抗-cE合并抗-c、抗-E抗体致新生儿溶血病的临床研究

孙长杰，王晓宁，刘 冰*，李凌波

(1.吉林大学第一医院 输血科，吉林 长春130021；2.长春博迅生物技术有限责任公司)



抗-cE合并抗-c、抗-E抗体致新生儿溶血病的临床研究

孙长杰1，王晓宁1，刘 冰1*，李凌波2*

(1.吉林大学第一医院 输血科，吉林 长春130021；2.长春博迅生物技术有限责任公司)

1 临床资料

患儿男，1小时新生儿，因母孕29周，呼吸困难1小时入吉林大学第一医院就诊。系3胎2产，母孕29周，因胎盘早剥、阴道流血，加重1天，产程未发动剖宫产分娩，出生体重1.36 kg。患儿生后不久呼吸困难明显，给予气管插管、人工正压通气治疗，为求进一步治疗转入我院。入院查体：一般状态及反应差，皮肤略苍白，早产儿外貌，胎龄评估28周，呼吸65次/分，呼吸急促，三凹征阳性，心率130次/分，四肢肌张力低。白细胞8.83×109/L，红细胞3.41×1012/L，血红蛋白126 g/L，红细胞比容0.391 L/L，红细胞分布宽度15.4%，血小板300×109/L。诊断为早产儿、新生儿呼吸窘迫综合症、极低出生体重儿，予以机械通气等对症治疗。患儿生后12小时出现黄疸，总胆红素132.3 μmol/L，直接胆红素7.3 μmol/L，间接胆红素125.0 μmol/L，全身黄染呈进行性加重。经血清学检测证实，系由抗-cE合并抗-c、抗-E抗体引起Rh系统新生儿溶血病。

血型检测及母血清不规则抗体筛查和鉴定：采用卡式法，按厂家说明书进行操作和判读。ABODE血型检测卡(微柱凝胶)、Rh血型抗原检测卡(单克隆抗体)、抗人球蛋白检测卡由长春博迅生物技术有限责任公司生产；ABO标准红细胞、抗体筛选红细胞、谱细胞由上海血液生物医药有限责任公司生产。不规则抗体鉴定将母血清采用盐水法及卡式法抗人球蛋白试验分别与由10人份O型红细胞组成的谱细胞及自身红细胞反应，与谱细胞中1至数人份凝集，与自身红细胞不凝集者为抗体阳性，并根据与谱细胞的反应格局判定抗体特异性。

新生儿溶血病直接抗人球蛋白、游离、释放试验：直接抗人球蛋白、游离试验采用卡式法，释放试验应用酸放散方法，按说明书操作判读。抗人球蛋白检测卡、酸放散试剂盒由长春博迅生物技术有限责任公司生产。新生儿溶血病三项试验阳性判断方法参照文献[1]。

吸收放散试验及抗体效价测定：吸收放散试验及抗体效价测定均按文献[2]进行。

2 结果

新生儿血型为O型，Rh血型表型DCcEe；母血型为O型，Rh表型DCCee。母血清在生理盐水介质中，与全部3支筛检细胞反应均为阴性，在卡式法抗人球蛋白试验中与筛检细胞中2号、3号反应均为阳性，与1号细胞反应阴性，提示母血清检出ABO系统外IgG类不规则抗体，筛检细胞的1号、2号和3号Rh表型分别为DCCee、DccEE、DCcee。为确定母血清抗体特异性，用谱细胞作进一步鉴定，母血清在生理盐水介质中与自身细胞及所有的谱细胞反应均为阴性，在卡式法抗人球蛋白试验中，除与自身细胞及1号(Rh表型DCCee)谱细胞反应为阴性外，其余的反应结果均为阳性，经分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗体(表1)。

新生儿直接抗人球蛋白试验阳性，游离试验新生儿血清与ABO标准红细胞在盐水介质中呈阴性反应，在卡式抗人球蛋白试验中与ABO标准红细胞均呈现阳性反应。酸放散方法释放患儿红细胞，卡式抗人球蛋白法检测放散液，与谱细胞谱中含c和(或)E抗原的细胞反应阳性，与母血清抗体特异性一致(表1)。

表1 母血清及新生儿抗体特异性鉴定

注：“0”代表阴性，“+”代表阳性

由于此抗体在室温条件下于生理盐水介质中没有反应活性，且可通过胎盘进入胎儿体内，检测新生儿红细胞放散液与母血清抗体特异性一致，可判断为IgG性质抗体。应用吸收放散试技术一步鉴定母血清中抗体特异性，选取O型谱系胞Rh表型为dccee和DCcEe型细胞来吸收母血清中抗体[3]，直到吸收后血清不再与谱细胞反应为止，表明已经完全去除了单一性存在的抗-c和抗-E抗体，再用O型DccEE型红细胞测吸收后血清中IgG抗-cE效价为16。选取O型谱系胞Rh表型为DCCEe型红细胞测母血清中IgG抗-E效价为256；选取O型dccee型细胞测得IgG抗-c效价为32。同样方法测得新生儿放散液中抗体效价抗-c为16，抗-E为32，抗-cE为8。

