脂联素rs266729多态性和肥胖在多囊卵巢综合征中交互作用研究

邓 莉，李 艳

(武汉大学人民医院检验科，湖北 武汉 430060)



脂联素rs266729多态性和肥胖在多囊卵巢综合征中交互作用研究

邓 莉，李 艳

(武汉大学人民医院检验科，湖北 武汉 430060)

目的 探讨脂联素rs266729多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)关联性及其与肥胖交互作用。方法 采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析2014年2月至2015年8月住院的120例PCOS患者和同期140例体检正常对照者的rs266729基因型。非条件Logistic分析各基因型与发病易感性的关系以及与肥胖的交互作用。结果 携带C(CC/CT)基因个体患病风险较非C基因携带者(TT)风险明显增加1.55倍(OR=1.55，95%CI：1.41～3.71，P=0.00；校正OR=1.61，95%CI：1.51～4.01，P=0.00)；非条件Logistic分析表明认携带CC/CT基因型肥胖个体PCOS罹患风险是携带TT基因非肥胖个体的3.88倍(OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P=0.00；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AP=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83)。结论 脂联素rs266729多态性增加多囊卵巢综合症罹患风险，且与肥胖存在多囊卵巢综合症发病中存在协同效应。

脂联素；多态性；多囊卵巢综合征；易感性；交互作用

多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome，PCOS)是妇科一种常见的内分泌紊乱疾病，其临床症状主要是闭经、多毛和双侧卵巢多囊性增大的无排卵相关综合征，同时伴随胰岛素血症、高瘦素血症及高雄激素血症。PCOS易好发2型糖尿病、高血压、子宫内膜癌及心血管疾病，对妇女的健康构成严重威胁[1]。由于PCOS的发病机制尚不明了，因而了解原发型PCOS发病机制对于预防PCOS显得尤为重要。近年来，随着人们生活水平的提高以及体育锻炼缺乏，肥胖症已经成为困扰人民群众健康的重要因素。国内外学者现一致明确肥胖是PCOS的危险因素[2-3]。脂联素(adiponectin)是一种与肥胖密切相关的细胞因子，研究表明它具有抗炎、降糖和增敏胰岛素的作用[4-5]。为此，本研究通过采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应探讨脂联素rs266729多态性与PCOS易感性关系以及与肥胖的交互作用。

1资料与方法

1.1研究对象

病例组选取2013年4月至2015年6月于武汉大学人民医院妇产科门诊患者，多囊卵巢综合征诊治符合中华医学会妇产科学分会内分泌学的《多囊卵巢综合征诊治指南》，选取体检中心健康个体作为对照人群。年龄范围21～41岁。最终120例病例，140例对照组受试者纳入研究。

1.2一般资料

收集年龄、性别、体重指数、吸烟史、饮酒史等一般资料。病例组和对照组中罹患其他系统严重疾病个体应予以排除。本文若男性酒精消耗大于140g/周，女性大于>70g/周至少2年则定义饮酒，所有肥胖诊断均符合按照《中国高血压防治指南2010》；即女性患者腰围≥80cm。高等教育定于为高中以上的教育。

1.3脂联素多态性检测

采取经典酚-氯仿经典方法提取外周血基因组DNA。根据脂联素基因的核苷酸序列设计各个位点的扩增引物使用PCR扩增目的基因片段。PCR扩增引物序列:脂联素(脂联素)引物为:上游：5′-GAGCCGTGGTGCCACCTGGG-3′；下游：5′-CGCCTCTTTACTCCCTCCGAC-3′；PCR反应体系(25μL)包含100ng提取DNA，1.0UTaq酶，2μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反应条件：95℃变性6分钟，94℃ 30 秒，60℃30秒，72℃45秒30个循环，最后72℃延伸10分钟。限制性内切酶BsaHI、NlaIII酶切。酶切产物进行3%琼脂糖电泳，EB染色成像以此判定酶切基因型。

