住院儿童呼吸道标本病原菌分布及耐药性分析

罗宇鹏

(成都市第五人民医院检验科，四川　成都　611130)

住院儿童呼吸道标本病原菌分布及耐药性分析

罗宇鹏

(成都市第五人民医院检验科，四川成都611130)

目的:了解我院儿童下呼吸道标本分离病原菌分布对常见抗菌药物的耐药性。方法:收集我院2014年儿童呼吸道标本，通过培养和抗菌药物敏感性和耐药性试验，对结果进行统计分析。结果:2 051份标本分离病原菌283株，主要为流感嗜血杆菌(占58.30%)、肺炎链球菌(占20.14%)和卡他莫拉菌(占18.73%)。药敏试验显示流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌产β－内酰胺酶阳性率分别为41.8%和100.0%，青霉素耐药的肺炎链球菌检出率为3.8%。结论:流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和卡他莫拉菌是引起我院2014年儿童呼吸道感染的主要病原菌，提示定期分离病原菌并进行耐药性监测统计有助于及时了解其耐药性的变迁，起到监督、管理及指导对儿童抗菌药物合理应用的作用。

儿科;病原菌;敏感性;耐药率

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下呼吸道感染是儿童的常见病，迄今为止仍是我国小儿首位的感染性疾病，也是导致儿童抗菌药物使用频率最高、数量最大的疾病［1］，常引起发热、咳嗽、咳痰、气紧等呼吸道症状，严重影响儿童的生活质量。而社区获得性肺病最常见致病菌是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及卡他莫拉菌，这几种菌对营养要求较高，称为苛养性细菌，也是引起儿童社区获得性呼吸道感染的主要致病菌，还可引起肺炎、支气管炎、支气管肺炎、咽炎、脑膜炎甚至败血症。由于抗菌药物在临床的广泛应用，细菌耐药性也越来越严重，且具有一定的区域性。因此，及时、准确地掌握本地区儿童呼吸道感染病原菌分布及细菌耐药性动态，可为指导临床经验用药提供依据。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株来源收集2014年1月1日至12月31日我院儿科住院呼吸道标本2 051份。

1.1.2培养基及抗菌药物纸片珠海迪尔鉴定药敏板条均为广州珠海迪尔公司产品;哥伦比亚血琼脂培养基、麦康凯培养基、含万古霉素巧克力培养基、HTM培养基(流感嗜血杆菌药敏试验培养基)由成都瑞琦公司提供;复方新诺明、氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松、头孢呋辛、阿奇霉素、四环素、亚胺培南、Ⅴ因子、Ⅹ因子、(Ⅴ+Ⅹ)因子纸片及头孢硝噻吩等药敏纸片为英国OXOID公司产品。

1.1.3质控菌株流感嗜血杆菌ATCC49247及ATCC49766、金黄色葡萄球菌ATCC29213、铜绿假单胞菌ATCC27853、肺炎链球菌ATCC49619、粪肠球菌ATCC49212、克柔念珠菌6258等。

1.2方法参照CLSIM100－S24相关文件进行抗菌药物敏感试验［2］。

1.2.1下呼吸道标本的筛查［3］直接或通过洗涤后达到显微镜高倍镜下白细胞数≥25个、低倍镜下上皮细胞≤10个视为合格标本，进行一步洗涤匀质化;若高倍镜下白细胞数＜25个，视为不合格标本。

1.2.2下呼吸道标本的洗涤、涂片、匀质化及接种孵育对于筛查合格的痰液标本，加入适量的生理盐水进行洗涤，挑取脓性痰液部分进行涂片革兰染色，同时加入1%胰蛋白酶粉35℃进行匀质化60～90 min后，分区画线接种哥伦比亚血琼脂、麦康凯、巧克力培养基，麦康凯培养基放置普通孵育箱孵育(35℃，18～24 h)，哥伦比亚血琼脂及巧克力培养基放置二氧化碳孵育箱孵育(35℃，5%CO2，18～24 h)。

