HPLC法同时测定壮药冰糖草中野黄芩苷和蒙花苷的含量Δ

马雯芳，邓慧连，唐玉荣，蔡　毅（广西中医药大学药学院，南宁　530001）

HPLC法同时测定壮药冰糖草中野黄芩苷和蒙花苷的含量Δ

马雯芳＊，邓慧连，唐玉荣，蔡毅#（广西中医药大学药学院，南宁530001）

目的：建立同时测定壮药冰糖草中野黄芩苷、蒙花苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex C18，流动相为乙腈-0.05%磷酸（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长为330 nm，柱温30℃，进样量为10 μl。结果：野黄芩苷、蒙花苷检测质量浓度线性范围分别为0.015 8～0.316 8 mg/ml（r=0.999 9）、0.000 5～0.010 4 mg/ml（r=0.999 7）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3%；加样回收率分别为99.56%～102.38%（RSD=1.07%，n=6）、95.14%～98.29%（RSD=1.24%，n=6）。结论：该方法操作简便，稳定性、重复性好，可用于冰糖草中野黄芩苷、蒙花苷含量的同时测定。

冰糖草；野黄芩苷；蒙花苷；高效液相色谱法

冰糖草，又称野甘草、土甘草，为玄参科植物野甘草Scoparia dulcis Linn.的全草，是壮族地区常用的一味壮药，其味甜，性凉，具有清热毒、除湿毒、通气通水道的功效［1］。目前，该药已有生药学［2］和质量标准初步研究［3］等相关报道，并收录于《广西壮族自治区壮药质量标准》（第二卷）［1］。本研究以野黄芩苷、蒙花苷作为指标成分，建立了用高效液相色谱法（HPLC）同时测定冰糖草中野黄芩苷和蒙花苷含量的方法，在现有的基础上进一步补充、完善其质量标准。

1　材料

1.1仪器

1100型HPLC仪，包括G-1311A高压四元泵、G-1314A单波长检测器、G-1379A在线真空脱气机、G-1311A标准自动进样器、G-1316A智能化柱温箱、1100 Series色谱工作站（美国Agilent公司）；CG-16W型高速微量离心机（北京医用离心机厂）；BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司）。

1.2试剂

野黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110842-201106，纯度：92.1%）；蒙花苷对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号：20110828，纯度：97.0%）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

1.3药材

冰糖草（见表1）采自广西各地，经广西中医药大学蔡毅教授鉴定为真品。

表1　冰糖草来源Tab 1　Results of recovery test

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Phenomenex C18（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.05%磷酸（B），梯度洗脱（0～12 min，21%A；13～20 min，21%→28%A）；流速：1.0 ml/min；检测波长：330 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液精密称取野黄芩苷、蒙花苷对照品7.92、0.26 mg，分别置于25 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，摇匀，即得野黄芩苷、蒙花苷质量浓度为0.316 8、0.010 4 mg/ml的单一对照品溶液。

2.2.2供试品溶液称取样品干燥粗粉0.30 g，精密称定，置于100 ml锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 ml，回流提取1 h，放冷，补足损失质量，滤过，滤液备用。取上述滤液1 ml，以离心半径为3 cm、10 000 r/min离心10 min，取上清液，即得。

2.3系统适用性试验

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。结果，理论板数以野黄芩苷和蒙花苷峰计分别＞3 000、5 000；分离度均＞1.5，各成分基线分离良好。色谱见图1。

图1　高效液相色谱图A.野黄芩苷对照品；B.蒙花苷对照品；C.供试品；1.野黄芩苷；2.蒙花苷Fig 1　HPLC chromatogramsA.scutellarin control；B.linarin control；C.test sample；1.scutellarin；2. linarin

2.4线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下野黄芩苷、蒙花苷单一对照品溶液0.5、1、2、4、8、10 ml，分别置于10 ml量瓶中，加流动相定容，制成系列单一对照品溶液。精密量取上述系列单一对照品溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以野黄芩苷、蒙花苷质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为y=2 605.71x－14.50（r= 0.999 9）、y=2 029.65x+0.41（r=0.999 7）。结果表明，野黄芩苷、蒙花苷检测质量浓度线性范围分别为0.015 8～0.316 8、0.000 5～0.010 4 mg/ml。

