土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响

阿布都吉力力·阿布都艾尼 尤力都孜·买买提 热比姑丽·伊斯拉木

1.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药理毒理研究室，新疆乌鲁木齐830049；

2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆乌鲁木齐830049；3.中国科学院大学，北京100049

土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响

阿布都吉力力·阿布都艾尼1，2，3尤力都孜·买买提1，2热比姑丽·伊斯拉木1，2

1.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药理毒理研究室，新疆乌鲁木齐830049；

2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆乌鲁木齐830049；3.中国科学院大学，北京100049

目的探讨土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响。方法将70只KM小鼠随机分为对照组、地塞米松组、消银颗粒组、异常黏液质成熟剂组、土大黄根提取物组（1 g/kg组、2 g/kg组、4 g/kg组）7个组，每组各10只，按体重分别给予0.5%羧甲基纤维素钠、1.05 mg/kg地塞米松、1.577 g/kg消银颗粒、2 g/kg异常黏液质成熟剂及1、2、4 g/kg土大黄根提取物灌胃。采用小鼠尾部鳞片角化不全模型，观测灌胃给药后小鼠的一般状况、体重、脏器指数、血生化指标及尾部皮肤组织病理学变化。结果与对照组比较，1、2、4 g/kg组小鼠行为活动、皮毛、粪便、饮食等均未见异常，脏器指数、体重无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）；血清肌酐、葡萄糖、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇均升高（P＜0.05或P＜0.01）。与对照组比较，1 g/kg组血清碱性磷酸酶升高、磷酸肌酸激酶降低；2 g/kg组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶升高，尿素降低；4 g/kg组血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、三酰甘油升高，磷酸肌酸激酶、尿素降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg组促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，且呈剂量规律性。结论土大黄根提取物能改变银屑病表皮的角化不全，但其作用与血生化指标的变化可能无明显关联。

土大黄根提取物；小鼠尾部鳞片角化不全模型；组织病理学；血生化

土大黄（Rumex L.）是蓼科（Polyonaceae）酸模属（Rumex）植物，多年生草本。维吾尔药物名为阿提库拉克（At kulak）、欧麻孜（Hummaz）、土日谢（Turux）、塔给库斯（Tag kusi），其药用部位为全草、叶子、根茎及根，用于肾、肝、胃肠疾病及皮疹、皮肤瘙痒等［1-3］。本研究探讨土大黄根提取物对小鼠尾部鳞片角化不全模型的影响。

1 对象与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药材及药品土大黄根由新疆华安中药饮片有限责任公司（GSP）提供（批号：12110），并由新疆大学资源与环境科学学院努尔巴依·阿不都沙力克教授鉴定为土大黄根。醋酸地塞米松（DXM）片（国药准字H3302 0822，批号：140670，浙江仙琚制药股份有限公司）。消银颗粒（XYKL）（国药准字Z20000019，批号：130809，陕西康惠制药股份有限公司）。异常黏液质成熟剂（MB）（批号：M20052633）由新疆维吾尔自治区维吾尔医院制剂室（GMP认证）提供。

1.1.2 实验动物KM小鼠80只，雄性，体重18～22 g，由新疆实验动物研究中心提供。实验动物生产许可证号：SCXK（新）2011-0001。实验动物使用许可证号：SYXK（新）2011-0005。实验开始前检疫，经一般行为观察，选用符合要求的70只小鼠进行试验。

1.2 实验仪器与试剂

1.2.1 实验仪器7100全自动生化分析仪（日立公司），KD-TS3D生物组织自动脱水机、KD-BM生物组织自动包埋机（浙江金华科迪仪器设备有限公司），RM2235切片机、DM2500生物显微镜、MVC2000显微成像系统（德国莱卡公司）。

1.2.2 试剂丙氨酸氨基转移酶（ALT，批号：140113030）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST，批号：140215020）、碱性磷酸酶（ALP，批号：140314022）、磷酸肌酸激酶（CK，批号：142514019）、总胆红素（TBIL，批号：140615012）、总蛋白（TP，批号：140815002）、白蛋白（ALB，批号：140915013）、葡萄糖（GLU，批号：141514029）、尿素（Urea，批号：141315001），肌酐（Crea，批号：141014014）、总胆固醇（TCHO，批号：141614024）、三酰甘油（TG，批号：141714028）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C，批号：142114020）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C，批号：142014016）均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产。

