利用HPLC法建立五味子乙素的检测方法及其方法学考察

王立英 黎婉滢 林田夫 吴伟华 范干灵 张业敏

摘要：通过高效液相色谱法（HPLC法）建立五味子乙素的检测方法及其方法学考察。利用高效液相色谱仪对五味子乙素进行测定，采用INERTSLLODS_SP C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（77：23）；流速为1ml/min；检测波长：254nm；柱温：30℃。五味子乙素在6.72～15.12μg/ml范围内，峰面积与进样量呈良好的线性关系，回归方程为y=29870x-9316.2，R2=0.9992。五味子乙素的平均回收率为92.9%。RSD=4.54%。本方法操作简单，准确可靠，结果稳定，重复性好，可用来测定五味子乙素的含量。

关键词：HPLC法；五味子乙素；检测方法；方法学

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2016）38-0055-02

引言：

五味子为木兰科植物五味子的干燥成熟果实，习称“北五味子”，具有滋补强壮、增强非特异性免疫力、抗菌消炎及加强中枢神经系统兴奋过程等主要功效。在我国，五味子作为名贵中草药，一直都在广泛应用。五味子中含有多种成分，包括木脂素、三萜、倍半萜、挥发油、多糖、黄酮、有机酸及氨基酸等，对中枢神经系统有镇静、催眠、抗惊厥等药理作用；对心血管系统具有保护心脏的作用。木脂素成分被认为是五味子中最主要的药理活性成分。五味子乙素作为五味子木脂素中的主要活性成分之一，伴随着对木脂素类成分的研究与应用，现国内外已发现五味子乙素具有抗肿瘤、抗氧化、保肝等药理作用，广泛应用于保健品、护肤品等日常用品上，但中国药典中对五味子乙素的含量测定方法仍未有系统性的归纳，使得市面上含五味子乙素的产品，其含量参差不齐。

就我国现状对五味子乙素质量技术监管体制不完善的情况，建立及修改各项检测方法是检测五味子乙素含量时必不可少的条件。本实验旨在通过HPLC法对五味子乙素建立测定方法及其方法学考察，归纳总结出最为准确、稳定、简便及适用性最广的检测方案，为五味子乙素含量测定提供可靠依据，以及对其检测提供相关的参考指标。

一、实验仪器与材料

（一）主要实验仪器

电子天平；循环水式多用真空泵；超声波清洗器；高效液相色谱仪。

（二）主要实验材料

五味子乙素标准品；甲醇；纯净水

二、方法

（一）色谱条件

INERTSLLODS_SP C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（77：23）；流速为1ml/min；检测波长：254nm；柱温：30℃。

（二）标准品溶液的配制

精密称取五味子乙素标准品7.0mg，用少量甲醇溶解后转移至50mL容量瓶中，继续加甲醇定容至刻度，摇匀，即得140μg/ml的溶液作为标准储备液①；精密量取标准储备液①15.0mL，置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得21μg/ml的溶液作为标准储备液②；精密吸取标准储备液①15ml，置于50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得42μg/ml的溶液作为标准储备液③。标准储备液均放置4℃的冰箱，备用。

（三）线性关系的考察

依次由五味子乙素标准储备液②中精密量取溶液，取样量见表1（五味子乙素工作曲线各溶液加入量），用醇甲定容至25ml，0.45μ尼龙滤过。采用高效液相色谱仪在色谱条件中测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立五味子乙素标准曲线，得出线性回归方程。

（四）方法学考察

1.精密度试验。精密量取五味子标准储备液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μ尼龙滤过。按上述色谱条件连续进样6次，分析色谱峰面积，测得五味子乙素浓度，计算RSD值。

2.重现性试验。精密量取五味子标准储备液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，平行制备6份，0.45μ尼龙滤过。按上述色谱条件进样6次，分析色谱峰面积，测得五味子乙素浓度，计算RSD值。

3.稳定性试验。精密量取五味子标准储备液① lml，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μ尼龙滤过。按上述色谱条件操作，分别在0、1、2、3、4、5h进样检测，分析色谱峰面积，测得五味子乙素浓度，计算RSD值。

4.加样回收试验。精密量取五味子乙素标准储备液③9mL，平均分成9份，置于10mL容量瓶中，再加入该含量的80%、100%和120%的五味子乙素标准储备液③，加甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μ尼龙滤过。按上述色谱条件进样，分析色谱峰面积，测得五味子乙素浓度，计算RSD值。

三、结果与讨论

（一）五味子乙素线性关系

根据表1测得的色谱峰面积，与其进样量呈良好的线性关系，可建立五味子乙素回归方程为y=29870x-9316.2，R2=0.9992。表明五味子乙素在6.72～15.12μg/ml线性良好。结果见图1。

由表5试验结果得RSD为4.54%，表明该方法加样回收率良好。

参考文献：

[1]王文燕，陈建光.五味子的药理作用及开发研究[J].北华大学学报：自然科学版，2007，8（2）：128-133.

[2]潘瑶，林剑霞，李妍.五味子乙素的药理作用研究概况[J].吉林医药学院学报，2015，36（1）：60-62.