SR-BI基因多态性对瑞舒伐他汀调脂疗效的影响

谈晶花 张代富 黄瑛 沈佳佳

(浦东新区人民医院心血管内科， 上海 201299)



·论著·

SR-BI基因多态性对瑞舒伐他汀调脂疗效的影响

谈晶花 张代富 黄瑛 沈佳佳

(浦东新区人民医院心血管内科， 上海 201299)

目的 探讨SR-BI基因的多态性是否影响瑞舒伐他汀降脂的疗效。方法 本研究检测了147例高脂血症患者和185例正常血脂患者，c.4G>A，c.726+54C>T 和 c.1050C>T 的单核苷酸多态性，血清脂质和载脂蛋白浓度。高脂血症患者瑞舒伐他汀治疗剂量为10 mg/d。于治疗前及开始后第4、8、12周抽血进行血脂指标检查，分析血脂水平的变化情况。结果 SR-BI多态性频率在高脂血症患者组和正常血脂组之间相似(P>0.05)。c.726+54 C>T的T等位基因与正常血脂组人群LDL-c浓度升高相关，与高脂血症组患者apoB和apoB/apoA1升高相关 (P<0.05)。携带c.1050 C等位基因的高脂血症患者(CC和CT基因型)与TT基因型携带者比较，瑞舒伐他汀调脂治疗治疗后，前者总胆固醇、低密度脂蛋白、apoB、apoB/apoA1比率的变化较小(P<0.05)。结论 SR-BI基因多态性和患者血清脂质浓度相关，c.1050C>T单核苷酸多态性和瑞舒伐他汀调脂治疗反应性相关。

清道夫受体BI; SR-BI; 瑞舒伐他汀; 多态性; 胆固醇

B类I型清道夫受体(scavenger receptor claBs B type I, SR-BI) 是一种能与初始及修饰后脂蛋白结合的多蛋白受体[1]，是目前发现的第一种能够选择性介导高密度脂蛋白(HDL)中脂质摄取的细胞表面受体[2]。SR-BI能够介导游离的胆固醇从细胞内转移到缺少脂质的HDL脂蛋白[3]。有研究报道SR-BI的单核苷酸多态性和血脂之间的关系，包括三种常见的类型 (外显子1上的c.4G>A，内含子5上的c.726+54C>T和外显子8上的c.1050C>T)，但结果不稳定[4]。许多研究显示，瑞舒伐他汀的反应性和胆固醇代谢相关蛋白的种类有关[5-6]。然而，SR-BI 的种类和瑞舒伐他汀反应性或者其他降脂药物反应性之间的关系，缺乏与此相关研究的信息。近期，Liu等[7]的研究显示，在GOLDN研究中，SR-BI c.4G>A 的基因多态性和个体非诺贝特治疗后甘油三酯的改变量相关。本研究探讨SR-BI三种类型c.4G>A，c.726+54C>T 和c.1050C>T 对血清脂质浓度的影响，及其对瑞舒伐他汀降脂治疗的高胆固醇血症患者反应性的影响。

1 资料和方法

1.1 资料 随机抽取我院抽取因高血压等疾病住院的332例，其中男性99例，女性233例；将LDL偏高147例纳入高脂血症组LDL-c>4.14 mmol/L，LDL、胆固醇和甘油三酯水平正常患者185例纳入正常血脂组(低密度脂蛋白胆固醇<3.36 mmol/L，甘油三酯<1.94 mmol/L)。患者的排除标准：糖尿病；肝脏，肾脏，甲状腺疾病；孕妇或者口服避孕药治疗的患者；其他继发性血脂异常的患者。对患者的年龄，身高，体重，高血压状况，肥胖状况，吸烟喝酒状况，平时体力活动状况，是否停经，是否有冠状动脉疾病家族史，药物使用情况等均进行记录。所有的患者都同意参与实验，并签署了知情同意书。高脂血症组患者采用4周的清除期，这期间按照AHA推荐低脂饮食。LDL高于4.14 mmol/L的患者给予12周的瑞舒伐他汀治疗，治疗方式是每晚10 mg/d。监测患者血脂情况评估瑞舒伐他汀对于胆固醇的影响。测定患者血清ALT和CK水平判断患者是否出现瑞舒伐他汀的肝脏和肌肉副作用。本研究通过我院伦理委员会审批。

