延边地区朝鲜族和汉族人群MTRR A66G基因多态性与脑梗死的关系

安海莲，吴兆洋，吴光，崔松彪

(延边大学附属医院,吉林延吉133000)



延边地区朝鲜族和汉族人群MTRR A66G基因多态性与脑梗死的关系

安海莲，吴兆洋，吴光，崔松彪

(延边大学附属医院,吉林延吉133000)

目的 观察延边地区朝鲜族和汉族人群脑梗死与蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR) A66G基因多态性的关系及民族差异。方法 采用PCR-RFLP法检测352例脑梗死患者(病例组)和315例健康人群(对照组)MTRR A66G基因多态性，并分析基因型和等位基因在不同民族的分布情况。结果 病例组和对照组均具有MTRR A66G的AA、AG和GG基因型, 两组3种基因型及A和G等位基因分布均无差异(P均>0.05)；对照组中朝、汉两民族间MTRR A66G基因AA、AG和GG基因型及A和G等位基因分布均无差异(P均>0.05)，但病例组中朝鲜族患者GG基因型分布频率(11.11%)高于汉族(5.03%),有统计学差异(P<0.05)。结论 MTRR基因A66G多态性与延边地区人群脑梗死不相关，但是朝鲜族人群中MTRR基因66位A突变为G患脑梗死风险高于汉族。

脑梗死；蛋氨酸合成酶还原酶；同型半胱氨酸；基因多态性；朝鲜族；汉族；延边

高同型半胱氨酸(Hcy)血症与脑梗死的发生密切相关[1,2]，而蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)是Hcy代谢过程中的主要辅酶，其基因多态性可引起相应的酶缺陷或活性下降。MTRR基因错义突变是导致该酶缺乏或活性降低的主要机制，而MTRR A66G位点中AA基因型可突变为AG或GG基因型，可使残基22处蛋氨酸被异亮氨酸取代，进而导致Hcy水平升高。近年来研究[3～5]表明，MTRR A66G基因多态性与脑血管疾病密切相关，但具有地区和种族差异。2014年6月～2015年5月，我们观察了延边地区朝鲜族和汉族脑梗死患者中MTRR A66G基因多态性分布，探讨MTRR A66G基因多态性与脑梗死的相关性及民族间差异。

1 资料与方法

1.1 临床资料 遵循知情自愿原则，选择延边大学附属医院神经内科住院的352例脑梗死患者为病例组。其中男212例、女140例，年龄(62.59±10.89)岁，汉族199例、朝鲜族153例，均符合1996年中华医学会第四次全国脑血管学术会议制定的脑血管病诊断标准，均经CT或MRI证实。同时，选取与病例组性别、年龄、民族等分布无差异的315例健康体检者为对照组。其中男179例、女136例，年龄(58.05±11.58)岁，汉族178例、朝鲜族137例，均无脑血管疾病史。两组人群均为长期居住延边地区的朝鲜族和汉族。

1.2 MTRR A66G基因多态性检测方法 留取两组血样，利用全血基因组DNA提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司)提取基因组DNA，并用核酸定量分析仪进行DNA含量及纯度检测。参考文献[6]设计引物序列，上游引物5′-CAGGCAAAGGCCATCGCAGAAGACAT-3′，下游引物5′-CACTTCCCAACCAAAATTCTTCAAAG-3′。PCR扩增体系为30 μL，其中DNA模板2 μL、上下引物各2 μL、Taq PCR Premix 15 μL、双蒸水9 μL。PCR反应条件：94 ℃预变性4 min、94 ℃变性 1 mim、58 ℃退火 1 min、72 ℃延伸 1 min ，共40个循环；末次循环后72 ℃延伸 5 min。以2.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴别后，加入1 μL限制性内切酶NdeⅠ在37 ℃过夜。以5%琼脂糖电泳分析酶切产物，判断基因型并摄像。MTRR A66G位点PCR产物长度为151 bp，NdeⅠ的酶切后含124、27 bp片段为AA型，含124、151、27 bp片段为AG型，含151、27 bp片段为GG型。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。数据比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组MTRR A66G基因多态性比较 两组MTRR A66G基因的AA、AG和GG基因型及A、G等位基因分布均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 两组MTRR A66G基因多态性比较(例)

