α-硫辛酸对急性冠脉综合征患者心肌损伤保护作用的研究

杨翠翠，丁旵东，操全霞



◇临床医学研究◇

α-硫辛酸对急性冠脉综合征患者心肌损伤保护作用的研究

杨翠翠，丁旵东，操全霞

目的 探讨α-硫辛酸(α-LA)对急性冠脉综合征(ACS)患者心肌损伤的保护作用。方法 研究对象为59例急性冠脉综合征患者，随机分为常规药物治疗组和α-LA组。常规药物组29例给予抗栓、调脂、扩管药物治疗；α-LA组30例在常规药物治疗基础上加用α-LA(600 mg/d，IVD，疗程3d)。2组在用药前0 h、用药后24 h和72 h各采取静脉血4 ～ 5 ml，采用ELISA法测定血清乙醛脱氢酶2(ALDH2)活性，硫代苯巴比妥酸法测定血清丙二醛(MDA)水平，微量酶标法测定血清乳酸脱氢酶(LDH)含量，LVEF通过心脏彩色多普勒超声心动图检查测定。 结果 ① 两组在用药前0 h的血清ALDH2活性、MDA及LDH水平、LVEF值无显著差异；② 两组在用药24 h 和72 h后血清ALDH2活性水平较用药前0 h明显上升(P<0.01)，MDA较用药前0 h显著下降(P<0.01)；LDH水平在用药72 h较24 h显著下降(P<0.01)，LVEF值72 h和1周后均有明显升高(P<0.05)；③ 与常规治疗组比较，α-LA组在用药24 h及72 h后血清ALDH2活性均显著上升(P<0.01)，MDA水平显著下降(P<0.05)，LDH亦显著下降(P<0.01)，LVEF值1周后升高更显著(P<0.05)。结论 α-LA上调ACS患者的ALDH2活性,减少过氧化终产物MDA的生成，减轻心肌组织缺血及缺血再灌注后的氧化损伤(LDH水平回降)。

急性冠脉综合征；α-硫辛酸；乙醛脱氢酶2；丙二醛；乳酸脱氢酶

急性冠脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)指因冠状动脉粥样斑块的破裂及其血栓形成使冠状动脉闭塞，致使心绞痛加重和发生急性心肌梗死的综合征，包括不稳定型心绞痛、ST段抬高性心肌梗死、非ST段抬高性心肌梗死[1]。ACS对人类的危害极大，早期选择合适的治疗方案，可以改善患者的预后、降低死亡率及致残率。及时开通严重病变的“罪犯”血管，恢复血流，能够有效地改善心肌缺血症状及预后，但是“罪犯”血管开通早期引起的缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)[2]是一直困扰着临床工作者的难题，如何减轻急性期心肌缺血及IRI是目前临床研究中的重要任务。有研究[3]表明，在离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中激活乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2 ，ALDH2)可以使心肌梗死面积减少60%。α-硫辛酸(alpha lipoic acid，α-LA )不仅是强效的抗氧化剂，具有清除自由基和活性氧的能力[4-5]，而且是ALDH2激活剂，其是否能降低急性期心肌缺血及IRI，减少心肌损伤，目前研究较少。该研究选取ACS患者病例为研究对象，探讨α-LA对急性缺血及缺血再灌注引起的心肌损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象 入选研究对象为2014年6月 ～ 2015年12月安徽医科大学第二附属医院综合内科收治的ACS患者59例，随机分为常规药物组和α-LA组。常规药物组29例，其中男19例，女10例，(60±9)岁，给予冠心病二级预防药物治疗；α-LA组30例,其中男20例，女10例，(58±10)岁，在冠心病二级预防药物治疗基础上给予α-LA 静脉滴注，600 mg/d，疗程3 d(首剂于入院后2 h内给予)。病例入选标准：① 入院前内有典型的心绞痛发作；② cTnI阳性和(或)CK-MB阳性；③ 心电图有缺血性表现：ST段下移≥1 mm、ST段抬高≥ 1 mm和(或)T波倒置；符合3项中2项的患者入选本实验。排除标准：近期服用抗炎药、激素、阿片类药物、抗氧化剂及长期服用华法林患者，患有恶性肿瘤、先天性心脏病、肝肾功能衰竭、近期有炎症、严重的其他系统疾病患者排除在外。患者均签署书面知情同意书，该研究由安徽医科大学第二附属医院伦理委员会批准(受理号：2016-05-04)，符合伦理审查标准及赫尔辛基宣言。

