血清白细胞介素-37水平与类风湿关节炎发病及病情进展的相关性

孙淑银 王颖翠

(即墨市人民医院风湿免疫科，山东 即墨 266200)



血清白细胞介素-37水平与类风湿关节炎发病及病情进展的相关性

孙淑银 王颖翠1

(即墨市人民医院风湿免疫科，山东 即墨 266200)

目的 探讨血清白细胞介素(IL)-37水平与类风湿关节炎(RA)发病及病情进展的相关性。方法 选择50例RA患者(观察组)和30例健康者(对照组)，观察或检测治疗前后关节肿胀数、关节压痛数、关节炎活动度评分(DAS28)及血清C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、类风湿因子(RF)和IL-37水平及IL-37 mRNA表达，并与对照组进行分析，分析血清IL-37水平与以上各指标的相关性。结果 观察组治疗前的关节肿胀数、关节压痛数和DAS28评分均高于对照组(P<0.05)，治疗后以上临床指标均显著改善(P<0.05)；观察组治疗前血清中CRP、ESR、RF水平均高于对照组(P<0.05)，治疗后这3项实验室指标明显降低(P<0.05)；观察组治疗前血清IL-37水平、IL-37 mRNA表达明显高于对照组(P<0.05)，治疗后明显较治疗前降低(P<0.05)，且血清IL-37水平与以上临床指标和实验室指标呈正相关(P<0.05)。结论 血清中IL-37与RA的发病及病情进展密切相关，其在RA病程进展过程中具有抑制炎症的作用。

白细胞介素-37；类风湿关节炎

类风湿关节炎(RA)是以对称性多关节炎为主要表现的全身性自身免疫性疾病，主要累及周围关节，可伴有关节外系统性损害，多数患者在发病2年内出现不可逆性骨关节破坏，导致残疾，在一定程度上影响患者的生存和生活质量。RA的发病机制至今仍未完全明确，可能与各亚型的CD4+T细胞及其分泌细胞因子紊乱有关〔2〕。研究发现，关节滑膜细胞增生及炎症细胞浸润是该病的主要病理变化，滑膜内异常增生的关节滑膜成纤维样细胞(FLS)可分泌破坏软骨和骨的白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6等多种炎性因子；又因关节内滑膜生成侵袭性血管翳，使滑膜增厚、渗出增加，分泌多种细胞因子，进而破坏软骨、骨和周围组织〔3〕。大量研究表明，IL-37在RA患者滑膜衬内层细胞高表达，具有抑制促炎症因子、减轻炎症反应的功能〔4，5〕。本实验初步探讨IL-37在RA患者中的表达情况及其与病情进展的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2013年10月至2014年5月我院收治的50例RA患者为观察组。纳入标准：所有患者均满足2010年美国风湿病学会(ACR)/欧洲抗风湿病联盟(EULAR)RA评分标准〔6〕，排除肝肾疾病、严重心脑血管疾病、败血症、严重感染、恶性肿瘤、活动性结核病或结核菌素试验阳性。男42例，女8例，年龄48～86岁，平均(56.25±11.72)岁，病程2～316个月，平均(54.85±61.12)个月。选取同期来我院健康体检的30例健康者为对照组，男24例，女6例，年龄21～58岁，平均(45.73±11.38)岁，经检查无急、慢性病史、无遗传家庭史、无肿瘤、无自身免疫性疾病。两组在性别及年龄比较均无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。实验征得本院伦理委员会批准且研究对象全部签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床指标和实验室指标观察 患者均给予对症治疗，于治疗前、后检查并记录关节肿胀数、关节压痛数，计算关节炎活动度评分(DAS28)，计算方法〔7〕：DAS28=0.56×关节压痛数+0.28×关节肿胀数+0.7ln〔红细胞沉降率(ESR)〕×1.08+0.16；用C反应蛋白(CRP)检测试剂盒经FIA8000免疫定量分析仪(南京普朗医疗设备有限公司提供)单向免疫扩散法检测CRP；用自动生化分析仪(日本OLYMPUS AU5400)按乳胶凝集试剂盒(上海捷门生物技术合作公司)说明书检测RF；用配套枸橼酸抗凝管收集全血经ESR-30全自动血沉仪(均由上海迅达医疗食品有限公司提供)检测ESR。对照组按相同方法记录或检测以上指标。

1.2.2 血清IL-37水平的检测 分别于治疗前、治疗后空腹12 h后采集外周静脉血2 ml，注入预先加了血清分离胶的无菌促凝试管，室温静置2 h后3 000 r/min离心20 min，取血清待测。具体操作严格按照人血清IL-37 ELISA分析试剂盒(美国R&D公司)说明书进行。同时检测对照组血清IL37水平，方法同观察组。

1.2.3 实时定量PCR检测IL-37 mRNA表达 分别于治疗前、后空腹12 h后采集外周静脉血2 ml，注入含EDTA的抗凝管中混匀，-80℃保存待测。RT-PCR检测操作按说明书进行：①提取细胞：取上述外周血样本，按试剂盒说明书提取全血中单核细胞；②提取总RNA：采用Trizol试剂盒提取总RNA，经紫外分光光度计检测RNA纯度及浓度，以A260/A280值1.8～2.0为宜；③逆转录：按逆转录试剂盒说明书操作合成cDNA：RT10×Buffer 2 μl+dNTP 2 μl+MgCl24 μl+引物1 μl+逆转录酶0.5 μl，补充RNase Free dH2O至体积20 μl，IL-37引物由Primer Premier5.0设计软件设计而成，上游引物：5′-CGGGATCCATGGTTCACACAAGTCCA-3′，下游引物：5′-CCCAAGCTTCTAATCGCTGACCTCACT-3′，196 bp；内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)依文献设计而得〔8〕，上游引物：5′-TGACGTGGACATCCGCAAAC-3′，下游引物：5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，204 bp；④PCR扩增：设置PCR循环条件：95℃变性10 min、95℃退火15 s、60℃延伸1 min，循环40个，共重复3次；⑤取10 μl上述PCR产物于2.0%琼脂糖凝胶进行电泳50 min，用凝胶成像系统SC805拍照条带的光密度，以GAPDH光密度值作为参考定量标准，以IL-37/GAPDH的比值作为IL-37 mRNA的相对表达量，取平均数进行统计学处理。