1.4.统计学方法

本研究中的资料均采用SPSS 19.0进行分析。基因型和等位基因频率比较采用非条件Logistic回归分析，基因型Hardy-Weinberg平衡法卡方检验。计量资料符合正态分布则采用均数加减标准差表示。用t检验，运用logistic分析脂联素rs266729多态性在多囊卵巢综合征中作用。通过非条件Logistic以及Bootstrap方法估脂联素多态与肥胖 间的相加交互作用[6]，计算相对超额危险度比(relative excess risk due to interaction，RERI)、归因比(proportion attributable to interaction，AP)和交互作用指数(the synergy index,S)及其95%CI。如RERI和AP值95%CI包括0、S值95%CI包括1，表明不存在相加交互作用[6]。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1一般情况

病例组和对照组年龄、高等教育、家族史、饮酒等方面均无明显统计学差异(均P>0.05)，而体力劳动、初潮月经紊乱等方面有显著性差异(均P<0.05)，见表1。

变量病例(n=120)对照(n=140)t/χ2P年龄(岁)26.51±6.7227.92±5.531.230.46高等教育39(32.50)48(34.29)2.130.12PCOS家族史54(4.50)6(4.29)0.120.92饮酒15(12.50)18(12.86)0.410.76体力劳动46(38.33)44(31.43)8.110.01初潮月经紊乱26(21.67)25(17.86)6.810.03肥胖71(59.17)50(35.71)6.120.03

2.2脂联素rs266729多态性与多囊卵巢综合征易感性

rs266729对照组和病例组均符合Hardy-Weinberg平衡法(χ2=0.45，P=0.41；χ2=0.47，P=0.39)；rs1799983基因型CT的患病风险是基因型TT的1.21倍(OR=1.21，95%CI：1.09～1.89，P=0.04)。CC基因型者患病风险是基因型TT的1.45倍(OR=1.45，95%CI：1.31～3.23，P=0.00)。C基因携带者(CC+CT)患病风险是非C基因携带者(TT)的1.55倍(OR=1.51，95%CI：1.41～3.71，P=0.00)。利用非条件Logistic回归分析校正体力劳动,初潮月经紊乱等因素T基因携带者(TT/CT)患病风险是非T基因携带者(CC)1.61倍(OR=1.61，95%CI：1.51～4.01，P=0.00)，见表2。

表2 脂联素rs266729基因型分布及与PCOS易感性的关系

注：a:体力劳动，初潮月经紊乱因素。

2.3 rs266729与肥胖交互作用

本文采用非条件Logistic分析rs266729多态性与肥胖交互作用。与携带TT基因不肥胖个体相比，携带CT/CC基因型不肥胖个体罹患PCOS风险增加1.21倍(OR=1.21，95%CI：1.14～2.76，P=0.04)；携带TT基因型肥胖个体罹患PCOS风险增加1.16倍(OR=1.16，95%CI：1.09～2.31，P=0.05)；携带CT/CC基因型肥胖个体罹患PCOS风险增加3.88倍(OR=3.88，95%CI：2.72～5.76，P=0.00；RERI=2.51，95%CI：1.22～3.80；AP=0.54，95%CI：0.34～0.74；S=1.56，95%CI：1.12～2.83)，RERI和AP值的95%CI不包括0,S值的95%CI不包括1。相加交互作用分析结果表明OR=1.67，95%CI:1.21～2.87，见表3。

表3 rs266729多态性与肥胖二者交互作用

注：a体力劳动，初潮月经紊乱因素；Padd：相加交互作用P值；Pmulti：相乘交互作用P值。

3讨论

3.1脂联素rs266729基因型分布及与多囊卵巢综合征易感性

迄今为止，国内外脂联素多态性与多囊卵巢综合征易感性的关系可见报道。我国学者发现武汉、天津等地区人群中多囊卵巢综合症发病脂联素多态性明显相关[7-8]；而印度、伊朗发现多囊卵巢综合征发病与脂联素多态性无明显的相关[9-10]。上述结果提示不同地区脂联素基因多态性与多囊卵巢综合征的关联性表现出一定的差异。为此，探讨湖北地区人群脂联素多态性与易感性关联性。本文通过病例-对照实验分析发现脂联素rs266729携带C(CC/CT)基因个体患病风险较非C基因携带者(TT)风险明显增加1.21倍，提示rs266729是PCOS的危险因素。人类脂联素基因位于人类3号染色体3q27 ，目前发现该基因存在近多个多态性位点，不同个体脂联素表达水平呈现一定的差异，这可能与脂联素多态性有关[9]。多囊卵巢综合征发病除与生活环境以及自身因素有关外，还与饮食以及遗传感染密切相关[1]。现已有研究报道提示，脂联素多态性与二型糖尿病、代谢综合征、非酒精性脂肪性肝病等代谢性疾病易感性密切相关[10-12]。近年来，流行病学不断证实遗传因素在多囊卵巢综合征发病中发挥着重要作用。从遗传易感性角度确定多囊卵巢综合征高危人群，并进行针对性的预防是目前降低多囊卵巢综合征发生风险的有效措施。