1.2 研究方法 采用病例对照研究方法。收集临床资料：采用病史采集记录单的形式记录患者的资料，包括：性别、年龄、饮酒史、吸烟史、疾病史(高血压病、糖尿病、心血管病家族史)，药物(阿司匹林、氯吡格雷、硝酸酯类、他汀类、β受体阻滞剂类等)使用情况。

1.3 主要试剂和仪器 α-LA(山西亚宝药业集团股份有限公司)；ALDH2试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)；丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；-80 ℃超低温冰箱(青岛海尔特种电器有限公司)；超净工作台(青岛海尔特种电器有限公司)；低温超速离心机(美国Sigma公司)；37 ℃恒温孵育箱(上海一恒科技有限公司)；恒温摇床(上海智城分析仪器制造有限公司)；酶标仪(上海科华实验系统有限公司)。

1.4 ACS患者心肌损伤程度的评估 心肌损伤程度主要是通过心肌坏死标志物(CK-MB、cTnI)评估。α-LA组和常规药物组患者入院0、24、72 h检测心肌坏死标志物并进行统计学处理，对比两组患者不同时间段心肌损伤程度的差异。

1.5 ACS患者心脏收缩功能的评估 心脏收缩功能通过左室射血分数(LVEF)评估。患者入院0 h、72 h和1周行心脏彩色多普勒超声心动图检查，测定左室收缩末期和左室舒张末期容积并计算LVEF。

1.6 ALDH2活性检测 在给药0、24、72 h采集两组患者静脉血，4 ℃、1 600 r/min离心5 min后收集血清，-80 ℃保存，按照ELISA试剂盒说明书操作，测定ALDH2活性。

1.7 MDA水平检测 在给药0、24、72 h采集两组患者静脉血，按照试剂盒说明书操作，采用硫代巴比妥酸法检测MDA活性。

1.8 LDH含量检测 在给药0、24、72 h采集两组患者静脉血，按照试剂盒说明书检测LDH活性。

2 结果

2.1 患者临床基线资料及其他非研究项目的比较 α-LA组与常规药物组比较，性别、年龄、饮酒史、吸烟史、疾病史(高血压病、糖尿病、心血管病家族史)、药物使用史等差异均无统计学意义。见表1。

2.2 α-LA对ACS患者心肌损伤程度及心脏收缩功能的影响 α-LA组和常规药物组在0 h时CK-MB、cTnI及LVEF差异均无统计学意义；24 h及72 h时α-LA组的CK-MB和cTnI水平低于常规药物组，差异有统计学意义(P<0.01)；72 h及1周后，α-LA组的LVEF值高于常规药物组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 α-LA对ACS患者ALDH2的影响 α-LA组和常规药物组在0 h检测患者血清ALDH2水平，差异无统计学意义；治疗24、72 h后，两组患者血清ALDH2水平均明显上升，各组内差异有统计学意义(P<0.01)；α-LA组较常规药物组在24、72 h上升幅度更显著，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

2.4 α-LA对ACS患者MDA的影响 α-LA组和常规药物组在0 h检测患者血清MDA水平，差异无统计学意义；治疗24、72 h后，两组患者血清MDA水平均明显下降，各组内差异有统计学意义(P<0.01)；且α-LA组较常规药物组在24、72 h下降幅度更显著，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.5 α-LA对ACS患者LDH的影响 α-LA组和常规药物组在0 h检测患者血清LDH水平，差异无统计学意义；治疗24 h后，两组患者血清LDH水平均上升，α-LA组上升幅度小于常规药物组，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗72 h后，两组患者血清LDH水平明显下降，α-LA组较常规药物组下降幅度更显著，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表1 α-LA组与常规药物组患者治疗前相关基线资料的比较(n)

