水通道蛋白4、5、血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中的表达及意义

郝兴亮

(山东东营胜利油田中心医院 呼吸内科，山东　东营　257034)



水通道蛋白4、5、血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中的表达及意义

郝兴亮

(山东东营胜利油田中心医院 呼吸内科，山东东营257034)

目的探讨水通道蛋白(AQP)4、AQP5、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达变化及临床意义。方法选取2013年1月至2015年6月该院收治的NSCLC患者80例，用免疫组化法检测其活检的肺组织，探究并分析AQP4、AQP5、VEGF与NSCLC病理类型之间的关系。结果各T分期和临床分期的患者AQP4、5表达无明显差异(P>0.05)，各N分期患者AQP4、5的表达阳性率差异显著(P<0.05)。复发或转移患者的AQP4、5表达阳性率与未复发或转移患者相比差异明显(P<0.05)。各T分期患者VEGF表达无明显差异(P>0.05)，各N分期、临床分期患者VEGF的表达阳性率差异明显(P<0.05)，复发或转移患者的VEGF表达阳性率与未复发或转移患者比较差异明显(P<0.05)。结论NSCLC患者存在AQP4、AQP5、VEGF水平异常，而其表达可能与NSCLC病理类型和侵袭性有关。

非小细胞肺癌；水通道蛋白；血管内皮生长因子

非小细胞癌(NSCLC)主要以手术切除为主，对于远处转移的患者，可以在放化疗后进行手术治疗。水通道蛋白(AQP)是位于细胞膜上的蛋白质，主要负责调节细胞内外水平衡。有研究〔1〕表明，AQP在肿瘤的转移以及扩散等侵袭过程中表达增强，可能与肿瘤的侵袭能力有关。血管内皮生长因子(VEGF)具有较强的诱导血管内皮生长的作用，而肿瘤的生长需要丰富的血运来提供足够的营养，因此肿瘤患者往往伴随着VEGF水平的升高。目前关于AQP1与肿瘤的相关性研究较多，而国内尚缺少关于AQP4、5及VEGF与NSCLC的相关性的研究，本文旨在探究AQP4、5及VEGF与NSCLC的关系。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2013年1月至2015年6月我院收治的NSCLC患者80例为观察组，男50例，女30例，年龄46～84〔平均(58.6±5.6)〕岁，病程1～3年，平均(1.6±0.3)年，腺癌40例、鳞癌30例、腺鳞癌3例、大细胞癌7例。所有患者均于我院确诊为NSCLC，且经过术后病理确诊。所有标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，苏木素-伊红(HE)染色后经病理学检查证实。所有病例均无术前化疗、放疗治疗史。T分期：T1、T2、T3、T4分别为24、36、8、12例；N分期：N0、N1、N2分期分别为28、32、20例；临床分期(UICC1997年)：Ⅰ期22例、Ⅱ期30例、Ⅲ期26例、Ⅳ期2例，复发或转移50例。以上患者性别、年龄、病程均无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法用免疫组化法检测其活检的肺组织，探究并分析AQP4、AQP5、VEGF与NSCLC病理类型之间的关系。检测方法：AQP4、5以及VEGF的表达采用免疫组织化学链霉辛合素-生物素复合物(SABC)法，兔抗人AQP4、AQP5、VEGF多克隆抗体、即用型SABC免疫组织化学染色试剂盒、抗原修复液和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自上海岚派生物技术有限公司，所有操作均由检验科人员严格按照试剂盒说明书进行操作。以磷酸缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照，以已知AQP4、AQP5强阳性表达的正常肾组织和VEGF强阳性表达的人胎盘组织标本分别作为阳性对照。

1.3评价标准肿瘤细胞内有棕黄色颗粒为阳性〔2〕。高倍镜下(×400)每张切片随机选择5个视野，计数1 000个细胞。AQP4、AQP5阳性结果判断：阳性细胞<5%为表达阴性(包括无染色或仅血管内皮着色)，阳性细胞≥5%为表达阳性。VEGF阳性结果判断：阳性细胞数<5%为阴性，5%～25%为弱阳性(+)，26%～50%为中等阳性()，>50%为强阳性()。

1.4统计学方法应用SPSS21.0软件进行t检验、χ2检验。

2　结　果

各T分期和临床分期患者AQP4、5表达无明显差异(P>0.05)，各N分期差异明显(P<0.05)。复发或转移患者的AQP4、5表达阳性率与未复发或转移患者比较差异明显(P<0.05)。见表1。各T分期患者VEGF表达无明显差异(P>0.05)，各N分期、临床分期患者VEGF的表达阳性率差异明显(P<0.05)。复发或转移患者的VEGF表达阳性率与未复发或转移患者比较差异明显(P<0.05)。见表1。

