利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验

程雪娇，王 建，焦晓军，余贵菊，于小婷，王 猛

（天津市中升挑战生物科技有限公司，天津 300380）

利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验

程雪娇，王 建，焦晓军，余贵菊，于小婷，王 猛

（天津市中升挑战生物科技有限公司，天津 300380）

为评估利福昔明乳房注入剂的急性毒性，采用标准的急性毒性试验方法进行了利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验。结果表明，最高组剂量达到5 000 mg/（kg·BW）时，小鼠未见不良反应，饮食活动正常，观察期内均未出现死亡，即利福昔明乳房注入剂对小鼠经口灌胃的LD50大于5000mg/（kg·BW），属于实际无毒级物质。

利福昔明；乳房注入剂；急性毒性；小白鼠

利福昔明（rifaximin）是利福霉素的半合成衍生物，和其他利福霉素类抗生素一样，通过与细菌DNA指导的RNA聚合酶的β亚单位不可逆的结合而抑制细菌RNA的合成，防止该酶与DNA连接，阻断RNA转录，最终抑制细菌蛋白质的合成。利福昔明抗菌谱广，抗菌活性强，对多种革兰阳性菌（金黄色葡萄球菌、链球菌和棒状杆菌）、革兰阴性菌（大肠杆菌、巴氏杆菌、假单胞菌和变形杆菌等）均有高度抗菌活性［1-3］。目前，欧盟已批准利福昔明用于干乳期奶牛乳房炎和子宫内膜炎的治疗，同时规定利福昔明在牛奶中的残留标示物为原形药物，最高残留限量（MRL）为 60 μg/kg。

天津市中升挑战生物科技有限公司研制的新兽药利福昔明乳房注入剂（干乳期），可用于预防由金黄色葡萄球菌、链球菌及大肠杆菌引起的干奶期奶牛乳房炎。为了科学地评价该乳房注入剂在奶牛临床上应用的安全性，根据中华人民共和国国家标准《急性毒性试验：GB 15193.3-2003》［4］及中华人民共和国农业部公告（第1247号）颁布的《兽药急性毒性试验（LD50测定）指导原则》［5］，选用小白鼠为实验动物，通过经口灌胃给药方式进行急性毒性试验。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 实验动物：SPF级昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18～22 g，购自南方医科大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（粤）2011-0015，合格证编号：4400210001665。

1.1.2 药物：利福昔明乳房注入剂（干乳期），规格为 5.0 mL∶100 mg（以利福昔明计），批号：120810，安徽中升药业有限公司生产。

1.2 试验方法

1.2.1 预试验：利福昔明乳房注入剂（干乳期）按照0.2 mL/（10 g·BW）灌胃给药，在 24 h 内多次给予，每次间隔2～3 h，合并为1次剂量计算。采用寇氏（Korbor）法，具体参照国内相关技术规范中的急性毒性试验方法进行。预试验前对小白鼠进行7 d喂养观察，观察期内小白鼠自由饮水、采食，每日空腹称量体质量，淘汰自然死亡小白鼠。

预试验设4只小鼠，雌雄各半，拟规定最高剂量组，再按照3～5倍的倍数递减设定若干剂量组

表1 急性毒性试验预试验的分组及给药剂量

（见表1），依次进行试验，确定4/4致死剂量和0/4致死剂量。如果最高剂量组已达5 000 mg/（kg·BW），而实验动物死亡率为0/4，则将动物数增至10只，并重复2次，若实验动物均未出现死亡，则可结束整个急性毒性试验，急性毒性试验（LD50测定）结论为受试物 LD50大于 5 000 mg/（kg·BW）。

1.2.2 正式试验：经过反复预试验，确定LD0～LD100区间范围，并依之确定组间比，受试物用羧甲基纤维素钠按“1∶K系列稀释法”等容量配制各剂量组所需的受试药物溶液，正式试验每组动物数为10只，雌雄各半（见表2）。给药后观察小鼠的死亡情况以及中毒的发生、发展过程，记录中毒特点及毒作用特征，给药后连续观察7 d，若给药后第4天继续有动物死亡时，需观察至14 d，必要时延长至28 d。对试验中死亡的动物进行解剖，观察其中毒病理变化，并做详细记录。

表2 急性毒性试验正式试验的分组及给药剂量

2 结果与分析

由表3可知，受试物利福昔明乳房注入剂经口灌胃给药后，最高剂量达到 5 000 mg/（kg·BW），该剂量组小白鼠未见不良反应，饮食活动正常，观察期内均未出现死亡。结果表明，利福昔明乳房注入剂对小鼠经口灌胃的 LD50大于 5 000 mg/（kg·BW）。

表3 利福昔明乳房注入剂对小鼠的急性毒性试验结果

表4 化学物急性毒性（LD50）剂量分级

3 小结

根据农业部公告（第1247号）颁布的《兽药急性毒性试验（LD50测定）指导原则》对化学物急性毒性（LD50）剂量的分级（见表 4）规定，受试物急性毒性试验的 LD50＞5 000 mg/（kg·BW）时，属于实际无毒级别，可不必再进行其他毒性试验。天津市中升挑战生物科技有限公司研制的利福昔明乳房注入剂对小白鼠经口 LD50＞5 000 mg/（kg·BW），属于实际无毒级物质。

［1］任淑萍，陈瑞玲.利福昔明的临床应用［J］.临床药物治疗杂志，2005，3（6）：38-40.

［2］GASZTONYI B，HUNYADY B.Clinical and pharmacological aspects of rifaximin，local antibiotic therapy in intestinal disorders［J］.Orv Hetil，2004，145（43）：2177-2181.

［3］SCRASCIA M，FORCILLO M，MAIMONE F，et al.Susceptibility to rifaximin of Vibrio cholerae strains from different geographical areas ［J］.J Antimicrob Chemother，2003，52（2）：303-305.

［4］中华人民共和国卫生部.急性毒性试验：GB 15193.3-2003［S］.北京：中国标准出版社，2003.

［5］农业部兽药评审中心.兽药注册资料汇编［G］.北京：农业部兽药评审中心，2009.

Acute Toxicity Test of Intramammary Infusion of Rifaximin on Mice

CHENG Xue-jiao，WANG Jian，JIAO Xiao-jun，YU Gui-ju，YU Xiao-ting，WANG Meng
（Tianjin Speerise Challenge Biotechnology Co.，Ltd，Tianjin 300380，China）

The present study assessed the acute toxicity of intramammary infusion of rifaximin on mice by using standard method.The results revealed that the mice

the highest dosage of 5 000 mg/（kg·BW）of rifaximin had no adverse reactions and their dietary behavior was normal.No deaths occurred during the observation period in the highest dosage group.Therefore,it is concluded that the LD50of intramammary infusion of rifaximin by intragastric administration was higher than 5 000 mg/（kg·BW）,

indicating that it is an actually non-toxic level substance.

rifaximin；intramammary infusion；acute toxicity；mice

S859.83

A文章顺序编号：1672-5190（2016）05-0049-02

2016-05-04

程雪娇（1981—），女，中级制药工程师，硕士，主要从事兽药的研发及申报工作。

焦晓军（1984—），男，中级制药工程师，硕士，主要从事新兽药研制与评价工作。

（责任编辑：赵俊利）