness of rats μm

2.2 BMP在大鼠髁突软骨中的表达

BMP在大鼠髁突软骨中表达的阳性细胞率和灰度值结果见表2、表3。在镜下，BMP阳性染色结果表现为深染的棕色颗粒。对照组中，髁突软骨组织内BMP阳性细胞主要分布于过渡层和肥大层，以肥大层表达最强，增殖层、钙化软骨层中的软骨细胞和成骨样细胞也偶可见BMP表达，纤维层为阴性表达。对照组各时间段髁突软骨内BMP的阳性细胞率和阳性细胞灰度值无统计学差异（P>0.05）。实验组中，第3天BMP染色较弱，肥大层、过渡层有BMP阳性细胞散在分布，与对照组相比，其阳性细胞率和灰度值无统计学差异（P>0.05）；第7天时BMP染色强度逐渐增强，灰度值高于对照组（P<0.05），而阳性细胞率无统计学差异（P>0.05）；第14天开始，BMP阳性细胞率和灰度值均高于对照组（P< 0.05），第14天后随时间的延长，阳性细胞率和灰度值呈现增加的趋势，大量深染的阳性细胞不仅存在于过渡层和肥大层内，也出现在增殖层和钙化软骨层中，纤维层中偶可发现阳性细胞。21 d时阳性细胞率与灰度值比14 d时进一步增加（P<0.05），与对照组比较有统计学差异（P<0.05），阳性细胞广泛分布在过渡层与肥大层，对照组阳性细胞在肥大层散在分布。30 d时阳性细胞率和灰度值达到最高峰，高于对照组（P<0.05）。

表2 成年大鼠髁突软骨细胞内BMPs阳性细胞率Tab 2 The rate of BMPs positive cells in condylar cartilage %

表3 成年大鼠髁突软骨内BMPs灰度值Tab 3 Gray value of BMPs in condylar cartilage

2.3 髁突软骨细胞超微结构的变化

图2 髁突软骨细胞超微结构的变化 TEM × 15 000 Fig 2 Ultrastructural changes of condylar cartilage cells TEM × 15 000

髁突软骨细胞超微结构的变化见图2。对照组大鼠的髁突软骨肥大层细胞呈现典型透明软骨细胞的特征，细胞形态为卵圆形，细胞膜表面有微绒毛突起，糖原颗粒含量较少，细胞质含有较多的粗面内质网，细胞外基质含有大量的蛋白多糖颗粒及细小纤维，与细胞外基质纤维相连接。与对照组相比，3、7 d时细胞结构与对照组相比改变不明显，14 d时实验组大鼠的髁突软骨细胞的超微结构发生了明显改变，包括髁突软骨细胞体积变大，细胞核固缩，21 d时内质网腔隙肿胀，脂滴变小甚至消失，核周微丝显著变少且不规则，30 d时细胞外基质增宽变多，并在细胞外间隙出现了大片空白区域。

