S100A9和EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

张 朦， 王冉冉， 田建虎， 巴彩霞

(1.包头医学院2013级研究生，内蒙古包头 014060；2.包头市肿瘤医院)



S100A9和EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

张 朦1， 王冉冉2， 田建虎1， 巴彩霞2

(1.包头医学院2013级研究生，内蒙古包头 014060；2.包头市肿瘤医院)

目的：探讨钙结合蛋白S100A9(calcium binding protein A9，S100A9)和EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化法检测70例宫颈癌组织及70例正常宫颈组织中S100A9和EZRIN蛋白的表达并分析其相关性。结果：S100A9和EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达均高于正常宫颈组织(P<0.05)，S100A9与EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达与年龄无关(P>0.05)，与浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)；S100A9蛋白在宫颈癌组织中的表达与分化程度无关(P>0.05)，EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达与分化程度有关(P<0.05)；S100A9与EZRIN蛋白的表达成正相关(rs=0.136，P<0.05)。结论：S100A9和EZRIN蛋白与宫颈癌的侵袭性有关，可能成为临床判断宫颈癌预后的标志物。

宫颈癌；S100A9蛋白；EZRIN蛋白；免疫组化

宫颈癌的发病率居于女性恶性肿瘤第二位，死亡率居首位。近年来，宫颈癌的发病率有明显上升及年轻化的趋势，分型构成也有明显变化，故宫颈癌的相关研究就更有临床意义。钙结合蛋白S100A9(calcium binding protein A9，S100A9)是钙结合蛋白S100蛋白家族中最重要的成员之一，近年来研究发现其对肿瘤生长、增殖及侵袭有着重要作用。EZRIN蛋白是早期肿瘤转移的重要“十字路口”，是肿瘤转移的核心蛋白，EZRIN过表达与多种来源的肿瘤转移高度相关[1]。本研究通过免疫组化法检测S100A9和EZRIN在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达，探讨其与宫颈癌浸润深度、分化及转移的相关性，为预后及临床治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 宫颈组织标本 选取包头市肿瘤医院病理科2014年1月至2015年8月门诊活检及住院手术病例的蜡块标本，共140例，其中病理确诊为宫颈癌的有70例，术前均未进行放疗、化疗，作为宫颈癌组，因子宫肌瘤或其他原因行全子宫切除术且术后病理证实无宫颈病变的正常宫颈组织标本70例，作为对照组。

1.1.2 试剂 S100A9兔抗人单克隆抗体、EZRIN兔抗人单克隆抗体、免疫组化试剂盒、二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色试剂盒均购于北京博奥森生物技术有限公司。

1.2 方法 采用免疫组织化学染色方法(Envision法)，对正常宫颈组织及宫颈癌组织行S100A9、EZRIN蛋白水平表达测定，按试剂盒说明书进行操作。二抗为Envision套盒，用DAB显色、苏木素复染。每次实验均以阳性对照切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。癌细胞分化程度：Ⅰ级为高分化鳞癌，即角化性大细胞型；Ⅱ级为中分化鳞癌，即非角化性大细胞型：Ⅲ级为低分化鳞癌，即小细胞型。浸润深度、分化程度以及有无淋巴结转移依据病理诊断判定。

1.3 结果判定方法 用光学显微镜观察全片，S100A9及EZRIN的阳性染色为细胞膜和细胞浆内有棕黄色颗粒，核膜未见着色。按染色着色深度打分：无色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。按阳性细胞率打分：阴性为0分，阳性细胞率<10 %为1分、11 %～50 %为2分、>51 %为3分。染色强度与阳性细胞率的乘积：0～2分为(-)、3～4分为(+)、5～9分为(++)。

1.4 统计学处理 所有数据均使用SPSS 17.0统计软件包进行统计学处理，对数据进行χ2检验、Spearman等级相关性检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 S100A9在宫颈癌组织及正常宫颈组织表达情况 S100A9蛋白在宫颈癌组织阳性表达率为91.3 %，高于正常宫颈组织中的45.6 %(χ2=31.79，P<0.01)见表1。(EZRIN在宫颈癌组织及正常宫颈组织表达情况 EZRIN蛋白在宫颈癌组织阳性表达率为72.8 %，高于正常宫颈组织中的25.6 %(χ2=29.31，P<0.01)。见表1)。

表1 S100A9和EZRIN蛋白在正常宫颈上皮及宫颈癌组织中的表达

S100A9蛋白在宫颈癌中的阳性表达见图1，S100A9蛋白在正常宫颈上皮的阴性表达见图2；EZRIN蛋白在宫颈癌中的阳性表达见图3， EZRIN蛋白在正常宫颈上皮的阴性表达见图4。

2.3 S100A9与EZRIN表达的相关性 经统计此70例，S100A9与EZRIN蛋白共同阳性表达有47例，共同阴性表达的有6例，S100A9蛋白阳性且EZRIN蛋白阴性表达有13例，S100A9蛋白阴性表达且EZRIN蛋白阳性表达的有4例，S100A9和EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的表达呈正相关(χ2=3.81，rs=0.136，P<0.05)。见表2。

表2 S100A9蛋白和EZRIN的表达关系

2.4 宫颈癌组织S100A9和EZRIN蛋白的表达与临床病理特征的关系 S100A9蛋白在宫颈癌中的表达与年龄及分化程度无关(P>0.05)，与浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)。EZRIN蛋白在宫颈癌中的表达与年龄无关(P>0.05)，与浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。见表3。

