人血管生成素样蛋白4在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

王 康, 白 静

(1.包头医学院,内蒙古包头 014060； 2.包头市肿瘤医院放疗科)



人血管生成素样蛋白4在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义

王 康1, 白 静2

(1.包头医学院,内蒙古包头 014060； 2.包头市肿瘤医院放疗科)

目的:探讨人血管生成素样蛋白(angiopoietin-like 4，ANGPTL4)在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义。方法:利用免疫组化检测ANGPTL4在50例宫颈鳞癌和10例正常宫颈鳞状上皮组织中的表达，分析ANGPTL4在宫颈鳞癌中的表达状况及与宫颈鳞癌临床病理参数的关系。结果:ANGPTL4在50例宫颈鳞癌中仅2例阴性，阳性率96.0 %(48/50)，而在宫颈正常组织中均无表达，两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)；然而ANGPTL4的过表达与患者的年龄、肿瘤分化程度以及临床分期均无相关性(P>0.05)。结论:ANGPTL4在宫颈鳞癌中高表达，提示其可能参与了肿瘤的发生和发展，但其相关性还有待进一步研究证实。

人血管生成素样蛋白4；宫颈鳞癌；免疫组化

人血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like 4，ANGPTL4)是一种新的糖基化脂肪细胞因子，属ANGPTL家族的一员，以往的研究一直认为ANGPTL家族的所有成员主要功能是参与调控物质能量代谢和血管生成[1]，但随后的研究发现ANGPTL4在很多人体肿瘤(如食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤以及软组织肉瘤等)都存在过表达现象，新近的研究也证实ANGPTL4参与了肿瘤细胞生长、肿瘤血管生成以及肿瘤的侵袭和转移，在多方面调控着人体肿瘤的发生和发展过程[2]，本文拟通过检测正常宫颈组织和宫颈鳞癌组织中ANGPTL4的过表达量，观察ANGPTL4在宫颈鳞癌组织中的表达情况，探讨在宫颈鳞癌的发生、发展及侵袭转移过程中ANGPTL4的作用及临床意义。

1 对象与方法

1.1 对象 收集包头市肿瘤医院2008年1月至2010年1月手术切除及活检标本60例，其中正常宫颈组织10例；宫颈鳞癌50例，中、高分化32例，低分化18例；按2000年F1G0临床分期，Ⅱ期32例，Ⅲ期18例。所有患者术前及活检前均未接受化疗或放疗。年龄28～77岁，平均年龄59.0岁。所有标本均经病理证实，并附有完整的临床病理资料。

1.2 试剂与方法 应用免疫组化SP方法检测ANGPTL。ANGPTL4抗体及SP试剂盒均购自上海生工生物工程股份有限公司。具体操作步骤严格按照说明进行。用预实验阳性片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照，用一张组织蜡块连续切片做常规苏木精-伊红染色，用于肿瘤组织免疫组化阳性部位的对照判定和分析。

1.3 结果判读 ANGPTL4阳性着色定位于细胞浆和或胞核，呈棕黄色。免疫组化结果判定标准：在光学显微镜下每张切片随机选取5个高倍视野记数细胞(宫颈鳞癌组织为癌细胞；正常宫颈组织为鳞状上皮细胞)。首先针对染色强度打分:无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别为0、1、2、3分。再对阳性细胞所占百分比打分:无阳性细胞为0分；≤10 %记1分；11 %～50 %记2分；51 %～75 %记3分；>75 %记4分。将染色强度与阳性细胞百分比相乘所得数值:>3分视为阳性；≤3分视为阴性。对免疫组化结果阳性的再进行阳性强度分级:4～5分(+)；6～7分(++)；8～12分(+++)。结果采用双盲法阅片判定，两人阅片，阅片医师不了解病史、临床资料及抗体类型。

1.4 统计学处理 实验结果采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，以P<0.05为差异有统计学意义。两组间率的比较采用χ2检验及Fisher确切概率法。

2 结果

2.1 ANGPTL4表达情况 ANGPTL4在正常宫颈鳞状上皮组织中均无表达，在宫颈鳞癌组织中明显过表达，阳性率为96.0 %(48/50)，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 ANGPTL4在正常宫颈组织与宫颈鳞癌中表达情况分析

2.2 ANGPTL4表达与宫颈鳞癌临床特征的关系 宫颈鳞癌ANGPTL4的过表达与患者的年龄、肿瘤分化程度以及临床分期均无明显相关性(P>0.05)。见表2。

表2 ANGPTL4表达与宫颈鳞癌临床特征的关系

3 讨论

宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性上皮性肿瘤，近年来我国宫颈癌处于逐年上升的趋势，研究认为宫颈癌的发生和发展与多种癌基因和抑癌基因的表达、调控及细胞凋亡及一些侵袭和转录因子密切相关，其机制目前仍不明确。绝大多数观点认为宫颈癌是可以预防和治愈的，因此寻找并发现宫颈癌发生和发展过程中的敏感及相对特异的指标，阻断其发病，遏制其侵袭和转移，最终减少宫颈癌的发生，帮助临床早期诊断、早期治疗和判断转归，都具有非常重要的意义。

