HPLC法测定石杉碱甲分散片的含量

2016-11-29 03:40
安徽化工 2016年4期
关键词:石杉分散片液相色谱仪

孙 巍

(多多药业有限公司,黑龙江佳木斯154007)

HPLC法测定石杉碱甲分散片的含量

孙巍

(多多药业有限公司,黑龙江佳木斯154007)

通过对石杉碱甲分散片的含量方法学研究,建立石杉碱甲新剂型分散片含量的HPLC测定方法。

HPLC;石杉碱甲;分散片;含量测定

石杉碱甲[(-)-Huperzine,HupA]是我国科学家刘嘉森于1986年从草药千层塔(蛇足石杉)中分离得到的一种新型石松类生物碱有效单体,因其具有强效、高选择性的抗乙酞胆碱醋酶活性,已引起世界各国科学家的广泛关注,成为药学界受人瞩目的研究热点之一[1]。国内HupA片剂“哈伯因”于1994年上市,首先用于治疗阿尔茨海默病。与FDA批准的同类药物相比,HupA的化学结构独特,极高地选择性抑制脑内乙酰胆碱脂酶,可增强脑内胆碱神经元的功能。此外,该药还具有作用时间长、易透过血脑屏障、口服生物利用度高以及不良反应少等优点,优于加兰他敏、多奈哌齐和他克林等[1-2]。本文简要叙述了石杉碱甲的新剂型分散片中HPLC法测定含量的研究。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪(Agilent 1100系列);分析天平(Sartorius BP211D);超声波仪(天津恒奥HS3120);色谱柱(Agilent ZORBAX SB-C18 5μm 4.6*150mm)。甲醇(德国MERCK公司HPLC级);三乙醇胺(常熟市第二化工厂,AR);石杉碱甲对照品(中检院,批号100243-201202);超纯水(Milli-Q)。

2 色谱条件

参考石杉碱甲的化学结构特点及相关标准,采用甲醇∶水∶三乙醇胺=45∶55∶0.02体系作为流动相,以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,以水为溶剂,检测波长为310nm,温度为室温,能够对样品很好的分离分析。

3 测定方法

取本品的细粉适量(约相当于石杉碱甲0.05mg),置于10mL容量瓶中,加流动相适量,超声使石杉碱甲溶解,加流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品溶液。按照上述色谱条件,精密量取50μL注入液相色谱仪,记录色谱图;另取石杉碱甲对照品适量,精密称定,加流动相溶解并定量稀释成每1mL约含5μg的溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算供试品中的C15H18N2O含量[3]。

4 色谱系统适应性试验

按照上述色谱条件,取供试品溶液50μL注入液相色谱仪,记录色谱图,理论塔板数按石杉碱甲峰计算不低于2000,与其它杂质分离度不低于2.0,见表1。

表1 色谱系统适应性试验

试验表明,色谱系统适应性良好。

5 含量测定方法验证

5.1专属性试验

按中国药典(三、专属性要求)[4],分别进行辅料的干扰试验。样品和辅料通过氧化、强酸、强碱、加热、光照等破坏试验产生降解产物后进行干扰试验,按含量测定方法检测主成分,结果表明,理论塔板数按石杉碱甲峰计算均不低于1500,石杉碱甲峰与其它经破坏产生的降解产物色谱峰分离度均大于1.5,表明在本色谱系统条件下,降解产物对测定无干扰,专属性较好。

5.2溶液稳定性试验

取测定法项下配制的对照品溶液及供试品溶液,室温下放置0、2、4、6、8、10、12h,分别取50μL注入液相色谱仪,记录色谱图,测量石杉碱甲峰面积,计算RSD,结果见表2。

表2 溶液稳定性试验

试验结果表明,在12h内,本品对照品溶液及供试品溶液均能保持稳定。

5.3线性试验

精密称取石杉碱甲对照品适量,按中国药典(六、线性)所述要求[4],测量石杉碱甲的峰面积A,以浓度C对峰面积A进行线性回归,结果见表3,回归曲线见图1。

表3 石杉碱甲线性试验

图1 含量测定回归曲线

结果表明,石杉碱甲在2.352~9.152μg/mL,范围内呈良好线性。

5.4灵敏度试验

精密称取石杉碱甲适量,加流动相配制成每1mL含石杉碱甲5.237μg的溶液,将该溶液加流动相逐步稀释配制系列溶液,分别取50μL注入液相色谱仪,记录色谱图,信噪比为2∶1时,测得石杉碱甲最低检测限浓度为0.02272μg/mL,最低检出量为1.136ng,信噪比为10∶1时,石杉碱甲最低定量浓度为0.1021μg/mL,最低定量限为5.105ng。

5.5回收率试验

精密称取对照品加入按处方配比的辅料制成每1mL中含石杉碱甲4μg、5μg、6μg溶液各10mL,取续滤液为供试品溶液,按照含量测定项下方法检测,结果见表4。

表4 石杉碱甲回收率测定

试验测得平均回收率为100.84%,RSD为0.74%,表明回收率良好。

5.6精密度试验

按含量测定方法及中国药典(二、精密度)要求[4],分别进行连续进样精密度试验、重复性试验、中间精密度试验,结果见表5、表6、表7。

表5 连续进样精密度试验

表6 含量测定重复性试验

表7 含量测定中间精密度试验

结果表明,本法的仪器精密度、重复性及中间精密度均良好。

6 结论

通过以上含量测定方法学验证试验,证明本研究的HPLC的色谱条件和检测方法可以用于石杉碱甲分散片的含量测定。

[1]谭昌恒,朱大元.石松生物碱研究进展[J].中国天然药物,2003,1(10):1-7.

[2]王洪新,王键.石杉碱甲的研究进展[J].中国野生植物资源,2001,20(6):4-10.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典四部0512高效液相色谱法[S].

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典四部9101药品质量标准分析方法验证指导原则[S].

Determination of Dispersible Tablets of Huperzine-A by HPLC

SUN Wei
(DuoduoPharmaceutical Co.,Ltd.,Jiamusi 154007,China)

The aim of this study is to research on the content through the method of dispersible tablets of Huperzine-A,establishingmethod ofHuperzine-AHPLCmethod for the determination ofcontent.

HPLC;Huperzine-A;dispersible tablets;content determination

10.3969/j.issn.1008-553X.2016.04.044

TQ460.7+2;R917

A

1008-553X(2016)04-0119-03

2016-03-22

孙巍(1981-),女,毕业于齐齐哈尔医学院,工程师,从事药品质量管控工作,0454-8358917,18845452468,hljddyy@163.com。

猜你喜欢
石杉分散片液相色谱仪
食品检测实验室中高效液相色谱仪的日常维护及应用
液相色谱仪最小检测浓度测量结果不确定度评定
分析高效液相色谱仪测定食品中苏丹红
分析高效液相色谱仪测定食品中苏丹红
穿心莲有效部位分散片的制备及其质量标准研究
蛇足石杉内生真菌FS4次级代谢产物的研究
石杉碱甲治疗血管性痴呆的有效性与安全性Meta分析
HPLC法同时测定17种石杉亚科植物石杉碱甲、乙
罗布麻叶分散片的制备及溶出度测定
石杉碱甲联合尼麦角林治疗血管性痴呆的效果观察