2.4 下颌骨髁突骨质参数的变化

Micro-CT观察成年大鼠髁突变化见图3。

2.4.1 TV与3 d组相比较，对照组TV值随时间延长无明显变化（P＞0.05），实验组TV值随时间延长TV值增加（P<0.01）（表4）。

2.4.2 BV与3 d组相比较，对照组BV随时间延长无明显变化（P＞0.05），实验组BV随时间延长先降低然后升高（P<0.05）（表5）。

2.4.3 Tb.Th与3 d组相比较，对照组Tb.Th随时间延长无明显变化（P＞0.05），实验组Tb.Th在14、30 d时变化明显，其中30 d时显著增加（P<0.01）（表6）。

2.4.4 Tb.N与3 d组相比较，对照组Tb.N随时间延长无明显变化（P＞0.05），实验组随时间延长先降低然后升高（P<0.05）（表7）。

2.4.5 Tb.Sp与3 d组相比较，对照组Tb.Sp随时间延长无明显变化（P＞0.05），实验组Tb.Sp在7、14、21 d时升高（P<0.05）（表8）。

图3 Micro-CT下成年大鼠髁突变化Fig 3 Condylar changes of Micro-CT in adult rats

表4 成年大鼠TV的变化Tab 4 Changes of TV in adult rats mm3

表5 成年大鼠BV的变化Tab 5 Changes of BV in adult rats mm3

表6 成年大鼠Tb.Th的变化Tab 6 Changes of Tb.Th in adult rats μm

表7 成年大鼠Tb.N的变化Tab 7 Changes of Tb.N in adult rats

表8 成年大鼠Tb.Sp的变化Tab 8 Changes of Tb.Sp in adult rats μm

3 讨论

颞下颌关节是人体中最复杂的关节之一。人的一生中，下颌骨髁突的关节面是可以因为其功能变化而发生改建的[8]。颞下颌关节不同于其他关节，还体现在其具有较强的终身改建的能力，尤其是在青少年时期这种改建能力表现的更为突出[9]，因而青少年的下颌后缩患者可以通过功能性矫治器前导下颌得以治疗，但对于错过生长发育高峰的成年患者来说，颞下颌关节能否改建以及如何改建尚不明确，本实验采用SD大鼠作为研究对象，大鼠属啮齿类动物，其颞下颌关节与人在组织结构上比较相似，在个体之间基因变异影响较少，同时较容易获得样本量，有利于统计学分析，是研究人颞下颌关节改建的理想动物模型。本实验中使用的9周龄SD大鼠已经处于大鼠成年期，大鼠髁突与关节窝以及翼外肌都处于稳定的状态，这与成年患者临床Ⅱ类矫治的最佳时机相吻合。

颞下颌关节不同于其他关节，具有很强的改建能力，其原因可能是生物组织以改建的形式对所承受的负荷作出生物学反应，最终可导致解剖结构发生变化。在机械应力的作用下，髁突软骨内产生的机械化学信号调控着软骨的合成和分解代谢，用适当的功能矫治器可引起继发性软骨的生长量和方向的改变[10]。髁突是下颌骨生长发育的中心之一，具有较强的生长改建能力。髁突软骨是覆盖于髁突关节面表面的一层结缔组织，髁突软骨包括软骨细胞及细胞外基质，从表层到深层可分为5层：纤维层、增殖层、过渡层、肥大层、钙化软骨层[11]。软骨的分层结构不仅反映了髁突软骨细胞从幼稚到成熟的分化过程，更反映了髁突软骨生长改建的发展过程，即关节软骨内各细胞层的变化是反映整个髁突适应性改建的重要指标[12]。本研究中切取大鼠的髁突进行研究并沿髁突纵切面进行分析，可以有效地观测髁突软骨各层的改建情况。

3.1 下颌前导后髁突软骨的改建

下颌前伸可增加髁突软骨后部新骨形成[13]。本研究的结果发现，下颌前导后，成年大鼠的髁突软骨也发生改建，与对照组相比，髁突软骨有明显的增生。这与下颌前导在青年大鼠所获得的研究结果相一致。这表明在下颌前导的负荷下，成年大鼠髁突也有明显的改建过程。髁突软骨属于继发性软骨，继发性软骨生长以及软骨形成很大程度上取决于外部环境的改变[14]。髁突软骨具有特殊的生长及改建的多向分化能力，其可以通过调节软骨形成和后来的软骨内骨化过程来适应外部环境的改变。