表2 α-LA对ACS患者血清心肌损伤标志物及心脏收缩功能的影响±s)

与常规药物组比较:*P<0.05,**P<0.01

表3 α-LA对ACS患者血清中氧化代谢产物的影响±s)

与常规药物组比较：*P<0.05,**P<0.01;与组内0 h比较：#P<0.05,##P<0.01; 与组内24 h比较：△P<0.05,△△P<0.01

3 讨论

当组织缺血缺氧时，机体发生氧化应激，产生内源性氧自由基(free radical, FR)，包括羟自由基，超氧阴离子、氮氧自由基、过氧化氢等，统称为活性氧(reactive oxygen species, ROS)[6]，导致氧化系统与抗氧化系统间的平衡出现紊乱。有研究[7]显示，缺氧可导致体外培养的心肌细胞产生大量ROS，降低ALDH2活性，阻碍ALDH2清除脂质过氧化产生的丙二醛(malondialdehyde，MDA)、4-HNE等毒性物质，氧化应激及相关代谢产物堆积的结果是引起组织缺血缺氧损伤的主要原因[8]。因此，抗氧化应激反应，清除ROS，提高ALDH2活性是减轻心肌缺血及IRI损伤的关键。

乳酸脱氢酶(LDH)是机体糖酵解供能系统的关键酶之一，机体缺氧时组织无氧代谢增强，LDH活性及水平升高，组织发生缺氧损伤后细胞中LDH大量渗出，使血清LDH水平升高，因此血清LDH水平可以反映组织缺氧损伤的程度[7]。

α-LA是一种新型抗氧化剂，对ALDH2活性具有良好的调节作用，是近年降低氧化应激损伤的研究热点。前期体外研究[3,9-10]结果表明，α-LA可提高ALDH2活性，降低大鼠心肌细胞低氧、低氧/复氧引起的氧化损伤程度。目前关于α-LA的临床研究尚少，本实验通过对基线临床资料相匹配的两组病例血清ALDH2、MDA、LDH水平及LVEF值的研究显示：① 治疗24、72 h后，两组血清ALDH2水平逐渐上升，α-LA组上升幅度更显著；② 与之相反，两组血清MDA及LDH水平逐渐下降，α-LA组下降程度更显著；③ LVEF值升高在1周后更明显，α-LA组优于常规药物组。这些结果表明，α-LA增加ACS患者血清ALDH2活性，降低氧化应急产生的ROS，减少脂质过氧化产生的MDA等毒性物质[11]，减小ACS患者缺血和(或)IRI引起的急性氧化应激心肌损伤，因而较常规组更显著降低心肌坏死标志物水平、改善左心室收缩功能(LVEF)。ACS患者发生急性缺血及IRI心肌损伤时α-LA可以发挥保护作用。

综上所述，α-LA能减轻心肌缺血及IRI引起的氧化应激性心肌损伤，降低ACS患者风险、改善预后。其减轻心肌缺血及IRI氧化应激性心肌损伤与上调ACS患者血清ALDH2活性，减少脂质过氧化物的产生有关。本研究样本量较少，随访时间较短，具体调节机制还有待进一步探讨。

[1] Smith J N, Negrelli J M, Manek M B, et al. Diagnosis and management of acute coronary syndrome: an evidence-based update[J]. J Am Board FamMed, 2015, 28(2):283-93.

[2] Yetgin T, Manintveld O C, Duncker D J, et al. Post-conditioning against ischemia reperfusion injery: ready for wide application in patients?[J]. Neth Heart J, 2010, 18(7-8):389-92.

[3] Chen C H, Budas G R, Churchill E N, et al. Activation of aldehyde dehydrogenase 2 reduces ischemic damage to the heart[J]. Science, 2008, 321(5895):1493-5.

[4] Goraca A, Huk-Kolega H, Piechota A, et al. Lipoic acid-biological activity and therapeutic potential[J]. Pharmacol Rep, 2011, 63(4):849-58.

