复方小儿止咳口服溶液的质量标准提高研究Δ

张敏新，黄爱文，宋洪涛（南京军区福州总医院药学科，福州　350025）

复方小儿止咳口服溶液的质量标准提高研究Δ

张敏新＊，黄爱文，宋洪涛#（南京军区福州总医院药学科，福州350025）

目的：优化和提高复方小儿止咳口服溶液的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对制剂中的甘草进行定性鉴别；采用化学反应法对制剂中吐根酊、氯化铵进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中甘草酸铵的含量：色谱柱为Agilent Zorbax XDB C18，流动相为乙腈-0.2 mol/L乙酸铵溶液（20∶80，V/V），流速为1.0 ml/min，检测波长为250 nm，柱温为30℃，进样量为10 μl。结果：甘草的TLC斑点清晰，分离良好，阴性对照无干扰。吐根酊、氯化铵的鉴别反应阳性特征显著。甘草酸铵检测质量浓度线性范围为6.08～72.96µg/ml（r=0.999 9）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜1.0%；加样回收率为99.69%～100.28%（RSD=0.20%，n=6）。结论：经优化和提高的标准可有效控制复方小儿止咳口服溶液的质量。

复方小儿止咳口服溶液；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

复方小儿止咳口服溶液为本院小儿科验方制剂，临床主要用于小儿咳嗽、痰多。该药原标准鉴别项只有甘草流浸膏、单糖浆、吐根酊和氯化铵的化学法鉴别，无相应的薄层色谱法（TLC）鉴别，且含量测定是以滴定法测定处方中的氯化铵，由于滴定结果颜色干扰大，难以判断滴定终点，因此误差较大。为有效控制本制剂的质量，笔者制定了本复方制剂中甘草（TLC法）、吐根、氯化铵（化学反应法）的鉴别方法，并采用高效液相色谱法（HPLC）测定有效成分甘草酸铵的含量。

1　材料

1.1仪器

1200型HPLC仪，包括G1316A型二极管阵列检测器、Chemstation色谱工作站（美国Agilent公司）；AL204型分析天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］；KQ-800KDE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2药品与试剂

复方小儿止咳口服溶液（本院制剂室自制，批号：20153161、20153162、20153163，规格：100 ml/瓶）；甘草流浸膏（宝鸡金森制药有限公司，批号：20150203）；甘草苷对照品（批号：111610-201106，纯度＞98%）、甘草对照药材（批号：120904-201318）、甘草酸铵对照品（批号：110731-201116，纯度＞98%）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2　方法与结果[1-2]

2.1甘草的TLC鉴别

取样品20 ml，以水饱和的正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液；取甘草苷对照品适量，加甲醇制成甘草苷质量浓度为1 mg/ml的对照品溶液；再取甘草对照药材粉末1 g，加甲醇30 ml，超声（功率：250 W，频率：40 kHz，下同）处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3 ml使溶解，作为对照药材溶液；另取缺甘草流浸膏的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。按TLC法［2015年版《中国药典》（一部）］［3］试验，吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱对应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，详见图1。

图1　甘草的薄层色谱图1.对照品；2.对照药材；3～5.供试品；6.阴性对照Fig 1　TLC chromatograms of G.uralensis1.reference substance；2.control medicines；3-5.test samples；6.negative control

2.2吐根酊的鉴别

取样品10 ml，加水5 ml，加氨试液2 ml使成碱性；加二氯甲烷20 ml振摇，分取二氯甲烷层，挥干，残渣加稀硫酸1～2滴，混匀，加硫酸2滴及钼酸少许，静置30 min，观察样品颜色。结果，样品显绿色，为阳性反应。

2.3氯化铵的鉴别

取样品2份，每份10 ml，置于50 ml纳氏比色管中。一份加硝酸银试液1.0 ml，摇匀，放置10 min，反复滤过，至滤液完全澄清，加规定量的标准氯化钠溶液，再加水稀释至50 ml，摇匀，暗处放置5 min，作为对照溶液；另一份加硝酸银试液1.0 ml，再加水稀释至50 ml，摇匀，暗处放置5 min，与对照溶液比较。结果，样品呈阳性反应。

2.4含量测定

2.4.1色谱条件色谱柱：Agilent Zorbax XDB C18（150 mm× 4.6 mm，5µm）；流动相：乙腈-0.2mol/L乙酸铵（20∶80，V/V）；流速：1.0 ml/min；检测波长：250 nm；柱温：30℃；进样量：10 µl。

2.4.2对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品适量，加流动相制成甘草酸铵质量浓度为300µg/ml的对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液适量，加流动相制成甘草酸铵质量浓度为20µg/ml的对照品溶液。

2.4.3供试品溶液的制备 （1）复方小儿止咳口服溶液供试品精密量取样品1 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇30 ml，超声处理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置于25 ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得。（2）甘草流浸膏供试品溶液 精密量取甘草流浸膏2 ml，置于100 ml量瓶中，加甲醇40 ml，超声处理30 min，取出，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置于50 ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得。

