猪苓优良菌株分离及培养基筛选研究

董晓丽，李香串

(山西省医药与生命科学研究院，山西 太原 030006)



猪苓优良菌株分离及培养基筛选研究

董晓丽，李香串

(山西省医药与生命科学研究院，山西 太原 030006)

比较研究了不同产地、不同取材部位的猪苓菌丝生长状况并结合产地、品质等条件优选出优良的菌株并对该菌株进行了培养基筛选试验。结果表明：盂县1号优于其它品种，最适培养基为HBL：马铃薯200 g，小麦麸皮50 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁1.5 g，维生素B110 mg，琼脂20 g，蛋白胨5 g，水1000 mL，pH 值自然。

猪苓；菌株分离；培养基；筛选

猪苓 [Polyporusumbellatus(Pers.)Fr.]，又名猪粪菌、猪苓芝。属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、猪苓属，是传统的真菌药物之一[1]，具有利尿渗湿、通淋退肿、防老助颜等功效[2]。多糖是猪苓的主要活性成分之一，具有保护肝脏细胞、抗肿瘤、增强机体免疫力等作用[3]；麦角甾醇是猪苓标准化指标成分之一，具有一定的利尿作用[4-5]。目前多以野生品供应市场，且不同产地的猪苓品质参差不齐，野生猪苓资源日趋减少，人工种植及工业发酵生产，可以缓解野生猪苓资源枯竭状况。本研究在前述不同产地猪苓有效成分的研究基础上，通过分离不同产地的猪苓及猪苓花的菌丝体，比较研究不同菌株在不同培养基上的生长状况，筛选出优良菌株和适宜其生长的培养基，为猪苓良种选育及工业发酵生产提供依据。

1 材料与方法

1.1 不同菌株菌丝生长状况的比较试验

1.1.1 供试菌株

选取的6 个供试菌株均为项目组自采并分离获得，平山 1号(采自河北平山，分离部位为白苓)；平山2号(采自河北平山，分离部位为白苓)；盂县1号(采自盂县太行山，分离部位为猪苓花)；盂县3号(采自盂县太行山，分离部位为白苓)；沁源(采自沁源太岳山，分离部位为猪苓花)；留坝(采自陕西留坝县，分离部位为黑苓)。

1.1.2 培养基的制备

配制PDA培养基(马铃薯200 g，蔗糖20 g，蛋白胨10 g，琼脂20 g 水1 000 mL，pH值自然)，分装于试管中，121 ℃灭菌20 min，取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。

1.1.3 接种与培养

从母种中，挑选无杂菌，长势旺盛的菌丝，沿菌落边缘切下0.5 cm2活化菌块，接种到PDA培养基试管斜面上，每一种培养基接20 管, 放置在(25 ±2)℃培养室培养。定时观察、记录菌丝萌发及生长状况。

1.1.4 菌丝生长状况测定

发菌7 天后，每隔3 天用毫米刻度尺测量不同菌株菌丝的生长量，并计算出生长速度，然后取平均值进行LSR测验；同时观察并记录菌丝密度、菌丝颜色、菌丝生长势。

1.2 最适培养基质试验

1.2.1 供试菌种

盂县1号菌株。

1.2.2 供试培养基组成成分(见表1)

表1 四种培养基的组成成分

注：1)加水量均为1 000 mL；2)维生素B1单位：mg。

1.2.3 试验方法

将四种配方中的马铃薯、小麦麸皮煮沸10～15 min后过滤取汁，其它成分按配方准确称量， pH自然，20 mm×200 mm试管每支装10 mL，每个配方各装20 支，高压灭菌20 min，取出制斜面8 cm等长，待冷却后接入猪苓菌种，接种点一致，置25 ℃恒温、黑暗条件下培养，观测菌丝萌发，生长情况。试验数据采用LSR测验。

2 结果与分析

2.1 不同产地菌株菌丝生长状况比较试验结果及分析

2.1.1 各菌株菌丝的生长速度比较

表2 各菌株菌丝生长速度比较 mm/d

从表2可看出，不同产地猪苓菌株间菌丝生长速度不同，平山2号菌丝生长速度最快，平均日生长速度为4.93 mm，其次为盂县1号和平山1号，菌丝平均日生长速度分别为3.39 mm和2.91 mm，留坝黑苓生长速度最慢，日平均生长速度为1.67 mm。

