清亮饮对兔玻璃体积血中IL-6、TNF-α表达的影响

高晓娟，朱宁云，回世洋

（1.辽宁中医药大学2013级硕士研究生，辽宁 沈阳 110032；2.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）

清亮饮对兔玻璃体积血中IL-6、TNF-α表达的影响

高晓娟1，朱宁云2，回世洋2

（1.辽宁中医药大学2013级硕士研究生，辽宁 沈阳 110032；2.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）

目的：观察清亮饮对兔玻璃体积血中IL-6、TNF-α表达的影响.方法：将40只实验兔随机分为4组，A组10只为空白对照组，其余30只成功制造玻璃体积血模型后随机分成3组各10只，B组为模型组，C组为中药（清亮饮）组，D组为西药（安妥碘）组。成功造模后于给药4周及8周分别行玻璃体积血分级，各组治疗8周后分别检测玻璃体TNF-α、IL-6含量。结果：给药8周后 C、D两组玻璃体积血较前明显减轻（P＜0.05），和A、B组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；B、 C、D三组中TNF-α、IL-6含量较A组明显升高（P＜0.05），C组TNF-α、IL-6含量低于B、D组，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：清亮饮可促进兔玻璃体积血中IL-6、TNF-α的吸收，对玻璃体积血后的视网膜具有保护作用。

玻璃体积血；兔模型；清亮饮；白介素-6 ；肿瘤坏死因子-α

玻璃体积血（vitreous hemorrhage）是眼外伤或多种视网膜血管性疾病的常见并发症，因玻璃体内无血管，代谢缓慢，积血后很难吸收，后期可表现为视网膜表面和玻璃体内膜形成及过度增殖和纤维化， 导致增生性玻璃体视网膜病变 （proliferative vitreoretinopa-thy， PVR）等严重并发症［1-2］。目前主要用玻璃体切割、抗凝、止血、超声波等方法治疗，效果并不理想，多年来我们根据中医辨证论治及临床经验，自拟中药方清亮饮治疗玻璃体积血取得了满意疗效。我们通过检测兔玻璃体积血中IL-6、TNF-α含量，观察清亮饮对促进玻璃体积血的吸收作用及机制，总结如下。

1　材料与方法

1.1材料

实验动物。健康纯种日本大耳白兔40只，由沈阳药科大学实验动物中心提供，兔龄2～3个月，雌雄各半，体质量1.5～2kg，适应性喂养1周，湿度适宜，动物分笼开架，保持通风，自由摄食饮水。经检眼镜、裂隙灯显微镜检查眼前段及眼底均无明显异常。

药物。清亮饮组成为熟地、山药、玄参、天花粉、党参、黄芪、茺蔚子、白茅根，每剂药煎好后浓缩至100mL放冰箱冷藏备用，药物由辽宁省中医药大学附属医院制剂科经水煮醇沉浓缩为1.0g/mL。氯霉素滴眼液（8mL∶20mg），普罗碘铵注射液（安妥碘） 1支0.4g/2mL，复方托吡卡胺滴眼液（美多丽）1支10mL，1%丁卡因、氯胺酮、戊巴比妥钠溶液等。

1.2方法

动物造模与分组。检眼镜、裂隙灯显微镜检查眼前段及眼底均无明显异常。造模前给予0.25%氯霉素滴眼液消炎3天，并将40只兔编号，随机抽取10只为A组即空白对照组。其余30只造模：造模前生理盐水清洁结膜囊，氯胺酮1mL/kg肌注麻醉或30g/L戊巴比妥钠溶液（30mg/kg）作静脉麻醉，美多丽充分散瞳，1%丁卡因滴眼行结膜表面麻醉，局部消毒后用1mL一次性注射器从兔耳缘静脉取血0.5mL备用；迅速于距角巩膜缘3mm处，经瞳孔直视下用7号针向着球心垂直刺入玻璃体腔，抽取玻璃体0.2mL后再注入自体血0.2mL，立即拔出针头，轻压针孔1min，点氯霉素滴眼液2滴。造模后3天继续氯霉素滴眼液、美多丽滴眼液滴眼。24h后观察眼底，对玻璃体积血进行分级，确认造模成功后再随机分成3组，分别为B、C、D组。B组为模型组，C组为中药（清亮饮）组，D组为西药（安妥碘）组。

