八月札抗肿瘤作用的初步研究

张　瑜，郑作文（广西中医药大学，广西 南宁　530001）

八月札抗肿瘤作用的初步研究

张瑜，郑作文
（广西中医药大学，广西 南宁530001）

［目的］研究八月札醇提物在小鼠H22肝癌细胞体内的抗肿瘤作用。［方法］取80只昆明种小鼠，建立H22小鼠肝癌细胞移植瘤模型。随机分为5组：模型组，5－氟尿嘧啶组，八月札高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组16只。八月札各组分别灌服高、中、低剂量的八月札醇提物（10 g/kg、5 g/kg、2．5 g/kg），5－氟尿嘧啶组予五氟尿嘧啶（0．2 g/kg）灌服给药，模型组给予蒸馏水灌服。给药后10 d取出肿瘤，以肿瘤重量为指标，研究八月札醇提物对小鼠肝癌细胞移植瘤的抑制作用。［结果］八月札醇提物高剂量组（10 g/kg）及5－氟尿嘧啶组对H22细胞移植瘤重量有明显减轻作用，与模型组比较有显著性差异（P＜0．01），且抑瘤率＞30%；中、低剂量组（5 g/kg、2．5 g/kg）小鼠H22细胞移植瘤的重量小于模型组，但与模型组比较无显著性差异。［结论］八月札醇提物对H22细胞小鼠移植瘤有抑瘤作用。

八月札；H22肝癌细胞；抗肿瘤；实验研究

近年来随着环境的污染和恶化，肝癌发病率逐年升高。广西是肝癌的高发区，据报道21世纪初广西肝癌的死亡率达到34．39/10万［1］。目前，肝癌的治疗方式主要有手术切除、化疗、放疗、生物治疗等。手术切除虽然为主要治疗方法，但是存在复发的可能性；化学药物治疗毒副作用大，给患者身心造成巨大伤害；放射性治疗在杀死肝癌细胞的同时会相应对周围组织造成伤害；因此，无论是药物还是手术都不可避免对肝脏和身体造成损害［2－3］。中草药疗法具有中医特色，在防治肝癌方面具有良好的发展前景。八月札为木通科植物木通Akebia quinata（Thunb．）Decne、三叶木通A．trifoliata（Thunb．）Koidz．var．australis（Dies）．Rehd．的成熟果实，具有疏肝和胃、活血止痛、软坚散结、利小便的功效。八月札在广西有着丰富的资源，广西民间常用于治疗肝癌。本实验通过建立H22小鼠肝癌细胞移植瘤模型，探讨八月札醇提物抗肿瘤的作用，现报道如下。

1　实验材料

1．1实验动物取昆明种小鼠80只，雌雄各半，体重20±2 g，由广西中医药大学实验动物中心提供，合格证号：桂医动字第11004号。

1．2实验药材和试剂八月札为市售品，经广西中医药大学药用植物教研室韦松基教授鉴定为木通科植物木通Akebia quinata（Thunb．）Decne、三叶木通A．trifoliata（Thunb．）Koidz． var．australis（Dies）．Rehd．的成熟果实；5－氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司，国药准字H31020593）；H22细胞株（南京凯基生物科技发展有限公司）。

1．3受试药物的提取取八月札药材烘干粉碎，加8倍量80%酒精，浸泡过夜后进行回流提取，保持微沸2 h，倒出回流液，再加入6倍量酒精回流1．5 h，倒出提取液，再如上述方法提取，合并3次回流液后使用旋转蒸发仪回收酒精，置蒸发皿上水浴浓缩成浸膏，得膏率为31．79%，每1 g浸膏相当于4．146 g生药。

1．4实验仪器DMIRB型Leica光学倒置显微镜（德国Leica公司）；ZDX－3SBI座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；DLE560型超净工作台（荷兰Clean Air公司）；微量加样器（法国Gilson产品）。

2　实验方法与结果

2．1动物模型的建立取H22细胞株，通过无菌离心（1 000 rpm/min）收集H22细胞，用无菌生理盐水悬浮，调整细胞浓度为8．0×106个/m l，经台盼蓝拒染法检测存活率≥95%，备用。取适应3 d的雄性昆明小鼠15只，用75%酒精消毒腹部皮肤后，以0．2ml/只腹腔接种H22细胞悬液。接种3～4 d可看到小鼠腹部明显隆起，显示已形成腹水，8～10 d后无菌抽取腹水，于超净工作台内用无菌生理盐水稀释，调整细胞浓度为1．0× 107个/m l，备用。

