色素上皮衍生因子在肾癌组织中的表达及临床意义

李龚龙，郑艳丽，乔庆东，徐万海

(1.新乡市中心医院泌尿外一科，河南 新乡 453000；2.新乡医学院外国语言学系，河南 新乡 453003；3. 哈尔滨医科大学第四附属医院泌尿外科，黑龙江 哈尔滨 150000)



色素上皮衍生因子在肾癌组织中的表达及临床意义

李龚龙1，郑艳丽2，乔庆东1，徐万海3

(1.新乡市中心医院泌尿外一科，河南 新乡 453000；2.新乡医学院外国语言学系，河南 新乡 453003；3. 哈尔滨医科大学第四附属医院泌尿外科，黑龙江 哈尔滨 150000)

目的 探讨肾癌组织中色素上皮衍生因子(PEDF)的表达及临床意义。方法 应用免疫组化方法检测46例肾癌及10例癌旁正常肾脏组织中PEDF蛋白的表达情况，分析PEDF表达与临床病理参数的关系。结果 46例肾癌组织标本中，PEDF阳性表达率为23.9%，明显低于癌旁正常肾脏组织的100.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。在肾癌组织中，PEDF蛋白的表达与浸润深度及病理学分期有关(P<0.05)。结论 肾癌组织中PEDF蛋白的阳性表达降低，对肾癌预后的判断有一定的参考价值。

肾癌；色素上皮衍生因子；免疫组化

肿瘤的生长、转移和复发依赖于新生血管的形成。肿瘤的血管生成受到包括血管内皮生长因子vascular endothelial growth factor，VEGF)在内的血管生成刺激因子和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)在内的血管生成抑制因子的严格调控。PEDF是目前已知最强的内源性血管生成抑制因子，PEDF在一系列肿瘤中都存在表达下调的现象，但PEDF在肾癌组织中的表达情况，国内尚未见报道。本研究旨在应用免疫组化方法检测肾癌组织中PEDF蛋白的表达，揭示其表达与临床病理参数的相关性，以期为肾癌患者的预后判断和临床治疗提供理论依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料 入组2006年1月至2009年9月哈尔滨医科大学附属第四医院手术切除的肾癌组织标本46例，男33例，女13例；年龄42～82岁，中位年龄58.9岁；病理证实均为肾癌，其中肾透明细胞癌39例，嗜色细胞癌4例，嫌色细胞癌3例；参照2002年AJCC推荐TNM分期标准[1]：Ⅰ期18例，Ⅱ期7例，Ⅲ期11例，Ⅳ期10例。对照组为10例癌旁正常肾组织。1.2 主要试剂 鼠抗人PEDF多克隆抗体(美国Chemicon公司，工作浓度1:200)；两步法免疫组化试剂山羊抗鼠IgG抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司，工作浓度1:500)；浓缩型DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 染色方法 将肾癌组织和正常肾脏组织切片均经过质量分数4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片。切片按常规依次二甲苯脱蜡，体积分数100%～80%梯度酒精水化；体积分数3% H2O2室温孵育10 min，加入修复液，高压锅高压2 min，PBS冲洗3次，每次5 min，加入鼠抗人PEDF多克隆抗体，4 ℃冰箱过夜，PBS冲洗3次，每次5 min，DAB显色，自来水冲洗10 min，苏木素复染，自来水再次冲洗10 min，蒸馏水洗涤，体积分数80%～100%梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片，烤片。

1.3.2 结果判定 以PEDF阳性细胞所占百分比为指标，PEDF阳性表达为在细胞浆内充满棕黄色颗粒。PEDF染色结果判定：阳性细胞百分比<5%为0分、5%～<25%为1分、25%～<50%为2分、≥50%为3分，0、1分为阴性，2、3分为阳性。

1.3.3 统计学处理 采用SPSS 19.0进行统计学分析，计数资料比较应用χ2检验或Fisher精确概率法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 PEDF蛋白在不同肾脏组织中的表达 正常肾脏组织和肾癌组织中PEDF蛋白阳性表达为细胞浆内着色。根据染色结果，46例肾癌组织标本中PEDF阳性表达率为23.9%(11/46)，明显低于癌旁正常肾脏组织的100.0%(10/10)，差异有统计学意义(χ2=20.290，P<0.05)。见图1～3。

图1 肾癌组织中PEDF蛋白的阳性表达(SP，×200)

图2 正常肾脏组织中PEDF蛋白的阳性表达(SP，×200)

图3 肾癌组织中PEDF蛋白的阴性表达(×200)