2.4.4阴性对照溶液的制备按复方小儿止咳口服溶液处方和制备工艺制备缺甘草流浸膏的阴性样品，并按“2.4.3”项下方法制成阴性对照溶液。

2.4.5专属性试验取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图2。结果，在阴性对照溶液色谱图上甘草酸铵出峰相应位置未见色谱峰，表明本方法专属性良好。

2.4.6线性关系考察分别精密量取“2.4.2”项下对照品贮备液适量，置于10 ml量瓶中，用流动相定容，摇匀，得质量浓度为6.08～72.96µg/ml的系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μl，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以甘草酸铵质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为y=5 188.40x－2.67（r= 0.999 9）。结果表明，甘草酸铵检测质量浓度线性范围为6.08～72.96µg/ml。

图2　高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.甘草酸铵Fig 2　HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative control；1.ammonium glycyrrhizinate

2.4.7精密度试验取“2.4.2”项下对照品溶液适量，按“2.4.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，甘草酸铵峰面积的RSD=0.74%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.4.8稳定性试验取“2.4.3”项下供试品溶液（批号：20153161）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、12 h时按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，甘草酸铵峰面积的RSD=0.76%（n=6），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.4.9重复性试验精密称取同一批样品（批号：20153161）适量，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品含量。结果，甘草酸铵含量为3.55 mg/ml，RSD=0.78%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.4.10加样回收率试验取已知含量样品（批号：20153161）适量，共9份，每份1 ml，分别加入低、中、高质量的甘草酸铵对照品，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

2.4.11样品含量测定取3批样品各适量，分别按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，结果见表2。

3　讨论

2015年版《中国药典》中甘草流浸膏鉴别用的薄层板为1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，经试验发现，上述薄层板与本试验所用薄层板的展开效果比较，除了比移值不同外，分离效果基本相同。故最终选择了硅胶G薄层板。

由于吐根对照药材、吐根碱、吐根次碱等为毒性对照品，皆无法购得，故其只能以化学反应法进行鉴别。同时，阴性溶液不显绿色反应，而受试品显绿色，表明本方法可用于本制剂中吐根的鉴别。

表1　加样回收率试验结果（n=9）Tab 1　Results of recovery test（n=9）

2015年版《中国药典》（二部）中氯化铵原料、氯化铵片皆是以硝酸银滴定法对其含量测定，但经反复试验发现，本制剂中的甘草流浸膏中的某成分可与银离子结合，使含量测定值偏高（约为120%）。故最终不将其列入质量标准中。

表2　样品含量测定结果（n=3）Tab 2　Results of content determination of samples（n=3）

综上所述，经优化和提高的标准可有效控制复方小儿止咳口服溶液的质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［S］.2015年版.北京：中国医药科技出版社，2010：399.

［2］巩伟，赵豫，赵庆华，等.十一味参龙口服液的质量标准研究［J］.中国药房，2014，25（35）：3 323.

［3］卫生部药政局.中国医院制剂规范：西药制剂［S］.2版.北京：人民卫生出版社，1995：55.

（

（编辑：张静）

Study on the Improving the Quality Standard for Compound PediatricAnticough Oral Solution

ZHANG Minxin，HUANG Aiwen，SONG Hongtao（Dept.of Pharmacy，Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Fuzhou 350025，China）

OBJECTIVE：To optimize and improve the quality standard for Compound pediatric anticough oral solution.METHODS：TLC was adopted for the qualitative identification of Glycyrrhiza uralensis；chemical reaction was adopted for the qualitative identification of ipecac tincture，ammonium chloride；and HPLC was adopted for the content determination of ammonium glycyrrhizinate：the column was Agilent Zorbax XDB C18with mobile phase of acetonitrile-0.2 mol/L ammonium acetate（20∶80，V/V）at a flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 250 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μl.RESULTS：TLC spots of G.uralensis were clear and well-separated，negative control without interference.Differential response of ipecac tincture and ammonium chloride showed significant positive characteristics.The linear range of ammonium glycyrrhizinate was 6.08-72.96µg/ml（r=0.999 9）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 1.0%；recovery was 99.69%-100.28%（RSD=0.20%，n=6）.CONCLUSIONS：Optimizing and improving the standard are helpful for the quality control of Compound pediatric anticough oral solution.

Compound pediatric anticough oral solution；Quality standard；TLC；HPLC

R917；R927

A

1001-0408（2016）27-3855-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.37

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题（No.14ZJZ17）

＊药师。研究方向：药物分析。电话：0591-22859169。E-mail：280361089@qq.com

主任药师，教授，博士生导师，博士。研究方向：药物新剂型与制剂新技术。电话：0591-22859459。E-mail：sohoto@vip.163.com

2015-09-14

2015-11-08）