酱油中黄曲霉毒素B1含量的检测

酱油中黄曲霉毒素B1含量的检测

研究酱油中黄曲霉毒素B1含量的检测，该方法采用免疫亲和柱净化提取，利用荧光检测器（带柱后光化学衍生系统）检测，检测方法简单快捷、线性好，回收率高。

酱油；黄曲霉毒素B1；免疫亲和柱；荧光检测器；光化学衍生

试剂和溶液 除非另有规定，所用水为蒸馏水或去离子水；乙腈（色谱纯）；乙腈-水溶液（8+2）：取80ml乙腈加20ml水；氯化钠（分析纯）吐温-20（分析纯）；黄曲霉毒素B1标准溶液（3ug/ml）,保存于4℃备用；黄曲霉毒素B1系列标准工作液：准确移取适量的黄曲霉毒素B1标准溶液，用甲醇稀释成系列的标准工作液。

仪器和设备 高速均质机（最高转速≥10,000r/ min）或摇床；黄曲霉毒素B1免疫亲和柱；玻璃纤维滤纸；空气压力泵；0.22um微孔滤膜；高效液相色谱仪：具有365nm激发波长和460nm发射波长的荧光检测器；UVE光化学柱后衍生器；色谱柱：C18柱（柱长250mm,内径4.6mm，填料直径5um）。1 提取：称取5g±0.01g样品加入1g氯化钠与25ml提取液（80%乙腈-水溶液）涡旋5min混匀；然后高速均质（≥10,000r/min）1min,或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min后再3500r/ min离心10min；取10ml上清液加入40ml蒸馏水稀释，在用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液。取25ml上样液过免疫亲和柱净化。2 净化：将免疫亲和柱连接于20ml或50ml注射器下,并于气控操作架相连接，将上述的提取液注入注射器中，调节气泵开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出，待液体排干后，用10ml去离子水洗涤2次，流速2～3滴/秒；对于颜色附着比较深的样品，先用1%吐温-20水溶液洗涤10ml,再用去离子水洗涤10ml, 流速2～3滴/秒；待离子水排完后，用气泵将残留的水抽干；再用2ml甲醇进行洗脱，前1ml甲醇加入免疫亲和柱后，盖上小盖保持5分钟，然后以流速1滴/秒洗脱，待流完后再加入后1ml甲醇以流速1滴/秒洗脱，最后用气泵抽干，合并2次洗脱液；洗脱液用0.22um微孔滤膜过滤后上机待测。

测定 1 高效液相色谱条件：流动相：水/甲醇/乙腈（55/30/15,v/v）、流速：1.2ml/min、进样量：10～100ul、柱温：36℃、色谱柱：C18柱（柱长250mm,内径4.6mm，填料直径5um）、荧光检测器：具有365nm激发波长和460nm发射波长（使用柱后光化学衍生系统）。2 定量：用进样器吸取样品洗脱液和黄曲霉毒素B1系列标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液和样品洗脱液的响应值（峰高或峰面积），绘制标准曲线，用外标法定量。3 空白试验 ：除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。4 结果计算： 样中黄曲霉毒素B1的含量（X）以微克每千克表示，按下式计算：

式中：X—试样中黄曲霉毒素B1的含量，单位微克每千克（ug/kg）；C1—由标准曲线查得的样液中黄曲霉毒素B1的含量，ng；C0—由标准曲线查得试剂空白中黄曲霉毒素B1的含量，ng；V—样液最终定容体积，mL；V1—样液的进样体积，uL；f—稀释倍数；m—样品质量g

4.线性：B1含量在0.003ng～0.048ng范围内，标准曲线线性在0.9998以上。

线性数据表

5.回收率：回收率在105～116之间

酱油及加标测定数据（本底都为未检出）

该方法线性好、回收率高，而且检测过程简便快捷，比起GB/T 5009.23，该方法省时省力检测的准确度更高，适用于检测酱油中黄曲霉毒素B1的含量。

《食品中黄曲霉素B1、B2、G1、G2的测定》GB/T 5009.23-2006

□安徽省淮南市食品药品检验中心 秦加松