ANGPTL4是一种新的糖基化脂肪细胞因子，属ANGPTL家族的一员。该家族的所有成员主要功能是参与调控物质能量代谢和血管生成，但已证实ANGPTL4还具有调控肿瘤发生发展的重要作用。全长ANGPTL4以二聚体或四聚体形式存在，其N端和COOH端结构域被连接物连接，全长ANGPTL4经前蛋白体转换酶作用释放N端coiled-coil片段(nANGPTL4，相对分子质量26 kD)和COOH端纤维蛋白原样片段(cANGPTL4，相对分子质量47 kD)[3]。ANGPTL4及cANGPTL4有促进血管损伤和加速肿瘤侵袭及转移的作用。ANGPTL4在食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、恶性黑色素瘤以及软组织肉瘤等多种人体恶性肿瘤中都存在多过表达现象，研究证实ANGPTL4与肿瘤细胞生长、肿瘤血管生成以及肿瘤的侵袭和转移密切相关，在多方面多层次调控着人体肿瘤的发生和发展。

本研究发现ANGPTL4在宫颈鳞癌组织中高表达96.0 %(48/50)，显著高于正常宫颈鳞状上皮，提示ANGPTL4可能在调控宫颈鳞癌发生发展过程中起着重要作用。但是进一步分析发现，宫颈鳞癌ANGPTL4的过表达与患者年龄，尤其是病理组织学分级以及临床分期无相关性，这与我们预实验以及得出最终结论前的假设有一定差距，我们推测ANGPTL4与宫颈鳞癌组织学分级和临床分期应强相关，且随着组织分级和临床分期的增高会出现同步高表达趋势，有望作为宫颈鳞癌早发现、早诊断、早预防以及判断其预后的新生物指标。但仅凭这些数据还很难得出ANGPTL4与宫颈鳞癌相关性低，且在宫颈鳞癌发生发展中仅起微弱作用甚至不参与该过程的结论。因为这与实验对象选择的局限性、病理分级和临床分期的标准把握及实验条件的限制等多种因素有关，必须通过更精准和合理的实验设计来进一步证实。

此外，有研究还发现，与对照组相比放化疗抗拒的瘤细胞高表达STAT1[4]。而Kim等[5]发现，肿瘤细胞中ANGPTL4和cANGPTL4可以上调STAT1的表达，是STAT1的上游序列。ANGPTL4经该通路可以促进人体肿瘤的增殖、侵袭和转移，同时还促进肿瘤细胞产生乏氧放化疗抗拒，因此，可通过抑制瘤细胞ANGPTL4和cANGPTL4的表达进而下调STAT1，达到提高肿瘤细胞放化疗敏感性的目的。由此，我们进一步推测ANGPTL4也有可能成为解决宫颈鳞癌放化疗抗拒的一个新的重要线索和启示。

[1] Hato T,Tabata M,Oike Y.The role of angiopoietin-like proteins in angiogenesis and metabolism[J].Trends Cardiovasc Med,2008,18(1):6-14.

[2] 王康,白静.ANGPTL4在人肿瘤中的表达及其临床价值的研究进展[J].医学综述,2015,21(15):2738-2741.

[3] Ge H,Yang G,Huang L,et al.Oligomerization and regulated proteolytic processing of angiopoietin-like protein 4[J].J Biol Chem,2004,279(3):2038-2045.

[4] Khodarev NN,Beckett M,Labay E,et al.STAT1 is overexpressed in tumors selected for radioresistance and confers protection from radiation in transduced sensitive cells[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2004,101(6):1714-1719.

[5] Kim SH,Park YY,Kim SW,et al.ANGPTL4 induction by prostaglandin E2 under hypoxic conditions promotes colorectal cancer progression[J].Cancer Res,2011, 71(22):7010-7020.

Expression of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer and its clinical significance

WANG Kang1, BAI Jing2

(1.BaotouMedicalCollege,InnerMongoliaUniversityofScienceandTechnology,Baotou014040,China;2.DepartmentofRadiotherapy,BaotouTumorHospital,Baotou014030,China)

Objective:To explore the expression of angiopoietinlike 4(ANGPTL4)in the tissues of cervical squamous cancer and its clinical significance. Methods：Immunohistochemistry was adopted to test the expression of ANGPTL4 in 50 cases of cervical squamous cancer tissues and 10 cases of healthy cervical squamous epithelium in order to analyze the expression of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer as well as its correlations with the clinical parameters of cervical squamous cancer. Results：The positive rates of ANGPTL4 in the tissues of cervical squamous cancer and healthy squamous epithelium were 96% (48/50) and 0% (0/10) respectively, and there was statistical significance between the two groups (P<0.01); The overexpression of ANGPTL4 showed no correlation with the patients' age, histological differentiation degree and clinical stages of cervical squamous cancer (P>0.05). Conclusion：The overexpression of ANGPTL4 in cervical squamous cancer indicates that it may be involved in the genesis and development of tumor, but its correlation with cervical squamous cancer needs further investigation.

ANGPTL4; Cervical squamous cancer; Immunohistochemistry

2015-11-17)