[5] Deng C, Sun Z, Tong G, et al. α-Lipoic acid reduces infarct size and preserves cardiac function in rat myocardial ischemia/reperfusion injury throughactivation of PI3K/Akt/Nrf2 pathway[J]. PLoS One, 2013, 8(3):e58371.

[6] Dumollard R, Carroll J, Duchen M R, et al. Mitochondrial function and redox state in mammalian embryos[J]. Semin Cell Dev Biol, 2009, 20(3):346-53.

[7] Zhou Y, Zhang Y, Gao F, et al. N-n-butyl haloperidol iodide protects cardiac microvascular endothelial cells from hypoxia/reoxygenation injury by down-regulating Egr-1 expression[J]. Cell Physiol Biochem, 2010, 26(6):839-48.

[8] Alva N, Azuara D, Palomeque J, et al. Deep hypothermia protects against acute hypoxiainvivoin rats: a mechanism related to the attenuation of oxidative stress[J]. Exp Physiol, 2013, 98(6):1115-24.

[9] Ohsawa I, Nishimaki K, Yasuda C, et al. Deficiency in a mitochondrial aldehyde dehydrogenase increases vulnerability to oxidative stress in PC12 cells[J]. J Neurochem，2003, 84(5):1110-7.

[10] 操全霞, 丁旵东. α-硫辛酸对H9c2心肌细胞低氧及低氧/复氧损伤的保护作用及其机制探讨[J]. 安徽医科大学学报, 2015, 50(7):1024-8.

[11] Hahm J R, Noh H S, Ha J H, et al. Alpha-lipoic acid attenuates adipocytedifferentiation and lipid accumulation in 3T3-L1 cellsviaAMPK-dependentautophagy[J]. Life Sci, 2014, 100(2):125-32.

The protective effects of α-lipoic acid on myocardial injury of acute coronary syndrome patients

Yang Cuicui, Ding Chandong, Cao Quanxia

(DeptofInternalMedicine,TheSecondAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230601)

ObjectiveTo investigate the protective effects of α- lipoic acid (α-LA) on myocardial injury of acute coronary syndrome patients.Methods59 patients with acute coronary syndrome were randomized into two groups: conventional treatment group and α-LA group. 29 patients in conventional treatment group received routine drugs, while 30 patients in α-LA group were given α-LA (600 mg/d, IVD, for 3 days) besides routine drugs. The activity of ALDH2，level of MDA and LDH of serum in all patients were separately detected by microtitration，TBA and ELISA before and after treatment ( 24, 72 hours )，LVEF values were analyzed by UCG.Results① There were no significant differences between the two groups before treatment. ② After 24 h and 72 h treatment, the activity of ALDH2 in two groups were increased (P<0.01) and the level of MDA was decreased (P<0.01) compared to the data before treatment. Compared to after 24 h, the level of LDH was reduced after 72 h (P<0.01) and the LVEF values were significantly higher after 72 h and 1 week (P<0.05). ③ Compared to conventional treatment group, the activity of ALDH2 in α-LA group was significantly increased (P<0.01) and the levels of MDA and LDH were decreased after 24 h and 72 h (P<0.05,P<0.01). The LVEF values were significantly increased after 1 week (P<0.05).Conclusionα-LA may increase the ALDH2 activity, reduce peroxidation end product (MDA) generation of serum in ACS patients, and finally decline oxidative damage to myocardial ischemia and reperfusion (the level of LDH decreased).

acute coronary syndrome; α-lipoic acid; ALDH2; MDA; lactate dehydrogenase

安徽省卫生厅医学科研课题计划(编号：2010C058)

安徽医科大学第二附属医院综合内科，合肥 230601

杨翠翠，女，硕士研究生； 丁旵东，男，主任医师，硕士生导师，责任作者，E-mail:dcdsunshine@sina.com

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20161012.1323.017.html

R 541.4

A

1000-1492(2016)11-1630-04

10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.017

2016-02-28接收