实时荧光定量PCR在手足口病原体检测中的应用探讨

钱福文

【摘 要】 目的：对手足口病患儿施行病原体检测时运用荧光定量PCR实时测定法（FQ-PCR法）的效果及有关情况探析。方法：以2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例为评估对象，依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例，运用FQ-PCR法对疑似患儿的疱疹液、咽拭子实施相应指标值的测定；并以ELISA 法对患儿血清展开检测，经比对两法的检出率数据情况，系统评估FQ-PCR医疗检测效果。结果：127例患儿咽拭子样本、疱疹液样本在FQ-PCR法测定下，EV检测有101例显阳性，占79.53%；当中A组有67例，占87.01%，B组有34例，占68.00%。A组患儿阳性检出率超出B组，差异明显（P<0.05）。咽拭子样本检出阳性率是69.60%，疱疹液样本检出阳性率是81.97%。FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法，差异显著（P<0.05），检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近，没有较大差异（P>0.05）。结论：FQ-PCR 法践行于HFMD病原体测定及评估中，能强化病原学指标监控力度，以辅助当地HFMD疫情预测、防范工作的有效进行。

【关键词】 荧光定量PCR 手足口病 实时检测 病原体

临床中将手足口病的英文名称简写成“HFMD” [1]。此病发作主因是肠道内受到EV病毒侵入，以诱发急性的传播疾病，HFMD患病群体以不超6岁的幼儿居多[2]。为探索测定病原体的最优方法，本文抽选2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例，依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例，运用FQ-PCR法、ELISA法对上述患儿的疱疹液、咽拭子实施相应指标值的测定，经比对两法的检出率数据情况，系统评估FQ-PCR医疗检测效果，现将本调研内容作以下陈述：

1 对象及方法

1.1 研究对象

以2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例为评估对象，患儿入院初期都带有HFMD疑似体征，包括手、足、口等处皮肤起疱疹或黏膜组织出现斑疹，体温异常升高等，医师将全部入选患儿初诊患有HFMD。依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例，A组：42例男性、35例女性，年龄间于6个月-3岁间，平均（2.1±0.37）岁；B组：28例男性、22例女性，年龄间于3.1岁-6岁间，平均（4.2±0.25）岁。上述疑似病例总共搜集到125份咽拭子样本、61份疱疹液样本。

1.2 方法

1.2.1 设备及试剂

FQ-PCR法以杭州博日LineK型荧光定量实时PCR检测设备展开疱疹液、咽拭子样本测定操作，按病毒类型（EV肠道病毒、71肠道病毒、柯萨奇A16肠道病毒等）选用适宜的试剂盒，所用试剂盒都产自广州达安基因公司；ELISA（酶联免疫性吸附实验）法测定血清样本中的COXA16 IgG、EV71 IgG，试剂盒选用艾康公司所制产品。

1.2.2 检测操作

搜集入选患儿的咽拭子样本、疱疹液样本，总共搜集到125份咽拭子样本、61份疱疹液样本，借助消毒棉拭子取样本，将其迅速放置到病毒保养溶液当中，经冷冻存储并留作待检，冷冻存储温度约-20℃，如果放置超出1个月，冷冻存储温度约-70℃。

取出100μL样本，滴入清液，分离出样本RNA，将其放于PCR扩增设备之上，依照指南说明书内的有关内容展开标准化操作，设定正确循环参数、反应液配合指数、梯度模板和阳性、阴性比照值。ELISA法测定COXA16 IgG、EV71 IgG时，依照相应试剂盒的科学化标准展开具体操作。

1.3 统计学数据处理

运用SPSS21.0版统计软件对本次所有相关的调查数据予以整合处理，当中，（x±s）表示计量数据，（n/%）表示计数资料；运用x2检验组间计数资料的对比，计量资料比较通过t检验，组间数据对比差异显著时表示为P<0.05。

2 结果

经测定后评估知，127例疑似患有HFMD的患儿，其咽拭子样本、疱疹液样本在FQ-PCR法测定下，EV检测有101例显阳性，占79.53%；当中A组有67例，占87.01%（67/77），B组有34例，占68.00%（34/50）。比对评估发现，A组患儿阳性检出率超出B组，差异明显（P<0.05）。咽拭子样本检出阳性率是69.60%（87/125），疱疹液样本检出阳性率是81.97%（50/61）。127例患儿经FQ-PCR法、ELISA法测定EV71、COXA16的阳性数据如表1所示，从表看出，FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法，差异显著（P<0.05），而检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近，没有较大差异（P>0.05）。

3 讨论

从传统诊疗方法入手对HFMD病原体展开实时测定时，其依然以病症表现作为主要根据[3]。待入院经试验分析后再判别病毒的具体种类，这一阶段需耗费较长的时间（约7天），将会给诊疗工作带来比较大的影响[4]。本次研究将FQ-PCR法列为评估对象，并和ELISA 法实时测定结果展开比对。有关实验材料指证，ELISA 法医疗运用范围有限，难以达到PCR试验的配合要求[5]。FQ-PCR 法除常规性检测操作外，还能实时反馈肠道内诸多类型的病毒，且和病毒学培育所得结果接近[6]。

本研讨活动数据结果指出，127例患儿样本在FQ-PCR法测定下，咽拭子样本检出阳性率是69.60%（87/125），疱疹液样本检出阳性率是81.97%（50/61）；EV检测有101例显阳性，占79.53%；当中A组有67例，占87.01%（67/77），B组有34例，占68.00%（34/50）。A组患儿阳性检出率超出B组，差异明显（P<0.05）。同时，FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法，差异显著（P<0.05），检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近，没有较大差异（P>0.05）。

综合以上所述，将FQ-PCR 法践行于HFMD病原体实时测定当中，能强化病原学指标的监控力度，有助提升当地HFMD疫情预测工作的有序开展。

参考文献

[1]唐智超，石玮，朱红霞，等.2012年顺义区手足口病聚集性疫情病例及重症病例病原学结果分析[J].海南医学，2014，（20）：3097-3100.

[2]许玉玲，卫海燕，陈豪敏，等.手足口病例中埃克病毒11型河南株分子流行病学研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2013，（9）：688-691.

[3]李传生，应杰.不同病原体感染手足口病患儿炎性因子变化与病情转归临床分析[J].徐州医学院学报，2015，（12）：890-892.