高效液相-蒸发光散射法检测氟［18F］脱氧葡糖注射液中2-氯-2-脱氧-D葡萄糖含量

张强，谢新民，周

（1.中国人民解放军广州军区广州总医院药剂科，广东广州510010；2.中国人民解放军广州军区广州总医院正电子药物中心，广东广州510010）

高效液相-蒸发光散射法检测氟［18F］脱氧葡糖注射液中2-氯-2-脱氧-D葡萄糖含量

张强1，谢新民1，周2

（1.中国人民解放军广州军区广州总医院药剂科，广东广州510010；2.中国人民解放军广州军区广州总医院正电子药物中心，广东广州510010）

目的建立测定氟［18F］脱氧葡糖注射液中2-氯-2-脱氧-D葡萄糖（CLDG）含量的高效液相-蒸发光散射（HPLC-ELSD）法。方法色谱柱为SB-C18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 m），流动相为甲醇-0.1%三氟乙酸（10∶90），流速为0.2 mL/min，进样量为10 L；Sedex 85型低温型蒸发光散射检测器，载气（N2）压力为3.0 bar，检测池温度为40℃，gain值为10。结果CLDG质量浓度在5.06～135.00 g/mL范围内与峰面积同时取对数后呈良好线性关系，R2=0.999 0，检测限为2 g/mL，定量限为5.0 g/mL。结论该方法简便、快速，适用于氟［18F］脱氧葡糖注射液生产中的常规质量控制。

高效液相-蒸发光散射法；2-氯-2-脱氧-D葡萄糖；氟［18F］脱氧葡糖注射液

氟［18F］脱氧葡糖（［18F］-FDG）注射液的放射性核素半衰期很短，仅120 min，属短寿命的正电子放射性药物，且所含杂质极其微量，通常相当于纳摩尔量级，迫使用于化学杂质检查的方法需要快速且有更低的检测下限，以及专门的安全性评价、质量保证和质量控制措施［1-6］。2015年版《中国药典（二部）》开始收载氟［18F］脱氧葡糖注射液，在其检查项下对合成催化剂氨基聚醚（KryPtofixTM2.2.2）作了限量规定，但未对合成中酸水解引入的2-氯-2-脱氧-D葡萄糖（CLDG）作限量要求［7］。目前，CLDG尚无半数致死量（LD50）数据［8］，但《美国药典》（USP）明确规定CLDG应小于1.0 mg/dose，并推荐高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法（HPAEC-PAD）。Nakao等［9］报道，可采用柱前衍生和高效液相色谱-紫外光谱（HPLC-UV）法，在210 nm波长处对CLDG进行测定。袁艳娟等［10］报道，采用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）检测氟［18F］脱氧葡糖注射液中的CLDG含量。MS和PAD检测器昂贵，维护保养要求高。柱前衍生操作步骤烦琐，均不利于氟［18F］脱氧葡糖注射液的快速常规质量分析，而价格相对低廉的低温型蒸发光散射检测器（ELSD）作为一种通用型质量检测器，越来越多地被运用在无紫外吸收和紫外末端吸收物质的常规分析中［11-12］。有研究已成功应用HPLC-ELSD法对氟［18F］脱氧葡糖注射液中的氨基聚醚进行了测定［13］。在此基础上，笔者采用HPLCELSD法测定氟［18F］脱氧葡糖注射液中CLDG的含量，旨在为应用该方法同时测定氟［18F］脱氧葡糖注射液中的氨基聚醚和CLDG含量提供依据。现报道如下。

1　仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（包括G1313A型高压二元泵，G1313A型自动进样器，G1316A型柱温箱，安捷伦科技公司）；Sedex 85型低温型蒸发光散射检测器（迪马科技有限公司）；Agilent A.09.01型化学工作站（安捷伦科技公司）。2-氯-2-脱氧-D葡萄糖对照品（Sigma公司）；甲醇为色谱纯（Merck公司），三氟乙酸为分析纯，水为重蒸馏水。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Zorbax SB-C18柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）；流动相：甲醇-0.1%三氟乙酸（10∶90）；流速：0.2 mL/min；进样量：10 μL；N2压力：3.0 bar；检测池温度：40℃；gain值：10；柱温：25℃。