2.2 PEDF蛋白表达与临床病理参数的关系 在肾癌组织中，PEDF蛋白的表达与患者的年龄、性别、淋巴结浸润、静脉浸润、肿瘤大小和远处转移无关(P>0.05)，而与浸润深度及病理学分期有关(P<0.05)。见表1。

表1 PEDF蛋白表达与肾癌临床病理参数的关系

3 讨论

肾癌是最常见泌尿生殖系统肿瘤之一，占成人恶性肿瘤的2%～3%[2]。外科手术是肾癌治疗的首选方法，但术后复发和远处转移是影响肾癌疗效的关键因素，早期肾癌患者在根治性肾切除术后约30%将发生复发和远处转移[3]。肾癌的复发、远处转移与肾癌细胞向静脉、淋巴结和邻近器官的侵袭有关。新生血管形成是肿瘤生长的必要条件，同时也为肿瘤的侵袭、转移和复发提供了可能[4]。通过抑制肿瘤新生血管形成，切断肿瘤的营养供应和迁移通道，从而使肿瘤处于“休眠”状态，不对人体造成危害，这是目前肿瘤治疗的新策略。PEDF最早是由胎儿视网膜色素上皮细胞的培养基中发现的[5]，是维持角膜无血管状态的重要因子。PEDF是一种多功能蛋白，能够促进肿瘤细胞分化成熟、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞新生血管形成。PEDF是目前所知的生物学活性最强的内源性血管生成抑制因子，并且其只抑制新生血管的生成，对原来的血管结构不产生影响[6-7]，是肿瘤靶向治疗的理想生物因子。

研究表明PEDF在一系列的肿瘤疾病中都存在表达下调的现象，如胰腺癌[8]、乳腺癌[9]、神经胶质瘤[10]、卵巢癌[11]等，但PEDF在肾癌组织中的表达情况，国内还未见报道。本研究应用免疫组化方法对46例肾癌及10例癌旁正常肾脏组织中PEDF蛋白的表达情况进行检测。结果显示：46例肾癌组织标本中PEDF阳性表达率为23.9%，明显低于癌旁正常肾脏组织的100.0%，说明PEDF表达的缺失与肾癌的发生发展有着紧密的联系，与相关报道一致。

研究证明，胰腺癌[12]、神经胶质瘤[10]、非小细胞肺癌[13]、乳腺癌[9]中PEDF在低分级肿瘤组织中表达明显高于高分级肿瘤组织，且PEDF表达水平与患者肿瘤复发和转移明确相关。本研究的另一个目的是了解PEDF表达与肾癌患者临床预后的关系。46例肾癌组织标本中PEDF蛋白表达与患者的年龄、性别、淋巴结浸润、肿瘤大小、远处转移无关，而与肾周筋膜浸润、临床分期等多种临床病理因素密切相关。T1、T2期与T3、T4相比，PEDF阳性率高于后者，Ⅰ～Ⅱ期患者PEDF阳性率高于Ⅲ～Ⅳ期患者。由此可以看出，PEDF表达的下降与肾癌患者临床分期和预后相关，为肾癌临床诊断和判断患者预后提供了新的指标。PEDF蛋白表达与远处转移无关，这可能因为样本量较小，只有1例远处转移患者，存在一定的误差。

综上所述，PEDF蛋白的表达与肾癌的发病和预后有关。但由于样本量较小，研究有一定的局限性。

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Expression of Pigment Epithelium-derived Factor in the Renal Cell Carcinoma Tissues

Li Gonglong1,Zheng Yanli2,Qiao Qingdong1,Xu Wanhai3

(1.DepartmentofUrinarySurgery,XinxiangCentralHospital,Xinxiang453000,China;2.DepartmentofForeignLanguages,XinxiangMedicalCollege,Xinxiang453003,China;3.DepartmentofUrinarySurgery,theForthAffiliatedHospital,HarbinMedicalUniversity,Harbin150000,China)

Objective To research the expression and clinical significance of pigment epithelium-derived factor (PEDF) protein in renal cell carcinoma tissues.Methods Immunohistochemistry methods was used to detect the expression of PEDF protein in the 46 cases of renal cell carcinoma tissues and 10 cases of normal kidney tissues, and then the relationship between expression of PEDF protein and pathological parameters were analyzed.Results The positive rate of PEDF expression was 23.9% in the renal cell carcinoma tissues, and was 100.0% in the normal kidney tissues, respectively (P<0.05). PEDF expression was related to tumor depth of invasion, venous invasion and clinical stage (P<0.05).Conclusion Reduction of the PEDF expression level in the renal cell carcinoma tissues, has a vital clinical significance to become judges the patient prognosis.

renal cell carcinoma; pigment epithelium-derived factor; immunohistochemistry

李龚龙(1982-)，男，硕士，主治医师，主要从事泌尿外科工作。E-mail：519105523@qq.com

徐万海(1974-)，男，博士，主任医师，博士生导师，主要从事泌尿生殖系肿瘤及肾上腺肿瘤的临床与基础研究。

10.3969/j.issn.1673-5412.2016.05.003

R737.11；R730.23

A

1673-5412(2016)05-0377-03

2016-05-22)