1.2.3致病菌与定植菌(或污染菌)的区分革兰染色涂片油镜下检查见白细胞胞内所吞噬细菌视致病菌;未被白细胞吞噬的细菌则视为定植菌(或污染菌)［3］。

1.2.4细菌鉴定及药敏试验细菌的鉴定及药敏均采用珠海迪尔鉴定板条及药敏试验，迪尔板条不能涉及的药敏试验如流感嗜血杆菌药敏试验采用纸片扩散法补充完成。

1.2.5β－内酰胺酶检测用头孢硝噻吩纸片法检测葡萄球菌、流感嗜血杆菌及卡他莫拉等细菌。

1.2.6结果判断和数据分析按照CLSIM100－S24折点准确判读药敏试验结果［2］，采用WHONET5.6软件进行统计分析。

2　结果

2.1病原菌分布结果详见表1。

表1　住院儿童下呼吸道标本分离病原菌情况

在剔除重复送检病例后儿科送检呼吸道2 051份标本中，分离到病原菌283株，阳性率13.80%。其中革兰阴性菌占79.15%(224/283)，革兰阳性菌占20.85%(59/283)。分离出的菌种为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和星座链球菌，其中流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和卡他莫拉菌3种苛养菌占97.17%。

2.2病原菌对抗菌药物的敏感性和耐药率本文主要对流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌3种病原菌进行抗菌药物的敏感及耐药性分析，其他菌种因数量太少未纳入分析范围。

2.2.1流感嗜血杆菌的敏感性和耐药率试验结果详见表2。

表2　165株流感嗜血杆菌对常见的抗菌药物的敏感性及耐药率

2.2.2肺炎链球菌的敏感性和耐药率试验结果详见表3。

表3　57株肺炎链球菌对常见抗菌药物的敏感性及耐药率

2.2.3卡他莫拉菌的敏感性和耐药率试验结果详见表4。

表4　53株卡他莫拉菌对常见抗菌药物的敏感性及耐药率

3　讨论

由于小儿机体发育不成熟，免疫系统功能较差，机体抵抗力相对较弱，下呼吸道感染机会增加，成为严重影响小儿身体健康的疾病之一。2014年我院临床儿科住院患者共送检下呼吸道标本2 051份，分离出283株病原菌，阳性率为13.80%，较其他医院的检出率高出许多［4］，可能与我院儿科密切重视对微生物检验相关，也与临床医生对痰标本采集的方式方法有关。有资料表明，通过气管吸痰方式采集远比诱导儿童咳痰阳性率要高;首次标本在入院第一时间或首次使用抗生素前采集标本送检，更能提高可疑病原菌检测率。

我们在所分离病原菌中，革兰阳性菌占20.85%，革兰阴性菌占79.15%，与全国细菌耐药监测网历年统计数据差别不大［5－7］。排在前3位的病原菌为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及卡他莫拉菌，三者占检出病原菌的97.17%，是引起儿童呼吸道感染的主要病原菌，其分离率明显高于全国细菌耐药监测网历年统计数据［5－7］，进一步证实了该3种呼吸道苛养菌是引起儿童社区获得性感染的主要病原菌，也充分说明了把握标本采集时机、合理的采集手段及微生物室适当的培养条件对儿童呼吸道病原菌分离的重要性。