1.3 统计方法 使用SPSS17.0软件，计量资料采用t检验，相关性分析用Pearson直线相关分析。

2 结 果

2.1 两组临床指标和实验室指标比较 治疗前患者的关节肿胀数、关节压痛数、DAS28评分均高于对照组(P<0.05)，治疗后患者以上指标较治疗前明显下降(P<0.05)，观察组治疗前血清CRP、ESR、RF明显高于对照组(P<0.05)，治疗后以上指标均明显降低(P<0.05)，见表1。

表1 两组临床指标和实验室指标比较±s)

与对照组比较：1)P<0.05；与治疗前比较：2)P<0.05；下表同

2.2 血清IL-37水平及IL-37 mRNA表达 观察组治疗前血清中的IL-37水平及IL-37 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)，治疗后明显下降(P<0.05)，见表2。

2.3 血清IL-37水平与类RA发病及病情进展的相关性 见表3。观察组血清IL-37水平与关节肿胀数、关节压痛数、DAS28评分及CRP、ESR、RF呈正相关(P<0.05)。

表2 两组IL-37水平及IL-37mRNA表达比较

表3 观察组血清中IL-37水平与其他指标的相关性

3 讨 论

RA是因炎症导致肉芽组织与纤维组织增生，多数为缓慢起病，也可在短时间内发生关节肿痛等临床表现；该病主要侵犯手、腕、肩、膝等周围关节，引起关节肿胀、疼痛，导致患者失去劳动能力甚至残疾，也可能损害心脏、肾脏、肺脏及血液系统而缩短患者生存时间〔9〕。临床上RA治疗手段包括物理治疗、休息、手术及药物治疗，药物治疗有糖皮质激素、非甾体类抗炎药(NSAIDs)、生物制剂、慢作用抗风湿药(SAARDs)及中药等〔10〕。因为RA发病机制复杂、病程反复、对机体危害大，故在治疗上仍然缺乏有效的根治方案〔11〕。越来越多的研究者认为早期诊断和干预RA很有必要〔12〕。目前诊断RA的免疫学指标主要包括CRP、抗环瓜氨酸肽(anti-CCP)抗体、RF、ESR、抗核周因子等〔13〕，也通过它们来评估病情和疗效：①在炎症发生过程中急性相反应蛋白(CRP)由于细胞因子等因素的刺激导致其合成增加高达100～1000倍，提示着炎症和损伤，且其增加幅度与疾病严重程度相关，患者在RA活动期CRP持续升高，缓解期则下降〔14，15〕；②ESR是反映炎症的敏感指标，在RA患者中若ESR快，则患者关节肿胀、晨僵等症状就会严重，疾病的进展快、预后差，若ESR下降则提示治疗有效〔16〕；③RA患者关节滑膜充血、水肿甚至软骨破坏是因为RF与变性的IgG结合形成免疫复合物在关节滑膜等处沉积并诱发炎症，多数观察组血清中RF增加，且其滴度与病情严重程度呈正相关，故可用于判断病情和治疗效果，因其特异性较低，一般与抗-CCP抗体、ESR、CRP等其他指标联合检测〔17〕。IL-37是2000年在肿瘤研究过程中发现的IL-1家庭的成员，其基因位于人的2号染色体，因具有先天性炎症免疫抑制剂的作用〔18〕而备受关注。经证实，IL-37分子量最大的异构体IL-37b在肝缺血再灌注损伤〔19〕、系统性红斑狼疮〔20〕、外源性刺激诱导的结肠炎、关节炎、胰腺炎〔21〕等多种炎症性疾病中起保护作用。本实验说明关节肿胀数、关节压痛数、DAS28评分、CRP、ESR、RF可以反映RA的病情变化〔22〕；治疗前观察组血清IL-37水平明显高于对照组，可能是病理状态下观察组体内的TNF等促炎症细胞因子诱导IL-37的生成〔23，24〕，治疗后观察组IL-37较治疗前明显下降，可能生成的IL-37发挥抑炎作用控制了炎症的恶化，而随着炎症的好转，诱导生成的IL-37也减少。本研究中，经Pearman分析，发现IL-37与RA的病情进展有密切关系。

综上所述，IL-37在RA患者血清中高表达，与RA的病情变化密切相关，随着炎症反应严重而升高。同时，IL-37可抑制炎症反应，可作为诊断和治疗RA等炎症疾病的新依据和新靶点。

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〔2015-12-30修回〕

(编辑 李相军)

王颖翠(1972-)，女，硕士，副主任医师，主要从事冠心病心衰方面的研究。

孙淑银(1965-)，女，主治医师，主要从事风湿免疫方面的研究。

R593.22

A

1005-9202(2016)20-5115-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.085

1 山东大学齐鲁医院青岛院区心血管中心