2．2分组与给药取昆明种小鼠80只，雌雄各半，体重20± 2 g，随机分为5组：模型组，5－氟尿嘧啶组（0．2 g/kg），八月札高剂量组（10 g/kg）、中剂量组（5 g/kg）、低剂量组（2．5 g/kg），每组16只。模型组给予蒸馏水灌胃，其余各组给予相应的药物灌胃，给药容积为0．2ml/10 g，每天1次，连续给药5 d后准备腋下接种。

2．3肿瘤接种抽取接种10 d左右种鼠腹水，呈乳白色，细胞计数，调整细胞浓度至1．0×107个/ml，台盼蓝拒染法检测存活率≥95%。将细胞悬液充分混匀后注射至给药5 d后小鼠的右腋皮下，每只0．2m l，共接种80只，全程严格无菌操作。接种后继续按照上述给药方式给药，在第10 d后观察肿瘤大小。

2．4对H22细胞小鼠移植瘤的抑瘤作用末次给药12 h后，将小鼠颈椎脱臼处死，迅速解剖取出瘤块，剔除脂肪组织，称取瘤体重量，按以下公式计算抑瘤率。瘤重抑制率＝（模型组平均瘤重量－给药组平均瘤重量）/模型组平均瘤重量× 100%。八月札醇提物对H22细胞小鼠移植瘤的抑瘤作用结果见表1。

表1　八月札醇提物对H22细胞小鼠移植瘤的抑瘤作用结果

实验结果表明，灌胃给药10 d后，与模型组比较，阳性药5－氟尿嘧啶组和八月札高剂量组均能明显减轻小鼠瘤重（P＜0．01），抑制率分别为60．6%和33．4%；八月札中、低剂量组有减轻小鼠瘤重趋势，但无统计学差异，抑制率分别为19．9%和20．3%。

3　讨　论

肝癌严重威胁人类健康，是死亡速度最快的恶性肿瘤之一，肝癌细胞快速恶性增殖导致肝功能衰竭甚至死亡，累及周围组织及器官，给患者带来极大身体负担和精神负担。

动物实体瘤实验方法为抗肿瘤实验研究的重要方法之一，其成瘤的可能性可以达到100%，可行性远大于诱发性成瘤。小鼠腹水型肝癌瘤株可在小鼠身上移植生长，且成瘤率高［4］。本实验建立H22小鼠肝癌细胞移植瘤模型，通过接种H22小鼠肝癌细胞形成腹水，腹水形成后将其接种到小鼠腋下使其成瘤。八月札系广西传统抗肿瘤中药材，原料来源丰富充足，造模成功给予以八月札醇提物，发现八月札醇提物对H22细胞移植瘤重量有明显减轻作用。阳性药5－氟尿嘧啶广泛用于肝癌的治疗［5］，虽然也可抑制肿瘤组织的生长，但在一定程度上会导致小鼠出现精神萎靡、免疫力下降等不良影响。八月札组小鼠体重及生理指标变化并无明显差异，提示中医药在提高患者生存率的同时减轻了化疗的毒副作用，体现出中医药的优势。

［1］张春燕，黄天壬，余家华，等．广西肝癌高危人群队列和高发家系样本数据库的建立［J］．广东医学，2012，32（23）：3121－3123．

［2］王悦华．肝癌多学科综合治疗的分级与集合治疗模式的建立［J］．中华肝胆外科杂志，2010，16（4）：270－274．

［3］郭武华，张吉翔．肝癌综合治疗的现状［J］．世界华人消化杂志，2008，16（20）：2199－2203．

［4］饶子亮，郑佳琳，黄威，等．H22实体瘤小鼠的免疫功能指标及环磷酰胺的影响［J］．中国药理学与毒理学杂志，2013，30（3）：083．

［5］姜军梅，刘吉勇，朱菊人，等．5－氟尿嘧啶诱导人肝癌细胞凋亡的机理研究（英文）［J］．中华医学杂志：英文版，2002，155（7）：8－11．

（编辑陈明伟）

R285．5

A

2095-4441（2016）03－0009－02

2016－06－15

广西高校重点实验室课题

张瑜（1990－），女，黑龙江人，硕士研究生，研究方向：中草药抗肿瘤机制的研究

郑作文，教授，硕士研究生导师，从事中草药抗肿瘤工作，E－mail：zzw_nn＠163．com