复发性外阴阴道假丝酵母菌病的病原菌鉴定与药敏分析

郭玉荣，赵晓丽

(1.甘肃省民乐县人民医院检验科，甘肃张掖 734500；2.甘肃省人民医院血库，甘肃兰州 730030)



·临床研究·

复发性外阴阴道假丝酵母菌病的病原菌鉴定与药敏分析

郭玉荣1，赵晓丽2

(1.甘肃省民乐县人民医院检验科，甘肃张掖 734500；2.甘肃省人民医院血库，甘肃兰州 730030)

目的 了解甘肃省民乐地区复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)致病菌株的构成与常用抗真菌药物敏感情况。方法 采集90例RVVC患者阴道分泌物标本接种假丝酵母菌显色培养基完成菌种培养鉴定，采用纸片扩散法进行真菌药敏试验。结果 90份分泌物标本培养阳性83份，阳性率为92.2%，共分离出86株假丝酵母菌，其中白假丝酵母菌62株(72.1%)，光滑假丝酵母菌14株(16.3%)，热带假丝酵母菌5株(5.8%)，克柔假丝酵母菌3株(3.5%)，其他假丝酵母菌2株(2.3%)。86株假丝酵母菌对伊曲康唑(95.3%)和制霉菌素(93.0%)的敏感率最高，其次为5-氟胞嘧啶(80.2%)和氟康唑(67.4%)，对克霉唑(59.3%)和咪康唑(57.0%)较低。结论RVVC病原菌以白假丝酵母菌为主，但优势明显下降，非白假丝酵母菌比率上升，尤以光滑假丝酵母菌明显。假丝酵母菌对临床常用抗真菌药物具有一定耐药性，特别是唑类药物。因此，在治疗RVVC前必须进行真菌培养和药敏试验，根据药敏试验结果选择合适的抗真菌药物治疗。

念珠菌病,外阴阴道； 微生物敏感性试验; 病原菌鉴定

外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)曾称为真菌性阴道炎、外阴阴道念珠菌病等，其病原菌是以白假丝酵母菌为主的酵母菌，其他如光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌等占少数[1]。VVC是常见妇科炎性疾病，大多数妇女一生中至少患过一次VVC，发病率高，病因复杂[2]，诱发因素多，且治疗后容易复发。约5%～10%患者迁延发展后成为复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)。RVVC是指 VVC经治疗临床症状、体征消失，真菌学检查阴性后又出现症状，且真菌学检查阳性或在1年内反复发作4次或4次以上者。RVVC病因更为复杂，临床症状较重，除部分患者有诱发因素外，多数复发机制不明确。RVVC发生与致病假丝酵母菌菌种变迁和耐药有关[3]。为了解甘肃省民乐地区RVVC病原菌构成和对常用抗真菌药物敏感情况，作者对90例RVVC患者阴道分泌物标本进行了假丝酵母菌分离培养和药敏试验，旨在为临床诊治和合理用药提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月至2014年12月甘肃省民乐县人民医院妇科就诊的RVVC患者90例，年龄22～50岁。症状：外阴瘙痒灼痛或伴尿痛及性交痛等，白带增多。体征：外阴潮红水肿，可见抓痕或皲裂，小阴唇内侧及阴道黏膜附着白色膜状物，阴道内可见较多的白色豆渣样分泌物，可呈凝乳状。

1.2 标本采集 嘱患者采集标本前3 d禁止阴道检查、阴道灌洗、盆浴、性交及局部上药等，用消毒棉拭子经阴道扩阴器进入阴道，于后穹隆或阴道内壁采集分泌物标本立即保温送检。

1.3 材料 科玛嘉(CHROMagar)假丝酵母菌显色培养基、药敏平板、抗真菌药敏纸片、质控菌株等购自温州康泰生物科技有限公司。API 20C AUX 酵母菌生化鉴定系统购自法国生物梅里埃公司。

1.4 检测方法

1.4.1 培养与鉴定 直接将分泌物标本连续划线接种于科玛嘉(CHROMagar)假丝酵母菌显色培养基，25 ℃恒温箱培养24～48 h后观察培养基上菌落生长状况，培养7 d后不生长者为阴性。菌落呈绿色至翠绿色，直径约2.0 mm为白假丝酵母菌；菌落呈蓝灰色，直径约1.5mm为热带假丝酵母菌；菌落呈紫色、凸起、表面光滑湿润，直径约2.0 mm为光滑假丝酵母菌；菌落呈粉红色至紫色、扁平、较大、表面粗糙、边缘模糊有微毛，直径4.0～5.0 mm为克柔假丝酵母菌；菌落呈白色至淡粉色为其他假丝酵母。不能确定的假丝酵母菌分纯后采用API 20C CAX酵母菌生化鉴定系统复核鉴定。

1.4.2 药敏试验 选用制霉菌素、咪康唑、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶等6种真菌药敏片对分离纯化的假丝酵母菌进行药敏试验。严格按照厂家使用说明书操作和判读结果。质控菌株：白假丝酵母菌ATCC90028。

2 结 果

2.1 分离菌株构成 90份分泌物标本培养阳性83份，阳性率为92.2%，共检出86株假丝酵母菌，有3份标本合并检出2种假丝酵母菌。其中白假丝酵母菌62株(72.1%)，光滑假丝酵母菌14株(16.3%)，热带假丝酵母菌5株占(5.8%)，克柔假丝酵母菌3株(3.51%)，其他假丝酵母菌2株(2.3%)。见表1。

表1 分离菌株构成(n=86)