3.2 BMP-2与髁突软骨适应性改建的关系

髁突软骨的改建成骨是由多种细胞因子调控的，其中 BMP-2是一种多功能生长因子，对骨骼胚胎发育和出生后的成骨有重要作用[15]。其能引起多种细胞的增殖、分化和凋亡，参与组织的再生和修复，尤其是骨和软骨的修复，与骨组织的形成和改建有着密切的关系。在本实验中，成年期大鼠下颌前导后BMPs在髁突软骨的表达增强，特别是在增殖层，提示BMP-2能够促进未分化的细胞分化为前软骨细胞。在下颌前导后可见大量的未分化细胞分化成前软骨细胞，从而为软骨成熟提供足够的细胞来源[16]。BMP-2在过渡层和肥大层表达的增强说明下颌前导加快了成年期大鼠髁突软骨细胞的成熟，促进了软骨的增生。本实验结果显示，下颌前导后，实验7 d时髁突软骨细胞BMP的表达高于对照组，说明下颌前导后关节内的生物力学环境发生改变，髁突软骨细胞开始发生适应性改建；随后BMP-2的表达逐渐增强，实验组21、30 d时髁突软骨细胞BMP-2的表达较对照组显著增强，说明前导成年大鼠下颌后刺激了软骨细胞，加快了软骨细胞的分化成熟，促进了髁突软骨细胞的适应性生长改建，最终髁突软骨建立新的结构平衡来维持关节的功能。

3.3 超微结构下观察髁突软骨改建的变化

软骨细胞的基因表达过程可以分成两个明显的阶段，即成熟和矿化[17]。本实验发现，下颌前导后成年期大鼠的髁突组织的超微结构也发生了显著改变。在电镜下，14 d时实验组成年期大鼠髁突软骨覆盖的成纤维组织细胞内质网肿大破裂，胞浆外流，发生玻璃样变，14～21 d时细胞体积随着时间的延长而逐渐增大，胞质丰富，细胞核增大，说明软骨细胞发育成熟并继续分化成为肥大层软骨细胞，而后发生核固缩，细胞电子密度增高，30 d时有大量的粗面内质网腔隙肿胀，细胞外基质增多变宽。软骨肥大层不连续，局部组织纤维化；增殖层未成熟细胞比例增加。说明从细胞微观层面证实肥大软骨细胞死亡降解形成新骨，钙化软骨层厚度增加。从超微结构观察证实了经过一定时间下颌前导后，髁突和下颌骨会出现明显的生长改建[18]。

3.4 Micro-CT观察髁突软骨的改建

Micro-CT能够以很高的分辨率测定骨骼各种结构，近年来已经取代了原始的计量学方法。Micro-CT可以从3D的整体结构出发对下颌骨髁突的结构和力学特性的变化情况进行研究。在本实验中成年期大鼠实验组TV随时间延长显著升高，30 d时最高。同样，BV、Tb.N、Tb.Th在30 d时也显著增加（P＜0.05）。说明在外力作用下，成年期大鼠髁突也会有新骨形成发生，发生最显著变化的时间会延长至观察期的30 d，说明在外力作用下，成年期大鼠髁突也会有新骨形成发生适应性改建[19]。

本次实验通过组织学与影像学相结合的研究方法，从不同角度证实了成年大鼠在下颌持续前导作用下，髁突发生了改建：Micro-CT测得髁突后部在下颌前导后新骨生成；免疫组织化学实验中BMP-2作为软骨成骨与软骨修复重要细胞因子出现了高表达，提示在髁突改建过程中存在改建中的新骨生成与改建后的软骨修复现象，BMP-2促进软骨修复使髁突软骨建立新的平衡来维持改建后关节的功能；通过透射电镜观察软骨细胞细胞器等超微结构，证实了软骨细胞在改建中存在增生分化现象，且出现时间与BMP-2出现高表达时间一致，提示BMP-2可能通过细胞内信号通路参与了软骨细胞增生分化。已有研究[20]证实，不同作用方式和作用时间下可以差异性调节髁突软骨细胞的改建。在下颌前导外力作用下，成年期大鼠的髁突软骨也会发生明显的形态组织学改建，使颞颌关节的位置发生改变，促进口颌系统倾向于稳定状态。这为成人正畸治疗错畸形提供了实验依据。由于本研究中观察对象的研究时间较短，只能提示前导下颌的负荷可促进髁突软骨的改建，但最终改建的效果以及达到口颌系统稳定的时间本研究尚不能提供结论。

[1] McNamara JA Jr. Components of class Ⅱ malocclusion in children 8-10 years of age[J]. Angle Orthod, 1981, 51(3): 177-202.