给药方法。A、B组不给药。C、D组造模24h后开始给药，C组予清亮饮，按6mL/kg灌胃，每日2次。D组予安妥碘肌肉注射，每次0.125g，每日1次。

指标检测。各组治疗4周后观察眼底行玻璃体积血分级，先以1% 阿托品滴眼散瞳，然后用检眼镜检查并按Forrester 五级分类法记录积血变化［3］。Ⅰ级为玻璃体完全不透明；Ⅱ级为有轻微光反射，但观察不清眼底；Ⅲ级为可见部分眼底；Ⅳ级为玻璃体中央透明，周围见少量不透明物，大部分眼底清楚；Ⅴ级为清晰玻璃体，眼底清晰可见。治疗8周后，观察眼底行玻璃体积血分级后收集玻璃体及眼球壁标本， 玻璃体积血分级方法同上。从玻璃体组织中检测TNF-α、IL-6含量。抽出玻璃体液0.5mL予5000r/min离心5min后，立即贮存于-70℃待统一检测，TNF-α、IL-6采用放射免疫分析方法。

统计学分析。采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数加减标准差（）表示，多组间比较用单因素方差分析，组间两两比较用最小显著差（LSD）法，等级资料采用秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

各组给药4周玻璃体积血程度分级比较见表1。

表1　各组给药4周玻璃体积血程度分级比较

各组给药8周玻璃体积血程度分级比较见表2。

表2　各组给药8周玻璃体积血程度分级比较

各组给药8周TNF-α、IL-6含量比较见表3

表3　各组给药8周TNF-α、IL-6比较（）

表3　各组给药8周TNF-α、IL-6比较（）

注：与空白组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05；与西药组比较，cP＜0.05。

组别眼数T N F -α（n g / m L） I L -6（p g / m L）A（空白组）2 0 1 . 6 0 1 ± 0 . 4 9 1 1 6 0 . 0 3 ± 3 2 . 9 7 B（模型组）2 0 2 . 8 6 6 ± 0 . 4 2 2a2 9 0 . 6 9 ± 3 1 . 0 5aC（中药组）2 0 2 . 2 6 3 ± 0 . 5 5 9abc2 0 0 . 4 3 ± 3 4 . 0 8abcD（西药组）2 0 2 . 4 0 5 ± 0 . 4 7 4ab2 5 6 . 3 1 ± 4 1 . 4 5

由上表所示，B、C、D各组TNF-α、IL-6含量均较A组增高（P＜0.01），说明玻璃体积血可导致炎症介质TNF-α、IL-6的大量释放，从而促使PVR的发生；C、D两组TNF-α、IL-6含量均低于B组（P＜0.05），说明清亮饮及安妥碘均可促进炎症介质TNF-α、IL-6的吸收，从而促进玻璃体积血吸收而保护视网膜；C、D两组间TNF-α、IL-6含量比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中C组TNF-α、IL-6降低更显著，说明清亮饮组对促进兔玻璃体积血中TNF-α、IL-6的吸收优于安妥碘组。将TNF-α、IL-6两组数据行Pearson相关性分析，得出r=0.599，P＜0.05，提示玻璃体积血与炎症介质TNF-α、IL-6的释放呈正相关，二者协同促进玻璃体积血中纤维增殖、机化，从而引发PVR。

3　讨论

玻璃体积血是一种严重的玻璃体病变，病因复杂［4］，多因外伤和眼底血管病变引起，也可因全身疾病引起，大量的玻璃体积血可影响眼底的观察，如果积血长时间不吸收，会引起纤维增殖、机化膜形成，常可导致PVR的发生而致盲［5］，其中炎症介质TNF-α、IL-6在PVR的发生、发展及演变中起重要作用［6］，Karthikeyan等也研究发现IL-6、TNF-α 等细胞因子在PVR发生的各时期均有不同程度的高表达，其与PVR的发生有相关性［7］。玻璃体内TNF-α在PVR的启动和调控中起重要的作用，且IL-6可诱导PVR发生，在PVR初期起着免疫和炎症反应的放大作用。实验结果显示B、C、D各组兔模型在8周后玻璃体组织中TNF-α、IL-6的含量均明显高于空白组，故促进兔玻璃体积血中炎症介质TNF-α、IL-6的吸收对玻璃体积血的治疗及预后至关重要，清亮饮和安妥碘均可促进TNF-α、IL-6的吸收，且清亮饮组促进此二者吸收作用较安妥碘组显著（P＜0.05），说明清亮饮促进玻璃体积血吸收及防治PVR发生效果显著。