1.3 方法

1.3.1 土大黄根提取物的制备称取适量土大黄根以8倍量的70%乙醇溶液室温密闭浸泡1 h后回流提取3次（1.5～2 h），过滤，合并滤液减压浓缩，真空干燥，得干膏粉。

1.3.2 分组及用药因小鼠尾部表皮天然缺少颗粒层细胞，类似银屑病表皮角化不全病理改变，因而可作为银屑病角化异常的传统天然模型［4-7］。将70只KM小鼠，按体重随机分为7组：CON组（0.5%羧甲基纤维素钠）、DXM组（1.05 mg/kg DXM）、XYKL组（1.577 g/kg XYKL）、MB组（2 g/kg MB）、土大黄根提取物组（REL组、RE-M组、RE-H组，分别给予1、2、4 g/kg土大黄根提取物），每组各10只。给药组以0.2 mL/10 g体积灌胃给予相应药物，CON组灌胃等体积的0.5%（0.5%羧甲基纤维素钠），每日1次，连续15 d。

1.3.3 观察指标及检测方法末次给药2 h后，摘眼球法取血。4℃下3000 r/min离心10 min，通过7100全自动生化分析仪检测血清生化指标。取小鼠脾脏、胸腺、心脏、脑、肾脏、肝脏观察并称重，计算脏器指数（脏器指数=脏器重量/体重）。随后，取鼠尾距离根部3 cm皮肤标本，用15%福尔马林溶液固定、脱水、石蜡包埋并HE染色。在光镜下观察尾部皮肤组织病理学变化。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用One-Way ANOVA检验，两组间比较采用LSD-t检验；若方差不齐，两两比较采用Dunnett's T3法。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠一般状况及体重变化

与CON组比较，各给药组小鼠在实验期间，行为活动、皮毛、粪便、饮食等均未见异常，体重无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 药物对小鼠体重的影响（g，±s，n=10）

表1 药物对小鼠体重的影响（g，±s，n=10）

组别给药前给药后第1天第5天第10天第15天CON组DXM组XYKL组MB组RE-L组RE-M组RE-H组20.57±1.67 20.63±1.60 20.67±1.70 20.57±1.66 20.64±1.67 20.68±1.47 20.66±1.64 23.59±2.02 22.50±1.80 23.43±1.55 23.41±1.91 23.37±1.68 23.38±1.73 23.27±1.80 29.09±2.53 22.69±2.40 28.45±1.70 27.77±2.71 27.97±1.52 28.59±1.17 27.87±1.91 34.15±3.03 25.83±2.73 34.70±2.65 34.05±3.36 33.95±2.21 34.25±1.94 33.87±2.06 38.05±3.27 27.83±3.02 37.91±3.25 37.46±3.81 37.32±2.54 37.53±2.63 37.00±2.94

2.2 脏器指数变化

与CON组比较，DXM组小鼠脾脏指数、胸腺指数降低，脑指数升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。其他各组小鼠心脏指数、肾脏指数、肝脏指数与CON组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

2.3 血生化变化

与CON组比较，DXM组、XYKL组和MB组小鼠血清ALT、TP、ALB、TCHO、HDL-C升高；DXM组小鼠血清AST、Crea、GLU、TG升高，XYKL组小鼠血清CK降低、Crea升高，MB组小鼠血清LDL-C升高，Urea降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。与CON组比较，RE-L组、RE-M组、RE-H组小鼠血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C升高；RE-L组小鼠血清ALP升高，CK降低；RE-M组小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低；RE-H组小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。见表3。

2.4 皮肤组织病理学变化

CON组小鼠皮肤完全角化，缺乏颗粒层。棘层、基底层正常，基底膜完整。与CON组比较，DXM组小鼠皮肤部分出现颗粒层；XYKL组小鼠皮肤可见部分区域出现颗粒细胞层；MB组小鼠皮肤完全角化，出现1～2层颗粒细胞层；RE-L组小鼠皮肤少部分区域出现颗粒细胞层；RE-M组小鼠皮肤部分区域出现颗粒细胞层；RE-H组小鼠皮肤大部分区域出现颗粒细胞层。见图1。