表3 S100A9和EZRIN蛋白在宫颈癌的表达与临床病理特征的关系

注：N0为无淋巴结转移，N1为有淋巴结转移

3 讨论

S100A9最初被发现是作为中性粒细胞表达和分泌的免疫蛋白，后来的研究表明S100A9是急性和慢性炎症中重要的炎症介质，是中性粒细胞化学趋化性和黏附性的强有力的诱导剂[2]。S100A9不仅促进免疫反应和炎症修复，也可以作为癌症的一种危险信号，有研究发现胞外S100A8/S100A9表现出对多种细胞(包括肿瘤细胞)有抑制生长和诱导凋亡的作用。S100A9可分布在正常人的上皮细胞，比如口腔黏膜、食管、子宫颈等组织，但在某些病理条件下也可表达，如鼻息肉、银屑病、肺癌等。据研究S100A9在肿瘤中发挥着重要生物学作用，与多种肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关。研究发现S100A9在肿瘤中发挥不同的生物学作用，大致表现为两种情况：一种为S100A9呈现上调表达，与多种肿瘤的发生发展、侵袭和转移密切相关，表现为促癌作用，如在肺腺癌、肺鳞癌、胃癌、乳腺癌(浸润性导管癌)、结直肠癌、膀胱移行细胞癌等肿瘤组织中高表达[3-5]；另一种为S100A9在食管鳞状细胞癌、喉头癌中表达明显下调，表现为促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤的生长，但也有研究有着相反的结果。本实验中S100A9高表达于宫颈癌中，且与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移有关，提示S100A9与宫颈癌有着密不可分的联系，其参与宫颈癌的发生发展，也可为判断预后提供线索。

EZRIN蛋白是埃兹蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ezfin-radixin-moesin，ERM)蛋白家族成员之一，EZRIN蛋白与膜表面受体分子、黏附分子等相互作用，在细胞分化、黏附、信号转导等方面发挥重要作用。研究显示，因其是一种胞膜细胞骨架蛋白，在机体细胞生长、肿瘤细胞的黏附、迁移、浸润等过程中有着重要作用。最新研究发现，EZRIN和FAS、FAS配体组成共同体促进细胞凋亡，当EZRIN不能与之正常结合时，细胞凋亡过程受阻，实现肿瘤细胞的无休止增殖。EZRIN与多条信号转导途径有关，可在多种肿瘤中过表达并促进肿瘤细胞的转移。因此，EZRIN可能成为多种恶性肿瘤转移和预后的分子标志[6]。本研究结果显示EZRIN在宫颈癌组织中高表达，且其表达与S100A9相似，表现为浸润越深，分化越低，有淋巴结转移EZRIN表达的阳性率越高。

S100A9及EZRIN在宫颈病变中表达呈正相关性，反映出S100A9有可能参与宫颈癌乃至其他恶性肿瘤早期的转移。S100A9及EZRIN蛋白在宫颈癌组织中的高表达以及与浸润深度、淋巴结转移有关，提示宫颈癌的恶性程度及浸润转移的潜能，为判断预后提供依据。随着今后有关研究的深入会为进一步阐明肿瘤发生、发展及转移和肿瘤的药物治疗及分子靶向治疗寻找肿瘤标志物等提供新的思路。

[1] Patra SK.Dissecting lipid raft facilitated cell signaling pathways in cancer[J].Biochim Biophys Acta,2008,1785(2):182-206.

[2] Schnekenburger J,Schick V, Kruger B,et al.The calcium binding protein S100A9 is essential for pancreatic leukocyte infiltration and induces disruption of cell-cell contacts[J].Cell Physiol,2008,216(2):558-567.

[3] Sharma S,Dubinett S,Salgia R.CD14(+)S100A9(+) myeloid-derived suppressor cells portend decreased survival in patients with advanced lung cancer[J]. Am J Respir Crit Care Med,2012,186(10):940-941.

[4] Wang L,Chang EW,Wong SC,et al.lncreased myeloidderived suppressor cells in gastric cancer correlate with cancer stage and plasma S100A8/A9 proinflammatory proteins[J].J Immunol,2013,190(2):794-804.

[5] Duan L,Wu R,Ye L,et al.S100A8 and S100A9 are associated with colorectal carcinoma progression and contribute to colorectal carcinoma cell survival and migration via Wnt/B-catenin pathway[J].PLoS One,2013,8(4):e62092.

[6] Leiphrakpam PD,Rajput A,Mathiesen M,et al.Ezrin expression and cell survival regulation in colorectal cancer[J].Cell Signal,2014,5:868-879.

Expressions of S100A9 and EZRIN protein in cervical carcinoma and their clinical significances

ZHANG Meng1，WANG Ranran2, TIAN Jianhu1, BA Caixia2

(1.BaotouMedicalCollege,Baotou014040,China;2.BaotouTumorHospital,Baotou014060,China)

Objective:To investigate the expressions of calcium binding protein A9 (S100A9) and EZRIN protein in cervical carcinoma and their clinical significances.Methods：Immunohistochemistry was adopted to test the expressions of S100A9 and EZRIN protein in 70 cases of cervical carcinoma and 70 cases of normal cervical epithelium and their correlation was analyzed. Results：The expressions of S100A9 and EZRIN protein in cervical carcinoma tissues were higher than those in the normal cervical epithelium (P<0.05). Their expressions had no relationship with age (P>0.05)，but were closely associated with the depth of cancer invasion and lymphatic metastasis (P<0.05). The expression of S100A9 protein had no relationship with degrees of differentiation (P>0.05), but EZRIN protein expression was closely correlated with the degrees (P<0.05). The expressions of S100A9 and EZRIN protein were positively correlated (rs=0.136，P<0.05). Conclusion：The expressions of S100A9 and EZRIN protein may be closely related to the invasion of cervical carcinoma and can be used as clinical prognostic indicator.

Cervical carcinoma; S100A9; EZRIN; Immunohistochemistry

巴彩霞

2016-01-04)