三七总皂苷对糖尿病大鼠肾脏相关炎症因子的影响*

王卫娜

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)



·实验研究·

三七总皂苷对糖尿病大鼠肾脏相关炎症因子的影响*

王卫娜

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473000)

目的：以血栓通胶囊为研究对象，探讨三七总皂苷对糖尿病大鼠肾组织相关炎症因子的影响。方法：将SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、三七总皂苷组，每组10只。三七总皂苷组给以100 μL/(g·d)灌胃，正常、模型对照组灌等体积的生理盐水，共4周。检测一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、内生肌酐清除率(Ccr)、血糖(BS)、尿微量白蛋白(M-ALB)、肾脏肥大指数、丙二醛(MDA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)。结果：与正常对照组对比，模型对照组大鼠NO、NOS、BS、Ccr、M-ALB、肾脏肥大指数升高，NO/ET降低，差别有统计学意义(P<0．05)。与模型对照组对比，三七总皂苷组大鼠NO、NOS、BS、Ccr、M-ALB、MDA 、肾脏肥大指数活性降低，NO/ET增高，差别有统计学意义(P<0.05)。结论：三七总皂苷能够改善糖尿病肾病模型大鼠肾脏病理变化，抑制肾脏TGF-β1,升高NO/ET含量，从而对肾脏进行保护。

糖尿病肾病；三七总皂苷； 氧化应激；动物；大鼠

糖尿病肾病(diabeticn ephropathy, DN)是1型糖尿病和2型糖尿病的主要慢性并发症之一，已经成为导致慢性肾功能衰竭的最常见原因之一，发病与肾脏组织细胞中的自由基或氧化应激水平异常可能相关[1]。目前，针对糖尿病肾病缺乏有效的治疗手段。三七总皂苷是三七的主要活性成分，有化瘀止血、活血、补虚强壮的功效，制剂有血栓通注射液、血栓通胶囊、三七总苷片和三七总苷胶囊。本研究以血栓通胶囊为研究对象，观察了其对糖尿病大鼠肾脏一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、内生肌酐清除率(Ccr)、血糖(BS)、尿微量白蛋白(M-ALB)、肾脏肥大指数、丙二醛(MDA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响，探讨三七总皂苷防治DN的可能作用机制。

1　材料与方法

1.1动物

选择3月龄SD大鼠，清洁级，雄性，35只，体质量150～200 g，由山东鲁抗医药股份有限公司质监中心实验动物室提供，质量合格证号为SCXK鲁20130001。大鼠饲养于清洁级动物室，室温21～25 ℃。

1.2药品与试剂

血栓通胶囊，每粒0.18 g,含三七总皂苷100 mg，哈尔滨珍宝制药有限公司产品，批号20130511，临用前以生理盐水配制成10 g/L的溶液；链脲佐菌素，美国Sigma公司产品，批号20120907。尿蛋白测定试剂盒(批号20130719)、血糖测定试剂盒(批号20121218)，均购自南京建成生物工程公司。

1.3模型的建立、分组与给药方法

造模：一次性腹腔注射链脲佐菌素60 μg/g，血糖≥16.65 mmol/L为糖尿病大鼠。将大鼠按数字随机表法分为正常对照组、模型对照组、三七总皂苷组，每组10只。造模成功后1周开始，三七总皂苷组以三七总皂苷100 μg/(g·d)灌胃给药，正常对照组、模型对照组给予等体积生理盐水，1 d 1次，连用4周。

1.4检测指标

用药4周后，称量体质量，以质量分数10 g/L 戊巴比妥钠按 5 μL/g体质量腹腔注射麻醉，分别取血、尿和两侧肾脏以备用。

1.4.1NO、ET、Ccr、BS和M-ALB

分离血清，放免法测定NO、ET的含量。采用自动生化仪测定血、尿肌酐，计算Ccr。用氧化酶法测定BS。以酶联免疫法测定M-ALB。

1.4.2肾脏肥大指数、MDA和TGF-β1

取大鼠肾组织，记录肾质量，计算肾脏肥大指数。比色法测定肾皮质匀浆MDA。取—部分肾脏组织经多聚甲醛固定，切片做HE染色，免疫组化法测定TGF-β1的表达。

1.5统计学方法

2　结　果

2.1各组大鼠NO/ET 、NOS、NO和肾脏肥大指数对比

与正常对照组对比，模型对照组大鼠NO水平、NOS活性、肾脏肥大指数升高(P<0.01)，NO/ET降低(P<0.05)，差别均有统计学意义。与模型对照组对比，三七总皂苷组大鼠NO水平、NOS、肾脏肥大指数活性降低，NO/ET 升高，差别有统计学意义(P<0.01)。见表1。