表2 小鼠脏器指数变化（mg/g，±s，n=10）

表2 小鼠脏器指数变化（mg/g，±s，n=10）

注：与CON组比较，*P＜0.05

组别脾脏指数胸腺指数心脏指数脑指数肾脏指数肝脏指数CON组DXM组XYKL组MB组RE-L组RE-M组RE-H组3.1318±0.6932 1.2865±0.5719*3.1602±1.3046 3.0426±0.9447 3.3699±0.9160 2.6703±0.3939 3.3774±1.5179 3.6378±0.6339 1.5718±0.6064*3.6295±0.8889 2.8379±1.0807 3.1002±1.4613 3.0134±0.4043 3.2112±0.7410 7.4004±3.0770 10.8435±6.2225 6.4633±3.9407 5.1591±0.7265 5.3960±0.8438 5.5024±0.6417 5.1352±0.5666 11.3674±1.3974 14.9753±1.7622*12.0360±1.6645 11.0004±2.2471 11.5897±1.5026 10.6860±1.4068 11.5190±0.8145 15.7380±0.7592 15.9453±1.0983 15.4364±1.7329 14.5292±2.1819 15.1095±1.1860 15.4742±3.0691 15.3370±1.3450 51.7391±21.7421 57.5797±4.0755 53.3183±8.8239 48.4745±8.6458 53.2594±3.5702 52.0634±6.7868 48.0684±4.3839

表3 对大鼠生化指标的影响（±s，n=10）

表3 对大鼠生化指标的影响（±s，n=10）

注：与CON组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；ALT：丙氨酸氨基转移酶；AST：天门冬氨酸氨基转移酶；ALP：碱性磷酸酶；CK：磷酸肌酸激酶；Urea：尿素；Crea：肌酐；GLU：葡萄糖；TP：总蛋白；ALB：白蛋白；TCHO：；TG：三酰甘油；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C低密度脂蛋白胆固醇

组别ALT（U/L）AST（U/L）ALP（U/L）CK（U/L）Urea（mmol/L）Crea（μmol/L）CON组DXM组XYKL组MB组RE-L组RE-M组RE-H组42.0±4.1 96.1±23.2**51.2±10.1*56.0±13.2**50.3±17.3 52.4±9.2**51.1±11.3*127.0±12.2 229.3±31.0**132.4±13.1 195.6±115.0 128.5±26.4 172.4±41.7**153.6±22.2**239.8±38.1 248.6±66.3 247.9±46.2 237.5±24.0 284.4±41.5*283.3±71.7 269.3±25.3*713.4±214.1 911.3±398.1 337.3±131.0**755.1±503.0 270.1±191.0**505.3±408.0 240.9±78.1**8.10±1.1 7.16±1.0 7.7±0.7 5.9±0.4**7.3±1.1 6.1±0.9**5.5±0.7**24.9±5.3 35.2±4.2**29.8±2.8*29.1±3.6 35.4±7.4**35.2±8.1**38.7±4.5**组别GLU（mmol/L）TP（g/L）ALB（g/L）TCHO（mmol/L）TG（U/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）CON组DXM组XYKL组MB组RE-L组RE-M组RE-H组8.63±0.66 7.48±1.13*9.32±1.02 9.40±1.12 10.71±1.55**11.34±1.37**11.10±1.34**56.8±4.7 68.9±3.5**63.1±2.4**63.4±3.8**66.3±5.4**69.0±7.3**69.4±3.6**33.9±2.8 38.7±3.2**36.9±1.4**37.5±1.8**38.6±2.5**40.0±3.9**39.4±2.2**2.27±0.13 3.14±0.74**2.82±0.40**2.71±0.29**3.07±0.17**3.30±0.26**3.31±0.51**1.56±0.43 1.99±0.37*1.47±0.26 1.63±0.33 1.70±0.31 1.76±0.25 1.83±0.26*1.77±0.15**2.81±0.73**2.31±0.34**2.16±0.32**2.52±0.18**2.72±0.29**2.83±0.39**0.32±0.08 0.42±0.09 0.41±0.10*0.40±0.07*0.45±0.07**0.46±0.09**0.47±0.07**

3 讨论

目前常用的银屑病动物模型有小鼠尾部鳞片角化不全模型、普萘洛尔诱导耳部角化模型、咪喹莫特诱导小鼠模型等［8-12］。其中，小鼠尾部鳞片角化不全模型［13-17］于20世纪70年代初被应用于探讨药物抗银屑病样作用，目前已被国内外公认，并得到了普遍应用。小鼠尾部鳞片角化不全模型间接评价药物疗效的动物模型。该模型可以部分模拟银屑病表皮动力学紊乱的特点，且经济易得，故被作为筛选抗银屑病药物的常用模型。