1.2 生化检测 分别于治疗前和接受瑞舒伐他汀治疗第4、8、12周收集患者空腹静脉血液标本，进行血脂指标检查。采用常规的酶比色法检测胆固醇总量，HDL胆固醇和甘油三酯。通过比浊仪检测血清中的载脂蛋白A1和载脂蛋白B含量。LDL，VLDL胆固醇和apoB/apoA1比值都是通过计算得出。采用动力学法检测患者血清中ALT和CK浓度，以评估瑞舒伐他汀对于肝脏和肌肉组织的影响。

1.3 SR-BI 基因分型 经乙二胺四乙酸(EDTA)处理过的血样本通过盐析法提取基因组DNA，根据文献报道方法[4]通过PCR-RFLP分析技术测定SR-BIc.4G>A，c.726+54C>T 和 c.1050C>T基因多态性。

1.4 统计学方法 统计学分析通过Sigma统计学软件v3.5 (SPSS Inc., Chicago IL)等位基因频率和基因型分布通过基因技术评估。哈代-温伯格定律通过2分析，通过最大期望算法得出的单体型频率使用Arlequin v3.11软件。使用SNP分析软件，通过测量连锁不平衡来评估每对SNP之间的LD系数。对于非连续性数值，例如基因型分布和等位基因频率通过卡方检验评估。优势比 (OR) 和95%的置信区间(CI)同时被计算。所有连续变量都是通过Kolmogorov-Smirnov t实验来检验，倾斜变量对数化转变为正常值之后接受统计学分析。两组平均值的区别是通过t检验来评估的，对于多组平均数的曲解通过单因素方差分析(ANOVA)评估。基础脂质量参数和脂质改变比例引入作为依赖性变量，基因型是非依赖性变量，除此之外，年龄，性别，冠心病家族史，高血压，肥胖，吸烟和体力活动被纳入到协变量中，获得非依赖性变量的回归系数和标准误。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料 种族，性别，冠心病病史，高血压，吸烟和平时运动量在血脂正常组患者和高血脂患者之间相似。然而，高血脂组患者平均年龄，平均体重指数(BMI )，肥胖和停经人群比例高于血脂正常组患者(P<0.05)。高血脂组患者和正常血脂组患者比较，总胆固醇，LDL和VLDL胆固醇，甘油三酯，apoB和apoB/apoA的比值升高(P<0.05)，见表1。

表1 本研究纳入患者一般资料

2.2 基因学数据 患者的基因型和单体型频率在两组之间相似(P>0.05)，其与性别、高血压等因素无关(表2)。小等位基因r c.4G>A，c.726C>T和c.1050C>T在高血脂组患者的频率分别是12%，7%和40%，在正常血脂组患者分别是14%，7%和35%。两组患者单核苷酸多态性的分布符合哈代-温伯格定律 (P>0.05)。 c.726+54C>T和c.1050C>T (D′= 0.781)之间有严重的连锁不平衡。根据3个可能的基因多态性，8个可能的单倍型中的7个被确定。最常见的单倍型G1C5C8(正常血脂组54%,高血脂组49%)和 G1C5T8(正常血脂组28%，高血脂组患者34%)(下标号1,5,8分别对应c.4G>A，c.726+54C>T和c.1050C>T)，但是单倍型A1T5T8很少见。

表2 两组患者的基因型和单体型频率(n×10-2)

MAF：最小等位基因频率

2.3 SR-BI多形性和血清脂质含量的关系 正常血脂组患者，c.4A等位基因和低apoA1血清浓度相关(GG，144±28；GA+AA，135±22 mg/dl；P=0.038)。正常血脂组患者含有T等位基因的c.726+54C>T的个体(CT+TT 基因型)和含有CC基因型的个体比较，含有较高的LDL胆固醇。正常血脂组患者，SR-BI c.1050C>T 单核苷酸基因型和基础血脂含量无关(表3)。高血脂组患者，c.726+54C>T CT和TT基因型携带者和CC基因型携带者比较，含有较高的基础apoB (P=0.034)和apoB/apoAI比值 (P=0.015)。高血脂组患者，c.4G>A和c.1050C>T和基础血脂含量之间无关。两组患者都接受关于SR-BI单核苷酸多态性和基础血脂浓度之间关系的多线性回归分析。在经过协变量调整之后，确认了之前的发现。只有正常血脂组患者，前发现 c.4G>A和apoA1之间的关系无统计学意义。2.4 瑞舒伐他汀的作用 瑞舒伐他汀治疗(10 mg/d，共12周)，SR-BI c.726+54C>T基因多型性中，与CC基因型携带者比较，CT和TT携带者含有较高的LDL胆固醇含量(P<0.05) 和apoB/apoA1比率 (P<0.032)。和CC与CT基因型携带者比较，含有 c.1050TT基因型的患者含有较低的LDL胆固醇含量。而且TT基因型提示患者对于瑞舒伐他汀有更好的总胆固醇(P<0.032)和LDL胆固醇反应性(P<0.005)。除此之外，和CC或者CT基因型携带者比较，TT基因型携带者也含有较高的apoB和apoB/apoA1比率(P<0.005)。

