青藤外敷贴制备及质量标准研究

张燏琦，李永吉,郭玉岩，王锐

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)



青藤外敷贴制备及质量标准研究

张燏琦，李永吉*,郭玉岩，王锐

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：优选青藤外敷贴的最佳制备工艺，建立严谨的质量控制方法。方法：采用聚丙烯酸钠、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制备成亲水凝胶骨架贴，以正交试验法考察贴片制备工艺，采用UPLC法测定青藤碱含量。结果：制备出的凝胶骨架型外敷贴具备粘性强、剥离性好、可反复揭贴的特点。结论：该制备工艺具有科学性、合理性，质量标准具有可靠性，质量控制方便可行，具有非常好的开发价值和应用前景。

青藤外敷贴；质量标准；制备工艺

防己科植物青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils]及毛青藤[Sinomeniumacutum(Thunb)Rehd1et Wils1Var Cinerrum Rehd1et Wils]的干燥藤茎称为青风藤,1000多年以前就已用于风湿性疾病的治疗[1]。青藤碱(sinomenine，SN)是中药青风藤(Sinomenii Caulis)中的重要生物活性成分。具很强的抗炎、免疫抑制、镇痛、降血压、抗心律失常等多种药理作用[2]。临床上主要用于治疗风湿性、类风湿性关节炎、骨性关节炎，甚至骨癌等疾病[1]。将青藤碱制成外敷贴可克服目前临床上现有的口服片剂生物利用度低、不良反应较多以及注射剂半衰期短、需频繁给药等诸多缺点。青藤外敷贴以青藤碱为主药，以聚丙烯酸钠、聚丙烯吡咯烷酮等新型高分子材料制备成亲水凝胶骨架贴，可用于具有中医学特色的穴位给药途径释放给药。

1 材料和仪器

1.1 材料

青藤碱(药用，广州白云山制药厂)；青藤碱对照品(中国卫生部生物制品药品检定所)；甲醇(色谱纯,山东禹王实业有限公司)；聚丙烯酸钠(PANA，广州市化学工业研究所)；PVP -K30(聚乙烯吡咯烷酮,广东南方化玻公司)；Carbomer -940(广州博峰化工科技有限公司 )；PEG-400、丙二醇、甘油等均购自天津科密欧化学试剂公司。

1.2 仪器

真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；高效液相色谱仪(美国Waters公司)；分析电子天平(上海市百典仪器厂)；超声振荡仪(深圳市科工达超声设备有限公司)；多功能磁力搅拌器(安徽省天长恒运电器厂)。

2 方法与结果

2.1 粘性分析方法的建立

方法参见参考文献[3]。

2.2 空白基质的处方[4]

空白基质处方组成为PVP:Carbomer:PANA:甘油:PEG-400:丙二醇=8:1:1:0.5:0.5:4。配方中甘油作用为保湿和防腐，丙二醇作用为保湿，PEG-400作为增塑剂。经三批产品验证得此基质性能良好。

2.3 外敷贴的成型工艺

采用L9(34)正交试验设计，对制备时间、温度和各组分加入顺序这三项因素进行考察，看其对载药外敷贴质量的影响，优选出最佳制备工艺，表1中因素C为三组分加入的顺序，三组分为：青藤碱(青藤碱用药用粉碎机粉碎，过100目筛)，软化剂(适量橄榄油)和空白基质。按L9(34)安排9次实验。以贴剂的粘性强度优良与否为考察指标，对测定的“初粘力”“持粘力”“剥离强度”这3个客观指标，按好差程度进行评分，最差者为1分，最高者分9分；将三项指标所得分数相加，总分即是该次实验的综合评分。结果见表2、表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交试验设计及结果

表3 方差分析

方差分析结果显示，C因素对结果的影响较明显，为主要影响因素。而A、B两因素可根据实际情况进行选择。因此, 最佳工艺为A1B3C3。即药物加入顺序为空白基质先和青藤碱混合，然后再加入软化剂，工艺参数为80℃加热1 h并缓慢搅拌。将得到的胶浆用浇铸法趁热在模具上铺展成膜厚不超过1.5 mm的凝胶贴。室温晾干过夜后，置于真空干燥箱中50℃真空干燥0.5 h，达到表面固化而有弹性，室温条件下放置，脱模。用医用透明胶覆盖表层，用PVC膜覆盖下层，中间为贴剂；所得的青藤碱外敷贴表面呈凹凸不平状。

2.4 验证试验

按上述的最佳制备工艺，重复制备三批样品，粘性、剥离性、残留性的指标均良好。表明该工艺可行。

3 质量标准的研究

3.1 UPLC法测定青藤碱含量的方法与结果

3.1.1 色谱条件的确定

色谱柱为Hypersil GOLD C18柱(150 mm×2.1 mm，3 μm)；流动相为水-乙腈-乙二胺(70∶30∶0.25);流速为0.3 ml/min；进样体积为2 μL；检测波长为262 nm。