[2] 郑旭, 林久祥, 谢以岳. 安氏Ⅱ类错软硬组织面型相关性的研究[J]. 口腔正畸学, 2000, 7(2):62-65.

Zheng X, Lin JX, Xie YY. Study on class Ⅱ wrong he soft tissue profile correlation[J]. Chin J Orthod, 2000, 7(2):62-65.

[3] Buranastidporn B, Hisano M, Soma K. Effect of biomechanical disturbance of the temporomandibular joint on the prevalence of internal derangement in mandibular asymmetry [J]. Eur J Orthod, 2006, 28(3):199-205.

[4] 林久祥. 矫正器及技术进展[J]. 中国实用口腔科杂志, 2009, 2(1):5-8.

Lin JX. The evolution of orthodontic appliances and techniques[J]. Chin J Pract Stomatol, 2009, 2(1):5-8.

[5] 桑婷, 伍军, 黄臻, 等. Herbst矫治器治疗年轻成人安氏Ⅱ类2分类错的研究[J]. 华西口腔医学杂志, 2012, 30(1): 49-53.

Sang T, Wu J, Huang Z, et al. Treatment of class Ⅱ division 2 malocclusion with Herbst appliance in young adults[J]. West Chin J Stomatol, 2012, 30(1):49-53.

[6] 沈刚, U. Hagg, A. B. M. Rabie, 等. 咬合前导矫治器引发的髁突软骨改建的定量评价[J]. 口腔正畸学, 2000, 7(1): 9-12.

Shen G, Hagg U, Rabie ABM, et al. Quantitative evaluation of remodeling triggered by bite jumping appliance of condylar cartilage[J]. Chin J Orthod, 2000,7 (1):9-12.

[7] Munoz O, Fend F, de Beaumont R, et al. TGF beta-mediated activation of Smad1 in B-cell non-Hodgkin’s lymphoma and effect on cell proliferation[J]. Leukemia, 2004, 18(12):2015-2025.

[8] Chen J, Xu L. A finite element analysis of the human temporomandibular joint[J]. J Biomech Eng, 1994, 116(4):401-407.

Yi XZ. Occlusion[M]. Beijing: People’s Medical Publishing House, 2003:18-29.

[10] Irie M, Suzuki K. Current luting cements: marginal gap formation of composite inlay and their mechanical properties [J]. Dent Mater, 2001, 17(4):347-353.

[11] Rabie AB, Xiong H, Hägg U. Forward mandibular positioning enhances condylar adaptation in adult rats[J]. Eur J Orthod, 2004, 26(4):353-358.

[12] 谷志远, 傅开元, 张震康. 颞下颌关节紊乱病[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2008:50-51.

Gu ZY, Fu KY, Zhang ZK. Temporomandibular joint disorder [M]. Beijing: People’s Medical Publishing House, 2008:50-51.

[13] Stöckli PW, Willert HG. Tissue reactions in the temporomandibular joint resulting from anterior displacement of the mandible in the monkey[J]. Am J Orthod, 1971, 60(2):142-155.

[14] 吴莉萍, 凌均棨, 王大为. 下颌前伸后对髁突软骨的影响及其作用机制[J]. 国际口腔医学杂志, 2006, 33(5):382-383,386.

Wu LP, Ling JQ, Wang DW. Effect and mechanism of mandibular protrusion on condylar cartilage[J]. Int J Stomatol, 2006, 33(5):382-383,386.

[15] Nohe A, Keating E, Knaus P, et al. Signal transduction of bone morphogenetic protein receptors[J]. Cell Signal, 2004, 16(3):291-299.

