正交实验法优选海杞咀嚼片的提取工艺

◎罗海燕，申雨薇，毛彩霓，盛 琳（海南医学院，海南 海口 571101）

正交实验法优选海杞咀嚼片的提取工艺

◎罗海燕，申雨薇，毛彩霓，盛 琳
（海南医学院，海南 海口 571101）

为优化海杞咀嚼片的提取工艺，根据处方药物所含成分的理化性质及处方的功能主治，确定合理的提取工艺路线：以多糖含量及出膏率为评价指标，通过单因素试验和正交试验，筛选出枸杞子和山药的提取工艺。结果表明：用水提法合提山药和枸杞子，提取条件为6倍量溶剂提取3次，每次1.5 h。该工艺流程方法简单，操作简便，药材的利用度高。

海杞咀嚼片；多糖；干膏收率；正交试验

海杞咀嚼片由海马、枸杞子、山药等药物组成，具有补肾补脾、生津益肺、益精明目的作用[1，2]。该试验以干膏收率、多糖含量为评价指标，采用正交试验设计优选提取工艺，为制剂成型工艺研究提供试验依据。本文以多糖含量及出膏率为评价指标，通过单因素试验和正交试验法，筛选出枸杞子和山药的提取工艺。

1　材料

紫外分光光度计。试剂均为分析纯。枸杞子购自海口市广安堂药品超市连锁经营有限公司，生产公司为济南绿色中药饮片有限公司，生产批号为15032611；山药购自海口市广安大药堂连锁经营有限公司，生产公司为海南寿南山参业有限公司，生产批号为15081505。

2　方法与结果

2.1苯酚-硫酸法测定总多糖含量

2.2.1对照品溶液的制备

取无水葡萄糖对照品25.0 mg，精密称定，置250 mL量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀即得（每l mL中含无水葡萄糖0.l mg)。

2.2.2吸收波长的选择

用0.006 mol／L的葡萄糖标准品和空白对照品，在紫外分光光度计上测量最大吸收峰，吸收波长为490 nm。

2.2.3标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8 mL和1.0 mL，分别置于试管中，分别加水补至2.0 mL，各精密加入5%苯酚溶液1.0 mL摇匀，迅速精密加入硫酸5.0 mL摇匀，放置10 min，置于40 ℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白对照，采用紫外-可见分光光度法（通则0401)，在490 nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程y=6.29x-0.026，R2=0.997 1。

2.2提取工艺研究

2.2.1枸杞子和山药合提、分提的筛选实验

试验考察了2种提取工艺，即全方饮片合提、枸杞子和山药饮片分提后按处方比例混合[3，4]。提取液按苯酚-硫酸法测定总糖含量和干膏收率，结果见表1。

结果表明，若先分提再混合，所得多糖含量不如直接合提多，而出膏率虽比直接合提大，但多糖含量为首要考虑因素，故选用合提法来提取枸杞子和山药。

2.2.2提取温度的选择

根据预试验，山药多糖的提取最佳温度和枸杞多糖提取最佳温度不一致。对枸杞子和山药合提温度做筛选，分别为60、80、100 ℃，结果见表2。根据试验结果和生产需要，选择80 ℃为枸杞子和山药合提温度。

表1　枸杞子和山药合提和分提的筛选考察表

表2　枸杞子和山药合提提取温度的筛选表

2.2.3正交试验设计

按处方比例分别称取药材210 g，共9份，以加水量、提取时间、提取次数等因素为考察对象，选用L9（34）正交设计表，具体试验安排见表3。提取液静置后取上清液，浓缩至稠浸膏，减压干燥，测定水提取物的出膏率及度糖含量，综合评分=多糖含量×0.6+干膏收率×0.4。结果见表4，方差分析结果见表5。

表3　山药、枸杞子水提正交试验因素表

结果表明，枸杞子和山药合提的最佳提取工艺为A2B3C3（8倍量溶剂提取3次，每次2.0 h），其中各因素的影响顺序由大到小依次为A＞B＞C。从提取时间来看提取1.5 h和提取2.0 h次以及6倍量水和8倍量水对提取结果没有多大影响，结合实际生产中的生产周期和成本，可以考虑优选提取枸杞子和山药工艺为：A3B2C2（6倍量溶剂提取3次，每次1.5 h）。

表4　山药、枸杞子水提正交试验结果表

表5　水提枸杞子和山药的正交实验结果方差分析表

2.2.4工艺验证

枸杞子、山药采用水提取正交试验优选的工艺，提取3批，每批投药量为210 g，进行工艺验证。验证结果与正交试验结果吻合，表明此工艺合理，结果见表6。

3　讨论

苯酚-硫酸法测多糖含量操作复杂，耗时长，对操作精准度要求高。需要注意的是操作的准确性，包括到每个细节，并做增加平行试验，减少误差。

表6　最佳工艺的验证实验表

[1]洪美华.海马的药理作用研究进展[J].中国医疗前沿，2009，4（6）：9-10.

[2]朱苗，谢勇，卢忠英，等.海马活性成分提取技术研究进展[J].广州化工，2015，43（10）：19-20.

[3]陈庆伟，陈志桃.枸杞多糖药理作用研究进展[J].海峡药学，2005，17（4）：4-7.

[4]滕俊，袁佳，叶莎莎.枸杞子化学成分及药理作用相关性概述[J].海峡药学，2014，26（6）：36-37.

Technique Optimization of Extraction Process of Haiqi Chewable Tablets

Luo Haiyan，Shen Yuwei，Mao Caini，Sheng Lin
（School of Pharmacy，Hainan Medical University，Haikou 571199，China）

To optimize the extraction process for Haiqi Chewable Tablets，the appropriate extraction process was determined according to the physical and chemical properties of the drugs in the prescription and the function and symptoms of the prescription. The extraction processes of Chinese yam and wolfberry fruit were screened and determined by single-factor and orthogonal tests with the content of polysaccharide and extraction rate as the evaluation indexes. The results showed that Chinese yam and wolfberry fruit were extracted together by water and the extraction parameters werw as follows： six times amount of solvent，extraction 3 times and 1.5 h each time. This process method is simple，easy to operate and of a higher medicinal utilization ratio.

Haiqi Chewable Tablets；Polysaccharide；Orthogonal test；Preparation process

TQ461

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.04.035

海南省科技兴海专项（编号：XH201310）。

罗海燕（1971-），女，汉族，四川重庆人，博士，教授，主要研究方向：热带药用动植物的研究与开发。

毛彩霓（1977-），女，汉族，黑龙江哈尔滨人，副教授，主要研究方向：中药制剂研究；盛琳（1975-），女，汉族，四川成都人，在读博士，副教授，主要研究方向：药物制剂及热带药用植物的研究与开发。