3.1.2 对照品溶液的制备

精密称取减压干燥至恒重的青藤碱对照品，用甲醇配置成每1 ml中约含0.42 mg的溶液10 ml,摇匀，即得对照品溶液。

3.1.3 供试品溶液的制备

取供试品贴片2.5 g，置于超声振荡仪上作用30 min，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，滤液置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶液定容，即得到了供试品溶液。

3.1.4 标准曲线的制备

取青藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成含青藤碱0.446 mg/mL的对照品贮备液，精密吸取1 ml、2 ml、7 ml、8 ml置10 ml量瓶中，甲醇溶稀释定容，得到浓度为0.0446、0.0892、0.3122、0.3568 mg/ml的对照品溶液及浓度为0.446 mg/ml的储备液，分别进样10 μl，以对照品浓度(C)对峰面积(A)进行线性回归。Y=9E+06x+102803 (R=0.9999)线性范围为0.0446～0.446 mg/ml，线性关系良好。

3.1.5 空白试验

取未加青藤碱的样品，依照上述方法制成溶液，置于10 ml容量瓶中，精密吸取2.0 μL注入气相色谱仪中，经气相色谱方法分析绘制色谱图，结果显示，未有相应的干扰峰出现，说明除青藤碱外的其他基质对青藤碱含量测定无干扰。

3.1.6 精密度实验

分别精密称取5个样品适量(约60 mg)，置25 ml量瓶中，甲醇溶解定容,滤过，在选定色谱条件下连续重复进样5次，以峰面积比值计算青藤碱含量，RSD分别为1.34%，结果表明本方法精密度良好。

3.1.7 重复性试验

精密吸取5份供试液，各进样5 μL测定青藤碱含量，RSD分别为1.04%，结果显示本方法重复性良好。

3.1.8 稳定性试验

精密吸取浓度为0.42 mg/mL的青藤碱对照品2 μL，分别在0，2，4，6，8 h五个时间点测定一次，以峰面积比值计算青藤碱含量，RSD为1.17%，结果表明样品溶液放置8 h以内稳定。

3.1.9 加样回收率试验

取已知含量为6.23 mg/g的样品2.5 g，取青藤碱对照品适量，精密称定，加入样品中，超声不少于30 min，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，弃杂质，得供试品溶液。测青藤碱含量，计算得回收率为100.25%，RSD为1.09%。

3.1.10 样品含量测定

取3批成品，分别测定其中青藤碱含量并计算，得青藤碱含量在6.20～6.28 mg/g，平均为6.24 mg/g,确定贴中青藤碱含量为不得低于6.0 mg/g。

3.2 粘性标准的制定

按粘性评定标准对所制得的三批样品进行检测，初粘力在10.0～10.5 cm之间，平均值为10.31 cm；持粘力在3.0～3.4 min之间，平均值为3.19 min；剥离强度在16.3～16.9 s之间，平均值为16.67 s，确定指标为：“初粘力”距离<15 cm；“持粘力”>3 min；“剥离强度”>16 s。

4 讨论

本文通过正交实验优选出了青藤碱外敷贴的最佳制备工艺，制备出一种粘性特质优良、剥离性良好、可反复揭贴的凝胶骨架控释穴位贴。且该制备工艺具有可靠性、可行性、科学性及合理性，所建立的质量标准可用于质量控制。但在制备过程中，也存在一些问题，包括对药物青藤碱的溶解后制备出的外敷贴表面不平整，会出现表面凹凸不平状等一些细小问题，是本课题需要进一步优化的一部分。

将青藤碱制成骨架型贴剂可有效的避免上述临床上遇到的问题，且将青藤碱外敷贴用于关节给药,可更直接、更有效、更方便的治疗各类关节炎,也为以后用青藤碱医治各类关节炎的研究奠定了坚实的基础。将凝胶骨架型贴片用于中药关节穴位给药，对中药靶向给药、经皮给药研究来说，也是很好的探索，具有深远的实践意义,为以后中药穴位给药奠定了基础,开辟了新天地,具有较好的开发价值和应用前景。

[1] 江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社,1982:12341.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2005.

[3] 王锐,吕邵娃,王艳宏,等.清脑醒神贴制备及质量标准的研究[J].时珍国医国药,2011,22(3):651-653.

[4] 王锐,吕邵娃,李永吉,等.清脑醒神贴基质的研究[J].黑龙江医药,2009,22(2):139．

国家自然科学基金项目(No.81473359)

张燏琦(1989-)，女,黑龙江中医药大学2012级药剂学专业硕士研究生。

李永吉*(1957-)，男，博士，教授，博士研究生导师,主要研究方向:经皮给药、中药注射剂及新药开发。

2015-08-26

R28

A

1002-2406(2016)05-0055-03

修回日期：2015-09-20