2.2溶液制备

对照品溶液：精密称取CLDG对照品0.005 05 g，置容量瓶中，用乙腈稀释成质量浓度为1.010 0 g/L的贮备液，置4℃条件下贮存备用。

样品溶液：［18F］-FDG注射液（批号分别为20160311，20160322，20160330），在广州军区广州总医院正电子药物中心，使用SiemensExploraFDG4装置合成。2.3方法学考察

系统适用性与检测灵敏度试验：取对照品贮备液，用乙腈逐级稀释，在拟订色谱条件下试验，CLDG的保留时间为3.41 min，其色谱图见图2。按信噪比（S/N）=3计算，得CLDG最小检测限约为2.0 μg/mL，定量限为5.0 μg/mL。

线性关系考察：精密量取CLDG贮备液，用乙腈依次稀释成质量浓度为135.00，67.50，33.75，16.88，5.06 μg/mL的梯度溶液。按拟订色谱条件进样试验，记录CLDG色谱峰面积。结果表明，CLDG质量浓度在5.06～135.00 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，两者在取对数后呈线性关系，线性方程为Y=0.882+ 1.461 X，R2=0.999 0。

精密度和准确度试验：线性关系考察中取5个浓度梯度的CLDG对照品溶液，在拟订色谱条件下试验，每个浓度重复测定5次，连续测定3 d。分别用相对标准偏差（RSD）和相对误差（RE）计算日内和日间的精密度与准确度。结果见表1。

2.4样品含量测定

等渗调节剂氯化钠会干扰上述色谱条件下氟［18F］脱氧葡糖注射液中CLDG的测定，故样品测定应在调节注射液等渗前。结果，3个批次的氟［18F］脱氧葡糖注射液中CLDG含量均小于2 μg/mL。

图2　氟［18F］脱氧葡糖注射液和CLDG色谱图

3　讨论

HPLC-ELSD法要求流动相组分在检测时先被加热蒸发，而后不挥发的溶质颗粒通过光散射池时产生的电信号被光传感器测定［14］。CLDG的极性较大，故采用无极性的C18分析柱，极性溶剂和挥发性的酸性离子对试剂组成的流动相是最适合的HPLC-ELSD色谱条件。试验中对有机溶剂（甲醇，乙腈）和挥发性的离子对试剂（甲酸，乙酸，三氟乙酸，七氟丁酸）进行了对比，选择甲醇-0.1%三氟乙酸作为流动相，通过调整比例和流速，使CLDG达到基线分离。

氟［18F］脱氧葡糖注射液制备过程中，使用盐酸对氟［18F］脱氧葡糖前体进行水解，引入的氯离子及水解纯化后调节等渗的氯化钠均会干扰该试验方法下CLDG的测定，水解引入的副产物可通过氟［18F］脱氧葡糖注射液合成装置（Siemens Explora FDG4）中的AG11A8离子交换树脂柱（Waters公司）除去。

表1　日内和日间精密度的RSD及RE

本试验中选择HPLC-ELSD方法检测氟［18F］脱氧葡糖注射液中CLDG的含量，灵敏度高，简便快速，适用于生产过程的快速质量控制，符合药品生产质量管理规范（GMP）对过程控制的理念。

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Content Determination of the Concentration of CLDG in［18F］-FDG by HPLC-ELSD

Zhang Qiang1，Xie Xinmin1，Zhou Zheng2
（1.DepartmentofPharmacy，GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryCommand，Guangzhou，Guangdong，China510010；2.Positron Medicine Center，Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Command，Guangzhou，Guangdong，China510010）

ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method to determine the concentration of CLDG in［18F］-FDG.M ethodsThe C18column was used and the mobile phase was methanol-0.1%TFA（10∶90）at a flow rate of 0.2 mL/min.The auto-injection volume was set to 10 μL.The pressure of nebulizing gas（N2）was 3.0 bar.The drift tube temperature was 40℃.The gain was 10.Results Excellent linearity（R2=0.999 0）was obtained over the range of 5.06-135.00 μg/mL.The limit of detection was 2 μg/mL，and the quantification limit was 5.0 μg/mL.ConclusionThis method simple，rapid，quantitative and sensitive detection of CLDG in［18F］-FDG thus making it amenable to routine quality assurance testing.

HPLC-ELSD；CLDG；［18F］-FDG

R927.1；R979.1

A

1006-4931（2016）12-0069-03

广东省医学科研基金项目，项目编号：A2014493。

（2016-01-06；

2016-02-09）