在高血脂组，未发现 c.4G>A和治疗后患者血脂之间的关系、这些实验结果在接受根据协变量调整后的多线性回归研究中都得到了验证。瑞舒伐他汀治疗模型预测，c.1050TT基因型能够分别导致LDL胆固醇和apoB7.43%和6.69%减低。高血脂组患者，我们研究了SR-BI多态性和LDL胆固醇对瑞舒伐他汀反应性之间的关系。LDL胆固醇的降低以百分位点分级(第一百分位点<34%，第二百分位点34%～44%，第三百分位点>44%，分别记为RLDL<34，RLDL34～44和RLDL>44)。SR-BI基因型频率和LDL胆固醇反应性之间的关系，在百分位点患者(RLDL<34，n=49)和第二百分位点(RLDL33～44，n=49)与第三百分位点(RLDL>44，n=49)患者之间进行比较。

SR-BI c.1050TT 基因型在RLDL34～44和RLDL> 44(21%)，和RLDL<34比较发现频率更高 (8%，P=0.044)。而且，含有TT基因型的高血脂组患者对于瑞舒伐他汀的反应性是普通患者的3倍 (OR=3.07，95% CI: 1.00～9.5)。我们也比较了LDL胆固醇降低的不同百分位点组，较低的百分位点组 (RLDL<34)和较高的百分位点组 (RLDL> 44)之间。和RLDL>44组患者比较(CT+TT: 69%；P=0.0049)，CC和CT基因型频率，在RLDL<34组患者出现频率更高(RLDL<34，CT+TT: 92%)。CC和CT基因型患者和TT基因型患者比较，有5倍的几率有较低的瑞舒伐他汀反应性(OR=4.96，95% CI: 1.51～16.31)。

表3 c.4G>A，c.726+54C>T和c.1050C>T多态性对健康患者血清脂质含量影响

3 讨论

通过选择性摄取脂质，SR-BI参与含有apoB的脂蛋白和修饰后的脂蛋白例如氧化LDL的代谢[8]，LDL氧化是促进动脉粥样硬化的危险因素。实际上，SR-BI cDNA转染的哺乳动物的细胞证实，其与LDL，VLDL，HDL，氧化的LDL有很高的亲和力[9]。小鼠实验结果表明，通过调节SR-BI的基因表达，能够影响血清LDL和VLDL的。SR-BI增多的转基因小鼠血清中HDL和LDL胆固醇含量降低[10]；然而，与SR-BI阴性小鼠比较，SR-BI阳性小鼠的VLDL结合力下降[11]。Rhainds等[12]采用人源HepG2细胞进行抗体阻断实验，结果表明SR-BI抗血清能够抑制LDL和HDL的结合力。Rhainds还证明，被SR-BI反义RNA片段转染的HepG2细胞，其与LDL和HDL之间的蛋白接触减少，导致46%和55%的LDL和HDL胆固醇酯选择性重摄取下降[12]。

埃及和北美学者的队列研究中发现[4,13]，SR-BI基因多态性在一切人群中和血脂浓度相关。本研究首次探讨三种常见的SR-BI单核苷酸多态性和瑞舒伐他汀降脂反应性之间的关系。一些病例对照研究结果显示SR-BI多形性和人类的冠心病相关。含有c.1050C>T等位基因的男性，有更高的冠心病风险，含有此等位基因的女性和含有c.726+54C>T的男性有更高的周围血管病风险。在此研究中，排除性别因素外，SCABR1 c.4G>A, c.726+54C>T和 c.1050C>T,与高胆固醇血症之间没有相关性。高血脂患者， c.726+54C>T和升高apoB之间的关系确认了之前的研究结果。而且，高血脂患者，含有c.726+54C>T 单倍型患者(G1C5C8/G1T5C8)和较低HDL胆固醇和apoA1浓度相关。这些结果提示c.726+54C>T单核苷酸多态性可能与胆固醇反向代谢相关，可能在人群中增加冠心病的危险度。

