半枝莲多糖对H22荷瘤小鼠组织蛋白质的影响

许晓义 武蕾蕾 李 丽 张晓莉 关利新 迟砚军 宋高臣

(牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011)



半枝莲多糖对H22荷瘤小鼠组织蛋白质的影响

许晓义 武蕾蕾 李 丽 张晓莉 关利新 迟砚军1宋高臣

(牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011)

目的 比较半枝莲多糖(SBPS)对H22荷瘤小鼠组织蛋白质双向凝胶电泳图谱的影响。方法 建立H22荷瘤小鼠动物模型，分别取H22荷瘤小鼠和SBPS组小鼠瘤组织，利用双向电泳技术分离两组瘤组织的蛋白质，获得图谱后通过ImageMaster 5.0软件分析两组蛋白表达的差异性。结果 两组差异明显的蛋白点有14个，其中SBPS组6个点高表达，8个低表达；14个点仅在荷瘤组表达，12个点在SBPS组特异表达。结论 SBPS可以通过调节H22肝癌瘤组织中部分蛋白质的表达，实现对肝癌的治疗作用。

半枝莲多糖；肝癌

半枝莲多糖(SBPS)是中药半枝莲重要的化学组分，具有提高免疫力以及一定的抗肿瘤作用，并对抗肿瘤药物起到增效减毒作用〔1,2〕。本文拟利用双向凝胶电泳技术，探讨SBPS治疗肝癌在蛋白质组水平的机制。

1 材料与方法

1.1 动物与廇株 昆明种小鼠20只，18～22 g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，小鼠转移性腹水型肝癌细胞株H22由中国医学科学院肿瘤研究所引进。

1.2 主要试剂与仪器设备 SBPS(宁波德康生物制品有限公司)，AgNO3(和光纯业工业株式会社)，IPG Buffer(GE)，Tris(Sigma)，DTT(Sigma)，固相pH梯度干胶条(GE)，Ettan DALT twelve电泳系统(GE)，IPGphor3等电聚焦仪(GE)，ImageMaster 5.0分析软件(GE)等。

1.3 方法

1.3.1 H22荷瘤小鼠模型建立 无菌条件下抽取接种第6～7天生长良好的H22肝癌小鼠的腹水(活癌细胞数>97%)，无菌生理盐水1∶3稀释，调整细胞浓度约2×107个/ml，0.2%台盼蓝染色，计活细胞数大于95%，小鼠右前肢腋部皮下接种0.2 ml/只制备实体瘤模型。设立荷瘤组与SBPS组，每组10只，SBPS组在接种6 h后每天腹腔注射SBPS 100 mg/kg，荷瘤组给等体积生理盐水，同条件饲养。

1.3.2 组织收集及样品处理 将各组小鼠处死，分别取两组瘤组织各约0.4 cm×0.4 cm，用无菌条件下生理盐水反复清洗，液氮保存。取冻存组织，称重30～90 mg，研磨匀浆后置于450 μl裂解液中混匀。37℃孵育1 h，10℃，40 000 r/min离心15 min，吸取上清液。

1.3.3 双向凝胶电泳 取两组小鼠组织样品，按PI进行第一向固相pH梯度等电聚焦分离，再根据分子量进行第二向SDS-PAGE分离，获得两组蛋白质图谱。

1.3.4 图像扫描及分析 运用ImageMaster 5.0软件对蛋白质图谱进行分析，找出差异表达蛋白质点。

2 结 果

2.1 对照组和荷瘤组组织的2-DE图谱 见图1。

图1 荷瘤组 (左)和SBPS组(右)蛋白表达图谱

2.2 对照组与荷瘤组差异蛋白点分析 见图2,表1，表2。

图2 荷瘤组与SBPS组的差异蛋白点

表1 荷瘤组与SBPS组表达量相差3倍以上的蛋白质点

“+”表示在SBPS组高表达；“-”表示在SBPS组低表达

表2 荷瘤组与SBPS组特有的蛋白质点

3 讨 论

半枝莲作为一种常用的抗肿瘤中药，已在临床上应用于治疗肝癌、胃癌、肺癌、直肠癌、鼻咽癌等，确切疗效。SBPS作为半枝莲抗肿瘤作用的主要成分已从不同角度得到证实，基于我们前期发现SBPS可明显抑制小鼠HepA瘤(抑瘤率可达34.35%)〔3〕；其抗肝癌的作用机制体现在可控某些癌基因、抑癌基因和蛋白的表达〔4～6〕；对化疗药物有增效减毒作用〔7～9〕；对肝癌小鼠的免疫功能有调节作用〔10〕等，本研究通过双向凝胶电泳技术分析差异蛋白表达图谱，发现3倍以上变化的点有14个，在SBPS组中6个蛋白点表达上调，8个下调；12个蛋白点在SBPS组特异表达，14个表达缺失，说明SBPS的抗肝癌作用可能与这些异常表达的蛋白有关，这些蛋白为我们进一步研究其抗癌作用靶点提供了重要信息和技术支持。

1 张 怡，张甘霖，王笑民.中药多糖抗肿瘤机制研究概况及思考〔J〕.中华中医药学刊，2015；(10)：2321-3.

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3 宋高臣，于英君，王喜军.半枝莲多糖的抗肿瘤作用及其调节免疫的实验研究〔J〕.世界科学技术：中医药现代化，2011；13(4)：641-3.

4 宋高臣，张高坤，公长春，等.半枝莲多糖对HepA荷瘤小鼠抑癌基因表达的影响〔J〕.中国医药导刊，2010；12(6)：1020-1.

5 宋高臣，于水澜，曾 奇，等.SBPS对荷瘤小鼠癌基因表达的影响〔J〕.中国医药导刊，2010；12(5)：833-4.

6 于水澜，于英君，许晓义，等.半枝莲多糖对肝癌小鼠差异表达蛋白质影响的实验研究〔J〕.中医药信息，2014；17(2)：15-8.

7 宋高臣，王桂云，刘洪凤，等.半枝莲多糖对环磷酰胺增效减毒作用的实验研究〔J〕.中医药信息，2010；27(4)：107-9.

8 宋高臣，徐 薇，张 杰，等.半枝莲多糖协同环磷酰胺治疗肝癌的作用机制研究〔J〕.中医药学报，2010；38(4)：48-50.

9 于英君，贠可力，周 群，等.半枝莲多糖辅助环磷酰胺对H22小鼠血清IL-2、IL-12含量的影响〔J〕.中医药信息，2009；26(6)：24-6.

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〔2016-06-13修回〕

(编辑 郭 菁)

牡丹江市科学技术计划项目(Z2014s031)；黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划项目(1251G066)

1 牡丹江市第一人民医院

宋高臣(1971-)，男，教授，博士，主要从事中药抗肿瘤分子生物学机制研究。

许晓义(1981-)，男，讲师，硕士，主要从事中药抗肿瘤分子生物学机制研究。

R735

A

1005-9202(2016)19-4709-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.19.016