3.2脂联素多态性与肥胖在多囊卵巢综合征交互作用

现已知家族史、饮酒、体力劳动、初潮月经紊乱均为多囊卵巢综合征的重要的影响因素[1]。为了排除这些混杂因素在脂联素rs266729多态性与多囊卵巢综合征关联性研究中的影响，本文采取非条件Logistic回归予以校正，校正后发现脂联素 多态性与多囊卵巢综合征仍有显著的关联性(P<0.05)。众所周知，多囊卵巢综合征患病是个体遗传因素与外界环境因素共同作用的结果[1]，为了进一步探讨脂联素rs266729多态性与肥胖对多囊卵巢综合征患病是否有交互作用。本文可采用非条件Logistic回归分析予以验证[5]，结果还表明携带CC/CT基因型肥胖个体多囊卵巢综合征罹患风险是携带TT基因非肥胖个体的3.33倍，提示脂联素rs266729多态性与肥胖在多囊卵巢综合征发病中存在协同作用。脂联素多态性和肥胖在多囊卵巢综合征及其他疾病中的交互作用鲜见报道，其机制目前尚无法阐明。既往研究报道脂联素多态性与肥胖的相关[13]。参照脂联素多态性可以影响其表达水平高低的相关报道[7]，脂联素多态性既可直接增加多囊卵巢综合征易感性[13-15]，同时也可以影响肥胖而间接增加多囊卵巢综合征易感性而发挥协同效应[1]。本研究存在一定不足，最显著的是诊断只考虑了是否肥胖，而没有充分考虑肥胖的严重程度。其次，本文仅仅考虑肥胖，而没有考虑生活习惯以及环境因素的影响。再次，研究中样本量较小，需要进一步扩大样本量。

总之，脂联rs266729多态性可以增加个体多囊卵巢综合征罹患风险，且和肥胖在多囊卵巢综合征发病中发挥着协同作用。本研究存在一定不足，为更好研究脂联素多态性在多囊卵巢综合征易感性以及与肥胖的交互作用尚需要开展更大样本量、设计更严谨的研究。

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[专业责任编辑： 吕淑兰]

Interaction between adiponectin rs266729 polymorphisms and obesity in polycystic ovarian syndrome

DENG Li, LI Yan

(Department of Clinical Laboratory, Renmin Hospital, Hubei Wuhan 430060, China)

Objective To study the relationship between rs266729 polymorphism in endothelial adiponectin and polycystic ovarian syndrome (PCOS) and the interaction with obesity. Methods Genotypes of rs266729 of 120 hospitalized cases of PCOS and 140 controls selected from February 2014 to August 2015 were examined by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The unconditional Logistic regression (ULR) was performed to assess the correlation of genotypes with susceptibility and the interaction with obesity. Results The risk of developing PCOS for CC/CT genotype carriers increased by 1.55 times compared to TT (OR=1.55, 95%CI: 1.41-3.71,P=0.00;ORadjust=1.61,95%CI:1.51-4.01,P=0.00). ULR analysis showed that obesity-positive subjects with genotype CT/CC had 3.88 times of PCOS risk of obesity-negative subjects with genotype TT (OR=3.88,95%CI:2.72-5.76,P=0.00) (RERI=2.51, 95%CI:1.22-3.80;API=0.54,95%CI:0.34-0.74;S=1.56,95%CI:1.12-2.83).Conclusion Adiponectin rs266729 polymorphism is associated with increased risk for PCOS, and its interaction with obesity has synergistic effects on risk of PCOS.

adiponectin; polymorphism; polycystic ovarian syndrome (PCOS); susceptibility; interaction

2015-11-12

邓 莉(1981-)，女，主治医师，主要从事分子生物学检验工作。

李 艳，教授。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.10.013

R711.6

A

1673-5293(2016)10-1204-03