本实验通过协变量校准后，c.4A等位基因在正常血脂组患者和低apoA1相关，但此基因和血脂浓度无相关性。继往报道c.4G>A在男性和HDL胆固醇升高，LDL胆固醇降低相关。相反，Brown等[14]研究发现，含有c.4A等位基因的糖尿病患者有很低的LDL和HDL胆固醇浓度。这方面，最近其他的SR-BI种类受体发现和胰岛素抵抗性性相关，提示此基因和Ⅱ型糖尿病相关[15]。

我们的研究没有发现任何c.1050C>T和血清血脂含量相关的联系。相似地，在PROCAGENE病例对照研究中，也发现此SNP和血脂含量无关。之前的研究显示，SR-BI多态性和胆固醇逆向代谢的改变相关。SR-BI在随机对照试验中显示作用十分关键，是小鼠体内HDL胆固醇含量的重要决定成分。小鼠肝脏过度表达SR-BI和血清HDL胆固醇浓度减低相关，然而动物实验中动物主要通过HDL携带胆固醇，但是成年人都是通过LDL和VLDL携带胆固醇。LDL受体缺乏的小鼠和有家族性高胆固醇血症的个体显示，SR-BI功能或者表达的改变和含有apoB的脂蛋白功能改变相关。据报道，SR-BI血清浓度和HDL胆固醇含量反相关，和高α脂蛋白血症的患者HDL大小反相关[16-21]。

SR-BI多形性能够影响血脂浓度和对于他汀反应的生理机制尚不清楚。c.4G>A导致的细胞内氮端第2号氨基酸改变，但选择性摄取胆固醇的基团是在受体细胞外的成分[22-23]。 c.726+54C>T基因多态性是固有的，c.1050C>T不会改变350位置的氨基酸，推断基因改变的效果是影响调节机制。这些多态性能够导致基因表达浓度或基因剪切位点的改变，但如今依然未知。不能排除，这些种类的基因和其他存在于这个基因中的功能基因，或者相近位置的功能基因存在连锁不平衡效应。该基因的功能可能与脂质代谢相关的或者舒伐他汀反应性相关。

4 结论

SR-BI c.726+54C>T的c.1050C>T基因多态性和致粥样硬化的脂质浓度相关，与LDL胆固醇对舒伐他汀的反应性相关。我们的研究结果显示c.1050C>T可作为一个有用的预测舒伐他汀治疗反应性的标志物。

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Influence of SR-BI polymorphisms on serum lipids of hypercholesterolemic individuals treated with rosuvastatin

TAN Jinghuang，ZHANG Daifu，HUANG Ying，et al

(DepartmentofCardiovascularInternalMedicine,ThePeople’sHospitalofShanghaiPudong，Shanghai201299,China)

Objective SR-BI is a key component in cholesterol metabolism. SR-BI gene polymorphism was related to variations on plasma lipoprotein profile and other risk factors for cardiovascular disease. We tested the relationship between 3 kinds of SR-BI single nucleotide polymorphisms (SNPs) and hypercholesterolemia in a Chinese population, and to identify whether these variants can influence lipid-lowering response to rosuvastatin. Methods c.4G>A, c.726+54C>T and c.1050C>T SNPs and serum concentrations of lipid and apolipoproteins were evaluated in 147 hypercholesterolemic (HC) and 185 normo-lipidemic (NL) unrelated Chinese subjects. HC patients were treated with rosuvastatin (10 mg/day/12 weeks).Results Frequencies of SR-BI polymorphisms were similar between the HC and NL groups (P<0.05). The allele for c.726+54C>T was associated with higher LDL-c in NL and with higher apoB and apoB/apoAI inHC (P<0.05). HC individuals carrying c.1050C allele carriers (CC and CT genotypes) had lower change of totalcholesterol, LDL-c, apoB and apoB/apoAI ratio (P<0.05) than the TT genotype carriers in response to rosuvastatin. Conclusion The SR-BI polymorphisms are related with variations in serum lipids in Chinese population andc.1050C>T SNP is associated with lipid-lowering rosuvastatin response.

Scavenger receptor BI; SR-BI; rosuvastatin; Polymorphisms; Cholesterol

R 589.2

A

10.3969/j.issn.1672-3511.2016.11.022

2016-02-01；

2016-05-10； 编辑： 张文秀)