2.2 抗真菌药物药敏试验结果 86株假丝酵母菌对伊曲康唑(95.3%)和制霉菌素(93.0%)的敏感率最高，其次为5-氟胞嘧啶(80.2%)和氟康唑(67.4%)，对克霉唑(59.3%)和咪康唑(57.0%)较低。见表2。

表2 抗真菌药物药敏试验结果[n(%)]

3 讨 论

VVC的病原菌为不同种类假丝酵母菌(俗称念珠菌)，是妇女阴道正常菌群成员之一。假丝酵母菌能发酵大量碳水化合物产生有机酸和乳酸杆菌在维持阴道正常菌群微生态平衡和阴道自净过程中具有协同作用。健康妇女阴道中定植的主要是白假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌，其分离率分别为13%～17%和1%～4%[4]，克柔假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、近平假丝酵母菌等分离率较低。VVC属内源性感染，既是微生态失调的原因，也是微生态失调的结果。当宿主长期应用抗生素和激素或机体免疫缺陷时改变了阴道微生物之间的相互制约关系，导致假丝酵母菌大量生长、繁殖，由定植状态的酵母相转变成致病的菌丝相。

近年来随着VVC感染率和复发率不断上升，RVVC发病率持续上升。其病原学表现为致病假丝酵母菌菌谱发生变化，非白假丝酵母菌致病比例逐渐上升并出现了对常用抗真菌药物的耐药现象，从而导致临床治疗的困难和复杂。因此，在RVVC临床诊治中应强调真菌培养和药敏试验。本研究结果显示，90份分泌物中标本培养阳性83份，阳性率为92.2%，检出86株假丝酵母菌，白假丝酵母菌62株(72.1%)，非白假丝酵母菌24株(27.9%)，其中光滑假丝酵母菌14株(16.3%)，占非白假丝酵母菌的一半以上，热带假丝酵母菌5株(5.8%)，克柔假丝酵母菌3株(3.51%)，其他假丝酵母菌2株(2.3%)，感染菌谱已发生变化，虽然白假丝酵母菌仍然是RVVC感染主要病原菌，但优势明显下降，与文献[5-6]研究结果相符。而光滑假丝酵母菌检出率升高，与临床广泛应用唑类药物诱导白假丝酵母菌向光滑假丝酵母菌变迁有关[7]。光滑假丝酵母菌在人体不形成菌丝，只有酵母相，对碱性环境的耐受力高于白假丝酵母菌，对唑类药物敏感率较低，容易反复发作，是RVVC重要的病原菌，只有靠培养才能确诊。从表2可见，86株假丝酵母菌对伊曲康唑(95.3%)和制霉菌素(93.0%)的敏感率最高，其次为5-氟胞嘧啶(80.2%)和氟康唑(67.4%)，对克霉唑(59.3%)和咪康唑(57.0%)较低，且有一定的中介率。与近年来唑类药物在临床广泛应用诱导耐药菌株产生有关，是引起RVVC复发的原因之一。处于中介状态的药敏试验结果，临床治疗中增加用药剂量、延长用药时间，对部分剂量依赖性菌株也有效。

综上所述，临床诊治RVVC时应首先进行真菌培养和药敏试验，针对病原菌选择敏感的抗真菌药物进行规范治疗，强调足量、足疗程、必要时联合用药；重视巩固治疗和定期随诊，避免假丝酵母菌耐药性的产生，以降低RVVC患病率。另外阴道乳酸杆菌是阴道微生态系统中的优势菌群，可降低阴道pH值，阻断假丝酵母菌对阴道上皮细胞的黏附功能以抑制其增长。据文献报道，采用生态疗法，应用阴道用乳杆菌活菌胶囊(商品名：定君生)配合抗真菌药物治疗VVC和RVVC，恢复阴道乳酸杆菌的优势地位，调节阴道微生态平衡，从根本上提高宿主的免疫水平，疗效明显，能显著降低复发率，为治疗VVC和RVVC提供了一种新方法，值得在临床推广应用[8-9]。

[1]刘朝晖，廖秦平.外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)诊治规范修订稿[J].中国实用妇科与产科杂志，2012，28(6)：401-402.

[2]徐艳，焦嫦亮，郑录清，等.外阴阴道念珠菌病病因研究进展[J].海南医学院学报，2006，12(5)：465-468.

[3]周晓维，张振国，刘晓虹.复发性外阴阴道念珠菌病的致病菌种鉴定及药敏试验分析[J].中国微生态学杂志，2013，25(3)：346-347.

[4]李兰娟，感染微生态学[M].北京：人民卫生出版社，2012：431.

[5]王芳，冉崇兰，王薇.复发性外阴阴道假丝酵母菌病的菌种及药敏分析197例[J].实用妇产科杂志，2012，28(6)：505-507.

[6]雷云.复发性外阴阴道假丝酵母菌病致病菌的药敏及其基因分布[J].广西医学，2014，36(3)：288-290.

[7]徐琳，高玉涛，单斌，等.复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种分型及药敏[J].中国微生态学杂志，2007，19(5)：432-434.

[8]高卫辉.乳杆菌活菌胶囊配合制霉菌素治疗外阴阴道假丝酵母菌病的临床研究[J].中国医药导报，2011，8(4)：72-73.

[9]关键.定君生联合伊曲康唑治疗复发性外阴阴道假丝酵母菌病的临床观察[J].黑龙江中医药，2011，40(5)：23-24.

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.048

A

1673-4130(2016)02-0251-03

2015-07-10)