土大黄的植物来源较多，我国大部分省区均有分布，药用资源丰富，在民间广泛使用。据现代药理学研究文献综述发现［18］，土大黄具有多种药理学作用，其中抗炎、抗肿瘤作用研究较多，对皮肤病研究报道极少。近几年，本课题组对新疆维吾尔自治区进行民间调查后发现，土大黄用于治疗银屑病等各种皮肤病，并取得了一定的临床效果。本课题组前期实验结果表明，土大黄根提取物具有治疗实验性银屑病的作用［19-20］。本实验结果表明，与CON组比较，1、2、4 g/kg土大黄根提取物处理后，小鼠行为活动、皮毛、粪便、饮食等未见异常，脏器指数、体重无明显变化（P＞0.05），而血清Crea、GLU、TP、ALB、TCHO、HDL-C、LDL-C均升高（P＜0.05或P＜0.01）；此外，1 g/kg土大黄根提取物可使实验小鼠血清ALP升高，CK降低（P＜0.05或P＜0.01）；2 g/kg土大黄根提取物可使小鼠血清ALT、AST升高，Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）；4 g/kg土大黄根提取物可使小鼠血清ALT、AST、ALP、TG升高，CK、Urea降低（P＜0.05或P＜0.01）。1、2、4 g/kg土大黄根提取物均可促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，且呈剂量规律性。

综上所述，土大黄根提取物（1、2、4 g/kg）能改变银屑病表皮的角化不全，从而具有治疗作用。但其作用与小鼠血生化指标变化可能无明显关联，这方面有待于深入研究。

图1 小鼠尾部鳞片角化不全模型皮肤组织病理变化（HE，40×）

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Effect of Rumex L.root extract on mouse tail model

Abdujilili·Abdugheny1，2，3Yultuz·Mamat1，2Rabigul·Islam1，2
1.Department of Pharmacology and Toxicology，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；2.Laboratory of Traditional Uyghur Medicine Prescription of Xinjiang，Inistitute of Xinjiang Traditional Uyghur Medicine，Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830049，China；3.University of Chinese Academy of Sciences，Beijing100049，China

Objective To explore the effect of Rumex L.root extract on mouse tail model.Methods 70 mice were randomly assigned to CON group，DXM group，XYKL group，MB group and Rumex L.root extract group（1 g/kg group，2 g/kg group，4 g/kg group），with 10 mice in each group，and according to the weight they were given 0.5%CMC-Na，1.05 mg/kg Dexamethasone，1.577 g/kg Xiaoying granules，2 g/kg Munziq Balgam，and 1，2，4 g/kg Rumex L.root extract respectively by gavage.After gavage，general condition，body weight，organ index，blood biochemistry，tail skin histopathology of mice were observed by mouse tail scales parakeratosis model.Results Compared with CON group，mice of the 1，2，4 g/kg group had no obvious abnormalities in activity，fur，faeces，diet，and had no obvious change in organ index and body weight，there were no statistically significant differences（P＞0.05）；serum Crea，GLU，TP，ALB，TCHO，HDL-C，LDL-C of the 1，2，4 g/kg group increased（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with CON group，serum ALP of the 1 g/kg group increased and CK decreased；serum ALT，AST of the 2 g/kg group increased and Urea decreased；serum ALT，AST，ALP of the 4 g/kg group increased and CK，Urea decreased（P＜0.05 or P＜0.01）.1，2，4 g/kg group promoted formation of epidermis granular layer on mouse tail skin and dose dependent.Conclusion Rumex L.root extract can change parakeratosis of psoriasis skin，which has a therapeutic effect，but its function and blood biochemical parameters of mice may not have clear correlation.

Rumex L.root extract；Mouse tail model；Histopathology；Blood biochemistry

R965

A

1673-7210（2016）07（b）-0004-05

2016-04-02本文编辑：任念）

新疆维吾尔自治区公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目（KY2015138；KY2015139）。

阿布都吉力力·阿布都艾尼（1982.6-），男，新疆伊犁人，中国科学院大学有机化学专业2015级在读博士研究生；研究方向：民族医药。

热比姑丽·伊斯拉木（1970.10-），女，新疆阿图什人，博士，主要从事维吾尔药药理毒理学研究。