不同贮藏时间及温度对猪尿中盐酸克伦特罗快速检测的影响研究

伍晓红，饶辉，谢永忠，吴志勇，聂婉，陈秋玲，王琤*

（1.江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌330013；2.江西省畜牧技术推广站，江西南昌330077）

不同贮藏时间及温度对猪尿中盐酸克伦特罗快速检测的影响研究

伍晓红1，饶辉2，谢永忠2，吴志勇2，聂婉1，陈秋玲1，王琤1*

（1.江西科技师范大学生命科学学院，江西南昌330013；2.江西省畜牧技术推广站，江西南昌330077）

为研究不同贮藏时间及温度对猪尿中盐酸克伦特罗快速检测的影响，向阴性猪尿中添加盐酸克伦特罗标准品，配制成5、50、500 μg/kg三个不同浓度后，分别在常温（室温）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）条件下贮藏，于1、4、7、18、21、28 d用酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法进行快速检测。结果表明，所有的猪尿样本都呈阳性，且可检测到起始浓度为5 μg/kg的样本随时间延长检测值降低，同时冷冻的保存效果最好。

盐酸克伦特罗；猪尿；贮藏条件

盐酸克伦特罗（CL）又称盐酸双氯醇胺、克喘素，俗称瘦肉精，能显著提高猪的胴体瘦肉率和生长速度，但人食用含CL的猪肉制品会出现心悸、四肢震颤、面瘫、抽搐等中毒症状（朱童心和黄曼曼，2013）。当前监管部门对CL进行快速检测多采用酶联免疫法（ELISA）和胶体金免疫层析法（GICA）（申慧敏等，2014）。虽然目前关于CL的检测方法的相关研究有较多报道，但不同贮藏时间和温度对猪尿中CL的快速检测的影响却鲜有报道。因此，本实验拟研究贮藏时间和温度对猪尿中CL快速检测的影响，以期为监测部门对猪尿样品检测前的保存提供理论参考。

1　材料与方法

1.1试剂和仪器盐酸克伦特罗标准品、ELISA试剂盒、克伦特罗快速检测卡、全自动酶标仪、移液枪。

1.2样品的制备和检测将收集到的阴性猪尿原液分别向其中添加盐酸克伦特罗标准品，配制成5、50、500 μg/kg三个不同浓度的样品，每个浓度设3个重复，分别于常温（室温）保存、低温冷藏（4℃）、低温冷冻（-20℃）。在贮藏1、4、7、18、21、28 d时将每个样本各取出一部分使之恢复常温，进行胶体金免疫法（GICA）检测，并依照农业部颁布《猪尿液中盐酸克伦特罗检测方法-酶联免疫吸附测定法》（农牧发［2001］38号）进行ELISA法检测，记录检测结果。

2　结果和分析

2.1阳性尿样ELISA法检测结果28 d内，在对常温、冷藏、冷冻三种保存条件下的样本进行测定时，发现起始浓度为50 μg/kg和500 μg/kg的样本吸光度值都超出试剂盒的检测线性范围。而对起始浓度为5 μg/kg的样本数据进行分析时，可发现CL在常温、冷藏、冷冻三种条件下保存均出现不同程度的降解。随着贮藏时间的推进，起始浓度为5 μg/kg的样本检出值呈下降趋势，且三种保存方式比较，冷冻环境下保存CL的降解速度最慢（图1）。

图1　起始浓度为5 μg/kg的样本在不同贮藏时间及温度下检测值变化曲线

2.2阳性尿样克伦特罗快速检测卡检测结果在使用胶体金试纸条对上述猪尿进行检测时，不同贮藏时间及保存温度条件下的三个平行样本组均出现了阳性的结果，未出现无效结果。

3　讨论

本实验通过ELISA和GICA两种方法对不同贮藏时间和温度下不同浓度的盐酸克伦特罗进行检测，两种检测方法的结果基本吻合。起始浓度为5 μg/kg样本的ELISA法检测结果表明，CL保存时间和条件的不同，降解情况也有差异。赖卫华等（2009）用ELISA法检测发现，猪尿中莱克多巴胺（RAC）在一定贮藏时间内置于常温、冷藏和冷冻条件下均会出现不同程度的降解，其中冷藏条件下降解率最低，同时进行的GC-MS法定量检测，得到了相同的试验结果。可见，对于测定猪尿中CL时，贮藏时间和方式对于检测值有一定的影响。

ELISA法和GICA法只能对猪尿样本进行快速筛查，而不能进行最终的确证，同时ELISA法和GICA法分别存在线性范围限制和无法确定待测物浓度的缺点（翟福丽等，2011）。因此在进行检测时，仍需要采取其他的检测方法对样品进行确证，以佐证ELISA法和GICA法检测结果的可靠性。

4　小结

本实验结果表明，为保证猪尿中盐酸克伦特罗检测的准确性，收集猪尿样本后应尽快转移至冷冻环境中贮藏并完成初筛，并对发现的阳性样品进行确证检测。鉴于猪尿中的成分与盐酸克伦特罗之间的相互影响尚未明确，导致盐酸克伦特罗降解的因素仍需进一步研究。

［1］赖卫华，张国华，徐国茂.不同贮藏时间及温度下莱克多巴胺浓度变化的研究［J］.食品与机械，2009，6：99～101.

［2］申慧敏，杜鹃，贾秀珍.动物性食品中β-受体激动剂类残留检查方法研究进展［J］.山东畜牧兽医，2014，35（10）：80～81.

［3］翟福丽，赖克强，张衍亮，等.动物性食品β-兴奋剂残留概述［J］.食品科学，2011，32（5）：351～356.

［4］朱童心，黄曼曼.盐酸克伦特罗的检测方法研究进展［J］.安徽农业科学，2013，41（25）：10341～10342+10345.

This experiment was conducted to study the effect of different storage time and temperature on the rapid detection of clenbuterol hydrochloride in pig urine.Negative swine urine samples were spiked with clenbuterol to three different concentration（5 μg/kg，50 μg/kg and 500 μg/kg）and immediately stored at normal atmospheric temperature（room temperature），cold storage（4℃），refrigerated storage（-20℃）.Clenbuterol hydrochloride was rapid detectied by using enzyme linked immunosorbent adsorption method and colloidal gold immune chromatography on days 1，4，7，18，21 and 28 d. The results showed that all pig urine samples were positive，but the concentration of sample with initial concentration of 5 μg/kg extended values over time was reduced with time extension，the frozen preservation effect was best.

clenbuterol hydrochloride；swine urine；preservation conditions

S816.17

A

1004-3314（2016）13-0033-02

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161308

江西科技师范大学第九届本科生创业、科研基金项目（20150901008）；2015江西省农牧渔业科研项目