[16] Petrovic AG, Stutzmann JJ, Oudet CL. Control processes in postnatal growth of mandibular condyle cartilage[J]. Rev Iberoam Ortod, 1986, 6(1):11-58.

[17] 南晓红, 寇继寅, 李茹. 玻璃离子水门汀的应用及发展[J]. 口腔医学, 2007, 27(6):323-325.

Nan XH, Kou JY, Li R. Application and development of glass ionomer cement[J]. Stomatology, 2007, 27(6):323-325.

[18] Proff P, Gedrange T, Franke R, et al. Histological and histomorphometric investigation of the condylar cartilage of juvenile pigs after anterior mandibular displacement[J]. Ann Anat, 2007, 189(3):269-275.

[19] 刘莹, 汤欢, 刘艳艳, 等. 不同下颌前伸力对髁突Runx2和Ⅹ型胶原表达的影响[J]. 实用口腔医学杂志, 2013, 29(5): 621-625.

Liu Y, Tang H, Liu YY, et al. Effects of different modes of mandibular advancement on the runx2 and collagen Ⅹ expression in condyle[J]. J Pract Stomatol, 2013, 29(5):621-625.

[20] Inoue H, Nebgen D, Veis A. Changes in phenotypic gene expression in rat mandibular condylar cartilage cells during long-term culture[J]. J Bone Miner Res, 1995, 10(11):1691-1697.

（本文编辑 李彩）

Changes in ultrastructure and bone morphogenetic protein expression in reconstructed mandibular condylar cartilage under continuous mandibular advancement in adult rats

Yang Shuai1, Li Xue2, Gao Jie3, Cai Yizhi4, Li Ronghui4, Wang Mingguo5. (1. School of Stomatology, Weifang Medical University, Weifang 261053, China; 2. Dept. of Stomatology, Weifang Oral Hospital, Weifang 261000, China; 3. Dept. of Stomatology, The 401st Hospital of PLA, Qingdao 266071, China; 4. School of Stomatology, Shandong University, Jinan 250012, China; 5. Dept. of Stomatology, Jinan Central Hospital Affiliated to Shandong University, Jinan 250013, China)

Supported by: The Science and Technology Development Program of Shandong Province (2014GSF11804). Correspondence: Wang Mingguo, E-mail: wmgsh@163.com.

Objective This study investigated the reconstructed mandibular condylar cartilage and the ultrastructural variations in mandibular condylar cartilage in adult rats as a result of mandibular advancement. Methods Thirty 9-week-old male Sprague-Dawley rats were randomly divided into experimental and control groups. Rats in the experimental group were subjected to mandibular advancement. Rats were sacrificed on days 3, 7, 14, 21, 30. Sections were cut from condyles, and bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) expression in condylar cartilage was examined through immunohistochemical analysis. Condylar cartilage samples were harvested, and ultrastructural changes in these samples were observed under Micro-CT and transmission electron microscope. Results Compared with the control group, the experimental group obviously displayed cartilage hyperplasia in the middle and rear of the condyle. Moreover, the number of BMP-2-positive cells in condylar cartilage and the gray value gradually increased in the experimental group on day 7 of the intervention. Ultrastructural changes, such as karyopyknosis, reduced microfilaments around the nucleus, reduction in size or even disappearance of lipid droplets, swelling of endoplasmic reticulum compartments, broadened and increased extracellular matrix, were observed in the condylar hypertrophic chondrocytes. Micro-CT revealed that the trabecula and the newly formed bone gradually thickened.Conclusion Hypertrophic remodeling of the condylar cartilage and high BMP-2 expression are observed in adult rats as a result of continuous mandibular advancement.

condyle; cartilage; ultrastructure; bone morphogenetic protein

R 783.5

A

10.7518/hxkq.2016.06.016

2016-01-15；

2016-07-10

山东省科技发展项目（2014GSF11804）

杨帅，硕士，E-mail：907445117@qq.com

王明国，副主任医师，博士，E-mail：wmgsh@163.com