2.2 两组朝鲜族人群MTRR A66G基因多态性比较 两组朝鲜族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 两组朝鲜族人群MTRR A66G基因多态性比较(例)

2.3 两组汉族人群MTRR A66G基因多态性比较 两组朝鲜族人群MTRR A66G基因AA、AG、GG基因型及A、G等位基因分布均无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

表3 两组汉族人群MTRR A66G基因多态性比较(例)

2.4 病例组中汉族和朝鲜族MTRR A66G基因多态性比较 病例组朝鲜族GG基因型分布频率为11.11%，高于汉族的5.03%(P<0.05)；朝鲜族和汉族MTRR A66G基因AA、AG基因型及A、G等位基因分布均无统计学意义(P均>0.05)。见表4。

表4 病例组中朝鲜族与汉族的MTRR A66G基因多态性比较(例)

注：与朝鲜族比较，*P<0.05。

3 讨论

高Hcy血症是脑血管疾病的独立危险因子，而叶酸代谢通路介导的一碳单位代谢影响Hcy水平[7]。MTRR基因多态性会影响蛋氨酸代谢，导致其浓度升高。Wilson等[8]报道，MTRR基因66位A基因突变为G基因在人群中很常见，G等位基因频率在健康对照中达51%。杜子明等[9]检测人MTRR A66G基因突变频率为49%，本研究显示G等位基因在健康对照中达46.98%,可见MTRR基因66位A基因突变为G基因确实比较普遍。由于MTRR基因A66G突变率很高，此基因位点易受环境因素的影响。对国内10个地域汉族成年人MTRR A66G基因多态性分布的研究[10～13]结果表明，G等位基因和GG型基因频率从我国低水平的山东(23.7%和5.4%)升高到海南(29.2%和8.6%)，表明MTRR A66G基因多态性具有地区差异性。本研究结果显示，G等位基因和GG基因型频率分别为46.98%和6.35%,表明延边地区G等位基因频率比我国其他已报到的地区平均水平更高，甚至高于最高的海南地区。

国内外对MTRR A66G与脑梗死的相关性研究有不同的结果。Bosco等[14]报道，MTRR A66G基因多态性与缺血性脑卒中没有关系；徐恩等[15]选取急性脑梗死患者136例与70例正常人进行对照研究，结果表明MTRR A66G基因多态性不是脑梗死的独立遗传危险因素。但是，国内病例对照研究[16]结果表明，MTRR A66G基因多态性与脑梗死发病相关，且GG基因型可能为其易感基因。本研究结果显示，脑梗死患者MTRR基因A66G基因型及等位基因分布情况与健康对照之间无差异，与其他国内外学者研究相一致。尽管病例组中朝鲜族和汉族A66G等位基因分布无差异性，但是病例组GG基因型分布频率朝鲜族高于汉族2.21倍。说明汉族人群中MTRR A66G的GG基因型比朝鲜族人群比例低，而且MTRR基因A66G的分布具有民族差异性。我们认为，MTRR A66G基因多态性与脑梗死关联性的研究结论不一，这可能与MTRR A66G基因多态性具有地区和种族差异性、基因的突变对甲硫氨酸的影响尚不明确以及脑梗死的发生与环境和基因多因素共同作用等有关。但是能从基因水平筛查脑梗死高危人群，无疑会对脑梗死的一级预防起到重要作用。因此，分析叶酸代谢相关基因对脑梗死发生发展的影响，确定MTRR基因多态性是否为脑梗死的遗传易感因素进而进行早期干预具有深远意义。

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基金项目：河南省科技攻关计划项目(152102310192)。

通信作者：祁相焕(E-mail: qixianghuanhuan@126.com)

国家自然科学基金资助项目(81260179)。

崔松彪(E-mail： sbcui@ybu.edu.cn)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.42.014

R743.3

B

1002-266X(2016)42-0046-03

2016-08-22)