表1　AQP4、5、VEGF的表达与NSCLC病理结果相关性〔n(%)〕

3　讨　论

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，多数肺癌起源于支气管黏膜上皮，亦称支气管肺癌〔3〕。近年来，随着空气质量的下降以及吸烟人数的上升，肺癌发病率明显上升，目前发病率已经居男性肿瘤之首。NSCLC是肺癌的主要类型，与小细胞肺癌不同，NSCLC对放化疗效果并不理想，主要以手术治疗为主，同时由于其临床分型较多，治疗方案也较小细胞肺癌多〔4〕。AQP是存在于细胞膜上特殊跨膜蛋白质，主要负责水分子的快速转运，从而维持细胞内外水分平衡。最初人们确定AQP的功能是在研究其调节细胞内外的渗透作用时发现的。继AQP1被发现并证明与肿瘤的侵袭有关之后，AQP的研究便逐渐成为热门〔5〕。由于肿瘤生长的需要，细胞对于物质的需求量大大增加，包括肿瘤细胞的增殖、分裂、侵袭、转移过程中对营养物质的需求，其中水分是最重要的物质之一，营养物质的运输也离不开水分的转运。研究〔6〕表明，癌细胞对于水分的需求是正常细胞的2倍以上，可见水分运输对于癌细胞发生发展的重要性。目前认为AQP家族与肿瘤的侵袭能力有关。

AQP4和AQP5属于AQP家族，具有和AQP1相似的功能。林琳等〔7〕采用免疫组化法对大肠癌患者癌组织和周围正常组织进行研究，发现AQP4、5在癌组织的表达明显高于正常组织，而采用干预肿瘤组织上的AQP表达的方法则会引起肿瘤组织的凋亡，说明AQP与肿瘤的发生发展有一定的联系。文中结果提示AQP4、AQP5与NSCLC的T分期(即肿瘤大小)和临床分期无明显相关性，而与N分期(肿瘤的淋巴转移)和复发或者转移情况明显相关，可能与表达增强的AQP有助于增加肿瘤的侵袭性有关，与Yu等〔8〕研究结果一致。VEGF是目前已知最强的血管内皮细胞刺激因子，它能够刺激血管内皮细胞增生，从而形成新的毛细血管。临床数据表明，VEGF在正常人体内的表达水平并不强，而在肿瘤组织等增殖迅速的组织表达显著增强。在VEGF的刺激下，肿瘤组织获得丰富的血供，这在一定程度上增加了肿瘤的侵袭能力。因此，部分药物通过降低VEGF的表达来降低肿瘤的生长速度，并取得了一定的成果。但目前关于VEGF与NSCLC的研究尚少。本研究提示VEGF与肿瘤T分期(肿瘤大小)无明显相关性，而与肿瘤N分期(淋巴转移)、临床分期和复发/转移情况明显相关，可能与血管内皮因子刺激下肿瘤组织新生血管的迅速生长有关，与Tang等〔9〕研究结果一致。总之NSCLC患者存在AQP4、AQP5、VEGF水平异常，而其表达可能与NSCLC病理类型和侵袭性有关。

1邱智泉.AQP、CCL20及NDRG2在原发性肝细胞癌伴胆管癌栓中的表达意义及功能研究〔D〕.上海：第二军医大学,2012.

2Deacon K,Onion D,Kumari R,etal.Elevated SP-1 transcription factor expression and activity drives basal and hypoxia-induced vascular endothelial growth factor(VEGF)expression in non-small cell lung cancer〔J〕.J Biol Chem,2012;287(47):39967-81.

3刘魁,彭文鸿.水通道蛋白-5与肺疾病相关研究进展〔J〕.临床肺科杂志,2012;17(11):2064-6.

4金晶星.七氟烷对单肺通气肺损伤的保护作用及其机制研究〔D〕.合肥：安徽医科大学,2012.

5Song N,Liu B,Wu J,etal.Vascular endothelial growth factor(VEGF)-2578C/A and-460C/T gene polymorphisms and lung cancer risk:a meta-analysis involving 11 case-control studies〔J〕.Tumour Biol,2014;35(1):859-70.

6马俊美,白晓敏,张素玲，等.肺癌患者血清中血管内皮生长因子的表达及其临床意义〔J〕.现代肿瘤医学,2015;23(14):1980-2.

7林琳,哈敏文.VEGF、PTN在肺癌患者外周血及胸腔积液中表达及其意义〔J〕.科技通报,2012;28(2):27-8.

8Yu S,Sun J,Zhang J,etal.Aberrant expression and association of VEGF and Dll4/notch pathway molecules under hypoxia in patients with lung cancer〔J〕.Histol Histopathol,2013;28(2):277-84.

9Tang XP,Li J,Yu LC,etal.Clinical significance of survivin and VEGF mRNA detection in the cell fraction of the peripheral blood in non-small cell lung cancer patients before and after surgery〔J〕.Lung Cancer,2013;81(2):273-9.

〔2015-12-11修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

郝兴亮(1980-)，男，硕士，主治医师，主要从事肺部肿瘤研究。

R73

A

1005-9202(2016)15-3729-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.055