玻璃体积血在中医古籍中早有认识，在古典医有“暴盲”、“云雾移睛”、“血灌瞳仁”、“目血灌瞳仁”、“血贯瞳神”、“血灌瞳人外障”等不同名称。《圣济总录》谓：“目属肝，肝受血而能视，则目之瞻视，必资血。苟因物损伤，致血脉散乱，则败血侵睛，灌注瞳仁，害于瞻视，不早治或致丧明，故谓之血灌瞳仁。”《证治准绳·血灌瞳神证》谓：”视瞳神不见其黑莹，但见一点鲜红，甚则紫浊色也，病至此亦甚危且急矣。”《银海精微》谓：“血灌瞳人者，因毒血灌入金井瞳人水内也，犹如水流入井中之状，清浊相混，时痛涩，红光满目，视物蒙蒙，如隔绢看物，若云雾中然。”玻璃体积血的治疗，一要行，即活血利水祛瘀散结等法，是目前临床上广泛应用的治疗方法；二要养，即益气滋阴养血等法，此法在临床应用比较局限，常因个人经验不同斟酌应用。清亮饮行而不伤气，清热祛瘀而不伤正。实验充分证实清亮饮治疗玻璃体积血效果显著。

［1］ 陶然，柯根杰.玻璃体积血成因分析及分期治疗［J］.实用防 盲技术，2012，7（1）： 33-37.

［2］ 王建民，马景学，叶存喜，等.非外伤性玻璃体大量积血的病因分析［J］.中国实用眼科杂志，2006（24）：100-103.

［3］ Forrester J V， Edger W， Millar W，et al. Enhancement of itreous clotly-sis by urokinase： made of action［J］. Exp Eye es，1982，34：895.

［4］ 罗文彬，游志鹏.玻璃体积血1263例病因分析［J］.中国现代医学杂志，2014，22（4）： 66-70.

［5］ Goff MJ， Mcdonald HR，Johnson RN， et al. Causes and treatm ent of vitreous hemorrhage［J］. Compr Ophthalmol Update，2006，7（3）：97-111.

［6］ 刘蓓，郑曰忠，赵秉水，等.增生性玻璃体视网膜病变眼玻璃体液白细胞介素和肿瘤坏死因子的研究［J］. 中华眼底病杂志，2005，12（5）：327-328.

［7］ Karthikeyan B，Kalishwaralal K，Sheikpranbabu S，et al. Gold nanoparticles downregulate VEGF-and IL-1beta-induced cell proliferation through Src kinase in retinal pigment epithelial cells［J］.Exp Eye Res，2010，91（5）：769-778.

Objective：To observe the effect of Qingliangyin on the expression of IL-6， TNF-α of vitreous hemorrhage in rabbits. Method： 40 rabbits were randomly divided into 4 groups. 10 rabbits were group A （blank control group） while the remaining 30 rabbits after the successful production of vitreous hemorrhage were randomly divided into 3 groups， 10 rabbits in each group，group B the model group， group C Chinese medicine group（Qingliangyin group）， group D western medicine group（Prolonium iodide group）. It was detected in each group respectively after 8 weeks treatment that the content of TNF-α， IL-6 in vitreous. Result：After 8 weeks of administration， vitreous hemorrhage was significantly reduced in group C and group D compared with that of pretreatment（P＜0.05）and compared with that in group A and group B （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in group B，group C and group D was significantly higher than that in group A （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in the group C was less than that in group B and group D （P＜0.05）. The difference among groups was statistically significant （P＜0.05）. CONCLUSION： Qingliangyin could promote the absorption of IL-6，TNF-αin vitreous hemorrhage and has protective effect on retina of vitreous hemorrhage of rabbits.

Vitreous hemorrhage；Qingliangyin；Interleukin- 6 （ IL- 6） ，Tumor necrosis factor-α

R289.5

B

1004-2814（2016）02-0105-02

2015-08-15

沈阳市科技局，沈阳市科技创新专项资金-应用基础研究专项项目（F13-316-1-50）

朱宁云