2.1.2 试验结果及分析

表3 各菌株菌丝生长速度的新复极差(LSR)测验

注：数字后*表示p<0.05，**表示p<0.01。

从表3可看出，平山2号菌株菌丝生长速度较快，与盂县1号和平山1号比较差异显著，与沁县白苓、盂县3号及留坝黑苓菌株菌丝比较差异极显著。

2.1.3 各菌丝生长状况比较

表4 各菌丝生长状况比较

由表4可知，平山2号菌丝颜色白、菌丝短、菌丝稠密、粗壮，其次为盂县1号菌丝颜色白、菌丝长、菌丝较稀、粗壮。留坝黑苓菌株生长状况最次。

2. 2 盂县1号菌株的最适培养基筛选结果及分析

2. 2.1 不同培养基上菌丝生长状况比较

表5 不同培养基上的菌丝生长情况

从表5得知，盂县1号菌株在四种培养基上生长状况不同，以在配方HBL上的长速最快，配方B其次；而配方WBA和PDA上生长稀疏、较弱，不适合；配方HBL、B上菌丝生长健壮、较密，且爬壁力强。

2. 2.2 不同培养基中猪苓菌丝的生长速度

从表6得知，盂县1号菌株在不同培养基上菌丝生长速度不同，在HBL培养基上菌丝生长速度最快，平均日生长速度为1.46 mm，其次为B培养基，菌丝平均日生长速度分别为1.22 mm，WBA和PDA培养基上长速度最慢。

表6 不同培养基中各菌株菌丝生长速度 mm/d

2. 2.3 菌丝生长速度的新复极差(LSR)测验

表7 菌丝生长速度的新复极差

注：数字后﹡表示p<0.05，﹡﹡表示p<0.01。

从表7得知，盂县1号菌株在HBL培养基上菌丝生长速度最快，与WBA、B比较差异显著与PDA比较差异极显著。

3 结果与讨论

3.1 比较的六株菌株中平山2号、盂县1号、分离部位为子实体，沁源白苓、留坝黑苓分离部位为菌核，试验结果表明：平山2号与盂县1号在菌丝生长速度、菌丝密度、菌丝生长势和攀爬力方面都优于从菌核分离的菌株。以分离部位作选种指标分离菌种时，分离部位应首选子实体。

3.2 不同菌株间菌丝生长状况试验表明：平山2号的表现最好，其次为盂县1号，优于其他四个菌株，由于盂县1号产于山西，属于道地药材，其子实体中多糖含量及甾醇含量均高于其它品种[6]，因此盂县1号可作为本地区的首选品种。

3.3 从菌丝生长状况、生长速度等方面研究了盂县1号猪苓菌种在4种培养基中的生长情况，结果表明：培养基HBL是猪苓菌丝最适培养基，其次为培养基B。由此推断配方中含有维生素B1和小麦麸皮对猪苓菌丝的生长有较强的促进作用。

3.4 盂县1号作为山西道地药材，在生长状况及品质方面均优于其他菌株，可作为本地区扩大化培养的首选品种。另外培养基HBL中加入维生素B1和小麦麸皮不仅有利于其菌丝生长，其培养基褐化程度也明显降低。本研究通过筛选优良的猪苓菌株和最佳培养条件，以期为猪苓的大规模人工栽培提供参考。

[1] 黄年来．中国食用菌百科[M]．北京：中国农业出版社，1993:1 .

[2] 许广渡，傅伟杰，赵旭奎．我国猪苓研究的进展[J]．菌物研究，2003，I(1)：58-63.

[3] 陆勇芹，周文明，王琦，等．木蹄层孔菌化学成分及不同提取物体外抗肿瘤活性研究[J]．西北林学院学报，2007，22(4)：131-13.

[4] ZHAO Y Y，XIE RM，CHAO X，et a1．Bioactivitydirected isolation，identification of diuretic compounds from Polyporus umbellatus[J]．Journal of Ethnopharmacology，2009,126:184-187.

[5] 刘洪超，杨小龙，王淑英．猪苓药理作用研究进展[J]．河南科技大学学报(医学版)，2011,29(2):1.

[6] 李香串，梁文仪．不同产地野生猪苓多糖与麦角甾醇的含量分析[J]．中国野生植物资源，2014,33(4)：11-15.

Study on the Strain Isolation and Medium Screening ofPolyporusumbellatus

Dong Xiaoli ，Li Xiangchuan

(Medicine and Life Science Institute of Shanxi Province，Taiyuan 030006，China)

The mycelia growth conditions of different parts and producing areas ofPolyporusumbellatuswere studied and the fine strains were selected to do culture media screening tests. The esperiment results showed that Pingshan 2 is better than the other varieties and the optimum medium was: potato 200 g,bran 50 g,KH2PO43 g,MgSO41.5 g,VB110 mg,agar 20 g,peptone 5 g ,and water 1000 mL,pH natural。

Polyporusumbellatus；strain isolation；culture media；selection

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.05.009

2016-01-06

山西省社会发展科技公关项目(20130313013-5)，山西省特色药材规范化种植技术及质量标准化研究—猪苓良种选育研究。

董晓丽(1980—)，女，硕士，工程师，研究方向为药用植物栽培育种。E-mail：75499571@qq.com

S646.2

A

1006-9690(2016)05-0035-02