在本次耐药性监测统计中，流感嗜血杆菌产β内酰胺酶的菌株占41.8%，另有0.6%的BLNAR(即β内酰胺酶阴性，氨苄西林耐药菌株)，产生的耐药机理还是以β－内酰胺酶为主;复方新诺明的耐药性最高，为88.8%，氨苄西林及四环素也有较高的耐药性，分别为42.4%、25.5%;而2代、3代头孢菌素、阿奇霉素及喹诺酮类药物均保持比较高的敏感性;所分离到的卡他莫拉菌全部产β内酰胺酶，对大环内酯类药物均有较高的耐药性，但是对头孢菌素2代、3代、加酶抑制剂药物及喹诺酮类都有很高的敏感性;但是喹诺酮类药物会影响儿童软骨发育，且由于有很强的诱导耐药性，一般不推荐用于18岁以下儿童试验;所以治疗流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌感染首选的抗生素应是青霉素/克拉维酸酶抑制剂和2代、3代头孢菌素类抗菌药物。青霉素敏感的肺炎链球菌(PSSP)占94.3%，青霉素中介的肺炎链球菌占1.9%，青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP)占3.8%;肺炎链球菌对复方新诺明、克林霉素、阿奇霉素、红霉素、四环素等耐药率较高，分别为81.1%、90.4%、96.2%、94.3%、92.5%，但对青霉素、头孢三代、氯霉素、喹诺酮类药物仍有较高的敏感性;因为喹诺酮类药物毒副作用不推荐使用，所以以青霉素为主的β－内酰胺类药物依然是治疗肺炎链球菌的首选药物。

综上，引起我院儿童呼吸道感染的主要致病菌是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及卡他莫拉菌这3种苛养性细菌;正确及时地采集到合格的呼吸道标本是提高儿童呼吸道病原菌确诊的关键。通过药敏和耐药试验，可变经验性盲目治疗为有的放矢治疗。对儿童呼吸道分离病原菌进行耐药性监测，还可了解耐药性的变迁，为临床提供有力的实验室数据，起到监督、管理及指导对儿童抗菌药物合理应用的作用。

［1］陆权，陈慧中，杨永弘．关注小儿社区获得性肺炎［J］．中华儿科杂志，2007，45(2):81－82．

［2］Clinical，Laboratory Standards Institute．Perormance standards for antimicrobial susceptibility testing;twenty－fourth informational supplement［S］，2014．

［3］杨进，卢先雷，罗宇鹏．痰液细菌学检验的标准化操作程序初探［J］．医学检验与临床，2008，19(2):7－12．

［4］闵小春，罗少锋，王威，等．流感嗜血杆菌的临床分布及耐药性分析［J］．中华医院感染学杂志，2014，24(15):3665－3667．

［5］胡付品，朱德妹，汪复，等．2011年中国CHINET细菌耐药性监测［J］．中国感染与化疗杂志，2012，12(5):321－329．

［6］朱德妹，汪复，胡付品，等．2010年中国CHINET细菌耐药性监测［J］．中国感染与化疗杂志，2011，11(5):321－329．

［7］胡付品，朱德妹，汪复，等．2013年中国CHINET细菌耐药性监测［J］．中国感染与化疗杂志，2014，14(5):365－374．

Analysis of Pathogenic Bacteria Distribution and Drug Resistance in Specimens of Pediatric Respiratory Infection

LUO Yupeng
(Clinical Laboratory，Chengdu No.5 People＇s Hospital，Sichuan Chengdu 611130，China)

Objective:To investigate the drug resistance and distribtion of the bacterial pathogen isolated from pediatric respiratory samples．Methods:Analysed the bacterial pathogen distribtion and antibiotic resistance of pediatric respiratory specimens strains in 2014．Results:In the pediatric respiratory specimens strains，the main isolated specimens strains were Haemophilus influenzae(58.30%)，Streptococcus pneumoniae(20.14%)，Branhamella catarrhali(18.73%)．Drug susceptibility test results showed that:．Influenzae and Branhamella catarrhali producing beta lactamase positive rate were 41.8%and 100.0% respectively，and streptococcus pneumonia PRSP detection rate was 3.8%．Conclusion:Haemophilus influenzae，Streptococcus pneumonia and moraxella catarrhalis were the main sources of respiratory infection among children．Regular surveillance of the isolated pathogens resistance from the pediatric respiratory tract could help us to understand its resistance changes，itwould play an active role in strengthening the supervision and management of rational use of antibiotics in children．

pediatric;pathogenic bacteria;sensitivity;resistance rate

R725.6

A

10.11851/j.issn.1673－1557.2016.01.018

E－mail:1241570297@qq．com

2015－05－26)