2.5精密度试验

取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，野黄芩苷、蒙花苷峰面积的RSD分别为0.37%、0.78%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验

取“2.2.2”项下供试品溶液（编号：1）适量，分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，野黄芩苷、蒙花苷峰面积的RSD分别为0.96%、2.24%（n=6），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.7重复性试验

精密称取同一批样品（编号：1）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，野黄芩苷、蒙花苷峰面积的RSD分别为2.82%、2.64%（n=6），表明本方法重复性良好。

2.8加样回收率试验

取已知含量样品（编号：1）6份，每份1 g，分别加入一定质量的野黄芩苷、蒙花苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表2。

表2　加样回收率试验结果（n=6）Tab 2　Results of recovery test（n=6）

2.9样品含量测定

取3批样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，结果见表3。

表3　样品含量测定结果（n=3）Tab 3　Results of content determination of samples（n=3）

续表3Continued tab 3

3　讨论

清热解毒类药材常具有显著的解热药理作用，现已发现野黄芩苷、蒙花苷常是解热作用的物质基础。冰糖草临床上具有显著的解热作用，在药材主要有效成分尚未明确时，可以考虑将与清热解毒作用密切相关的单体成分（野黄芩苷和蒙花苷）作为指标，采用HPLC法进行质量监控，以补充现有标准的不足。

冰糖草为一味常见的壮药，分布于广西各地，采收按传统习惯为全年可采。由本研究结果可见，广西各产地冰糖草药材中野黄芩苷和蒙花苷的含量差异较大，分别在0.924 9～5.410 8 mg/g和0.043 2～0.235 7 mg/g之间；从不同采收季节及不同产地数据来看，规律不明显。提示冰糖草最佳产地与采收季节应综合考虑临床疗效，才能得到可靠结果。

本试验采用HPLC法，选择Phenomenex C18为色谱柱、乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱为流动相、330 nm为检测波长，测定冰糖草中野黄芩苷和蒙花苷含量。结果表明，本方法操作简便，稳定性、重复性好，可用于冰糖草中野黄芩苷、蒙花苷含量的同时测定。

［1］广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准：第二卷［S］.南宁：广西科学技术出版社，2011：134.

［2］朱华，刘芯蕊，黄茂春，等.冰糖草的生药学研究［J］.广西中医学院学报，2007，10（2）：63.

［3］马雯芳，邓慧连，蔡毅，等.壮药冰糖草质量标准初步研究［J］.广西中医药，2012，35（4）：51.

（编辑：张静）

Simultaneous Determination of Scutellarin and Linarin in Zhuang Medicine Scoparia dulcis by HPLC

MA Wenfang，DENGHuilian，TANG Yurong，CAI Yi（School of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determination of scutellarin and linarin in Scoparia dulcis. METHODS：HPLC was performed on the column of Phenomenex C18with mobile phase of acetonitrile-0.05%phosphoric acid（gradient elution）at a flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 330 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μl.RESULTS：The linear range was 0.015 8-0.316 8 mg/ml for scutellarin（r=0.999 9）and 0.000 5-0.010 4 mg/ml for linarin（r=0.999 7）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3%；recoveries were 99.56%-102.38%（RSD=1.07%，n=6）and 95.14%-98.29%（RSD=1.24%，n=6），respectively.CONCLUSIONS：The method is simple with good stability and reprodicibility，and can be used for the simultaneous determination of scutellarin and linarin in S.dulcis.

Scoparia dulcis；Scutellarin；Linarin；HPLC

R927

A

1001-0408（2016）27-3845-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.33

广西“2011协同创新中心”项目（No.桂教科研〔2013〕20号）；广西壮族自治区重点实验室项目（No.桂科基字〔2014〕32号）；广西重点学科（No.桂教科研〔2013〕16号）；广西壮族自治区八桂学者项目

＊讲师，博士。研究方向：中药鉴定及质量控制。电话：0771-3137585。E-mail：alswen@163.com

教授。研究方向：生药鉴别。电话：0771-3137585。E-mail：caiyi118@163.com

（2015-07-18

2015-09-21）