经上述辅助检查，患儿补充临床诊断新生儿溶血病(Rh血型不合)，给予外周动静脉换血治疗，换血血液选择O型Rh表型DCCee(与母Rh血型同型血)[4]。换血后检测，患儿总胆红素97.8 μmol/L，直接胆红素4.3 μmol/L，间接胆红素93.5 μmol/L。患儿经换血、丙种球蛋白输注、光照等治疗后皮肤黄染逐渐消退，血常规等指标逐渐达正常范围，无需呼吸支持治疗，无感染表现，体重增长良好，好转出院。

3 讨论

2012年以来，国际输血协会(International Society of Blood Transfusion，ISBT)新确认了多个血型系统，如Forssman血型系统(FOR，031)、Junior血型系统(JR，032)、Langereis血型系统(LAN，033)、Vel血型系统(VEL，034)和CD59血型系统(CD59，035)，血型系统总数已达35个[5]。除ABO血型系统外，已报道有50多种不同红细胞抗原与新生儿溶血病有关[6]。在我国，ABO系统以及Rh系统D抗原相关的新生儿溶血病报道较多，Rh系统除抗-D抗体外，与E、c抗原相关的抗-E、抗c及抗-cE复合抗体均能引起新生儿溶血病，并在临床上造成严重后果[7-9]。

Rh系统新生儿溶血病是由于Rh阳性的胎儿免疫Rh阴性的母亲所致，再次妊娠时致敏母体产生的抗体经胎盘传播，结合胎儿Rh阳性红细胞表面，导致新生儿溶血、贫血、水肿及严重的新生儿黄疸[10]。本例患儿母亲系3胎2产，有妊娠史，且Rh表型为DCCee，与患儿E、c抗原不合，具备发生新生儿溶血病的条件，患儿生后12小时内出现黄疸，呈进行性加重，胆红素偏高，溶血三项试验均阳性，证实发生新生儿溶血病。大约1%的孕产妇体内有临床有意义的红细胞抗体，当抗体筛检为阳性时，应进一步鉴定抗体的特异性，并确定是否具有临床意义[11]。本例母血清检出ABO系统外具有临床意义的IgG类不规则抗体，并与患儿红细胞放散液中抗体特异性一致，分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗体。国外报道，IgG类抗-c、抗-E均是导致严重Rh系统新生儿溶血病的常见抗体[12,13]，而经妊娠引起免疫后，非但产生单一特异性抗体，也可以产生复合抗体，抗-cE复合抗体由Keith等人于1965年首次发现[14]，亦可引起严重的新生儿溶血病[15]。血清中存在的复合及混合抗体给抗体鉴定带来复杂性，抗-cE相应的复合抗原存在于一条染色体的单倍体上，即所谓顺位，该抗体只和Rh单倍型中的DcE、dcE反应，而和其他单倍型不反应[3,9]。如果同时存在单一性抗体和复合抗体时，必须先把单一性抗体吸尽，在本例血清(放散液)中同时存在抗-c，抗-E及抗-cE，先用dccee及DCcEe红细胞吸收，去除血清(放散液)中单一性抗-c及抗-E抗体，再以DccEE红细胞检测，成功测得复合抗体抗-cE效价，亦通过试验证实了本例患儿是由抗-cE复合抗体合并抗-E、抗-c混合抗体导致的新生儿溶血病，并选择与母Rh血型同型血(O型Rh表型DCCee)对患儿进行换血治疗，取得了良好效果。

[1]王宇宏,刘 冰.用微柱凝胶法诊断新生儿溶血病的实验研究[J].中国实验诊断学,2011,15(12):2018.

[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:255-258.

[3]陈 忠,王雪明.Rh血型复合抗原及复合抗体[J].临床检验杂志,1996,14(6):330.

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[6]Altuntas N,Yenicesu I,Himmetoglu O,et al.The risk assessment study for hemolytic disease of the fetus and newborn in a University Hospital in Turkey[J].Transfus Apher Sci,2013,48(3):377.

[7]林甲进,朱碎永,张 瑛.Rh新生儿溶血病的血清抗体分析[J].中国实验诊断学,2007,11(12):1634.

[8]米弘瑛,李 利,苏品璨.新生儿Rh溶血病8例临床分析[J].第三军医大学学报,2012,34(20):2138.

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吉林省科技厅重点科技成果转化项目(20150307011YY)

1007-4287(2016)11-1911-03

孙长杰，男，53岁，主管技师，研究方向：血液血清学检验技术对临床输血安全性的影响。

2016-02-18)

*共同通讯作者