榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响

李英夫，宣兆博，廉晓宇

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)



榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响

李英夫，宣兆博，廉晓宇*

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：观察人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下形态的变化。方法：采用用流式细胞仪检测人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞在榄香烯诱导下细胞凋亡和细胞周期的改变。结果：榄香烯可以抑制体外培养的SHG-44细胞的生长，并且不同浓度的榄香烯对SHG-44细胞的抑制作用程度是不相同的，随着榄香烯浓度的增加，SHG-44细胞的凋亡率升高，呈现剂量依赖性。结论：榄香烯对SHG-44细胞有非常明显的增殖抑制作用，可以加速SHG-44细胞的凋亡，具有抗肿瘤活性。

榄香烯；SHG-44细胞；凋亡；细胞周期

神经胶质瘤是位于神经外胚层的肿瘤，属于颅内肿瘤的一种，一般手术治疗难以彻底治愈，临床手术治疗后的复发率非常高。现在我国神经胶质瘤的药物治疗方面，一些新的化疗药物对穿透患者的血脑方面没有突破，如何对神经胶质瘤进行治疗是医学界一直的研究课题之一[1]。

榄香烯是从抗癌药物莪术中提练出来的抗癌活性成分，呈挥发油类，通过进行动物实验和临床实践证明对肿瘤细胞具有抑制作用。

本文分析了榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响，旨在为胶质瘤的临床治疗提供有益的理论依据。通过榄香烯对体外培养的人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞诱导分化，对人脑胶质瘤细胞SHG-44进行体外培养，经过不同浓度的榄香烯作用后，用相差显微镜观察细胞形态的变化，用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的改变。结果显示榄香烯可以抑制体外培养的胶体瘤细胞SHG-44细胞生长，不同浓度的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44有着不同的抑制作用。对照组人脑胶质瘤细胞SHG-44的存活率明显的高于实验组，随着榄香烯浓度的增加，观察组的细胞杀伤力越来越高,并呈剂量依赖性。现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 试剂

榄香烯；细胞培养基；胎牛血清；以上试剂由中国医学科学院生物工程研究所提供。

1.2 方法

人脑胶质瘤细胞SHG-44由北京大学放射生物实验室提供，在培养基里放入10%的胎牛血清，培养基中的温度保持在35℃左右，在CO2含量为5%的培养箱中进行传代培养。运用比色法对榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞增殖抑制率进行测定，移除细胞培养液，加入0.25%的胰酶，消化掉贴壁细胞，随后加入10 ml的细胞培养液，调整细胞浓度，细胞培养液的浓度分别设置为0.05、0.15、0.25 mol/L，在每个孔里放入20 μL的噻唑蓝，培养完成后将培养液移除。

测试完成后对吸光度的值进行计算，并计算细胞增殖抑制率。用比色法对榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞杀伤作用进行测定时，在每个孔里加入人脑胶质瘤细胞SHG-44。用流式细胞仪对榄香烯对人脑胶质瘤细胞凋亡情况进行测定，在24孔平地培养板中，培养不同浓度的榄香烯，测定人脑胶质瘤细胞的凋亡坏死率。

1.3 统计学处理

采用SSPS17.0统计软件进行统计分析，计数资料以率进行比较，计量资料以均数±标准差表示，用单因素方差分析进行组间比较，P<0.05表示具有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞形态观察

榄香烯抑制SHG-44细胞增殖效果明显，不同浓度的榄香烯制剂与SHG-44细胞共同孵育24 h，相关显微镜下观察细胞呈多边形贴壁生长，细胞的数目较多。不同浓度的榄香烯组SHG-44细胞，浮着的细胞数目增多，细胞数目减少，随着浓度的增加细胞的杀伤性越强。不同浓度的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44会有不同的抑制作用，0.25 mol/L的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用大于0.05 mol/L的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用。不同浓度的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用见表1。

表1 不同浓度的榄香烯对SHG-44细胞周期及调亡率的影响

2.2 流式细胞术的试验结果

不同浓度的榄香烯对SHG-44细胞的周期各时相变化都有影响，随着榄香烯浓度的升高，作用效果越来越明显。见表2。

2.3 透射电镜的观察结果

0.05 mol/L榄香烯组中SHG-44细胞的线粒体肿胀，细胞内有空泡形成，0.25 mol/L榄香烯组中的SHG-44细胞染色质靠边缘进行凝集，导致细胞核破碎，可以明显看到凋亡现象。

表2 不同浓度的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44的抑制作用及调亡率的影响

3 讨论

通过对榄香烯诱导SHG-44细胞凋亡和对细胞周期各时相的影响进行试验，用榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞增殖抑制率、细胞杀伤率进行测试，采用的是MTT法中的比色法，用流式细胞仪对榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44细胞调亡进行测试，不同浓度的榄香烯对人脑胶质瘤细胞SHG-44周期各时相均有影响。榄香烯使人脑胶质瘤细胞SHG-44的G1期受阻细胞堆积，不能快速的进入S期，使G2/M期的细胞数量相对较多，是由于细胞受到了损伤。

随着药物的浓度越来越高，患者细胞的杀伤作用逐渐增强，凋亡率在升高，组间的比较差异非常显著。也说明了肿瘤是一种细胞的周期疾病，细胞的周期调整控制异常，是与细胞的癌变情况有关系的[2-4]。对照组人脑胶质瘤细胞SHG-44存活率明显高于实验组，而且实验组中的每个组别随着榄香烯浓度的增加，抑制作用在前期短暂的耐药反应之后一直在持续升高。榄香烯不仅可以抑制人脑胶质瘤细胞SHG-44的增殖和调亡，也可以诱导调亡的抗肿瘤活性。总之，榄香烯有非常确度的抗肿瘤作用，毒副作用较小，抗癌谱广，对SHG-44细胞有非常明显的增殖抑制作用，可以加速SHG-44细胞的凋亡，同时也可以诱导细胞凋亡，具有抗肿瘤活性，其作用机理有待于进一步的研究。

[1] 朱迎君，周莉，樊永平，等.基于数据挖掘的中医药治疗胶质瘤组方用药规律探讨[J].中医药学报，2016,44(3):12-15.

[2] 吉宏明.Β-榄香烯抑制胶质瘤兔角膜移植模型血管生成的实验研究[J].黑龙江医药科学,2014,36(4):38-40.

[3] 柳影,陈儇,郭杰,等.氯化甲基汞对人SHG-44人脑胶质瘤细胞抗肿瘤活性的体外实验研究[J].中国实验诊断学,2010,14(4):475-478.

[4] 郭云宝,韩斌,杨洪发.三氧化二砷对人脑SHG-44人脑胶质瘤细胞作用的体外实验研究[J].中风与神经疾病杂志,2013,30(4):365-368.

理 论 探 讨

黑龙江省卫生厅科研项目(No.2014-222)

李英夫(1979-)，男，硕士，主治医师，主要研究方向：胶质瘤的综合治疗。

廉晓宇*(1964-)，男，主任医师，硕士研究生导师，主要研究方向：神经内镜在临床中的应用，胶质瘤的综合治疗。

2016-06-07

R285.5

A

1002-2406(2016)06-0011-02

修回日期：2016-07-05