组 别动物数NO/ET/(ng·L-1)NOS/(ng·L-1)NO/(μmol·L-1)肾指数/10-3正常对照组100.10±0.010.10±0.010.02±0.016.12±0.33模型对照组100.08±0.02*0.39±0.02**1.81±0.12**8.67±0.58**三七总皂苷组100.18±0.03##0.19±0.04##0.04±0.01##6.98±0.67##

注：与正常对照组对比，*P<0.05,**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01。

2.2各组大鼠BS、Ccr、M-ALB和 MDA对比

与正常对照组对比，模型对照组大鼠MDA、BS、Ccr和M-ALB增高，差别有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组对比，三七总皂苷组大鼠MDA、BS、Ccr和M-ALB降低，差别有统计学意义(P<0.01)。见表2。

组 别动物数BS/(mmol·L-1)Ccr/(mL·min-1)M-ALB/(μg·L-1)MDA/(μmol·L-1)正常对照组107.8±0.60.10±0.010.02±0.017.8±0.6模型对照组1025.6±1.4**0.39±0.02**1.81±0.12**25.6±1.4**三七总皂苷组1011.3±0.9##0.19±0.04##0.04±0.01##11.3±0.9##

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01。

2.3各组大鼠肾小球TGF-β表达对比

与正常对照组对比，模型对照组大鼠TGF-β1表达增多，差别有统计学意义(P<0.01)。与模型对照组对比，三七总皂苷组大鼠TGF-β1表达降低，差别有统计学意义(P<0.01)。 见表3。

表3　各组大鼠肾小球TGF-β表达对比　　±s

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01。

3　讨　论

糖尿病肾病是糖尿病的严重微血管并发症之一。既往研究已揭示高糖、TGF-β等与糖尿病肾脏肥大形成可能有关[1]。机体在高血糖及糖尿病肾病时产生的过量ROS激活转录因子，可引起糖尿病肾脏组织损伤以及引起细胞死亡[2]。本研究结果显示，糖尿病大鼠肾脏肾组织MDA、Ccr，M-ALB含量升高，TGF-β1表达明显增多，说明这些因素参与了糖尿病肾病的病理过程;以三七总皂苷治疗后，肾组织MDA、Ccr，M-ALB含量降低，TGF-β1表达明显减少，进而可以说三七总皂苷可能对糖尿病肾病的治疗起着一定的作用。

肾小球高滤过和高功能是糖尿病早期的病理生理状态。NO影响肾脏滤过效率及肾皮质血流量，是具有舒血管作用的活性因子。糖尿病时NO增多，促进炎症产生与发展[3-4]，对肾细胞产生毒性作用[5]。可见，NO作为血管活性物质参与了肾小球高灌注高滤过的发生发展和肾细胞的损伤。本实验结果显示，模型对照组大鼠NO水平、NOS活性、肾脏肥大指数显著升高，NO/ET显著降低；三七总皂苷治疗后大鼠NO水平、NOS、肾脏肥大指数活性显著降低，NO/ET也显著降低。提示了三七总皂苷可以通过影响NO水平、NOS活性、NO/ET的变化，进而改变肾小球的高滤过和高功能，改善肾脏的功能。

[1]钱军.黄平绞股蓝皂苷对早期糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β1蛋白含量影响的研究[J].中国中医药科技,2007,14(4)：263-264.

[2]王凌云，柳洁.氧化应激在糖尿病肾病中的意义及吡格列酮干预研究[J].山西医药杂志：上半月，2008，37(4)：316.

[3]陈俊红，陈俊荣，牟兆新，等.酒大黄对动脉粥样硬化兔血脂和NO及主动脉iNOS表达的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(6)：160.

[4]张翊玲，张旭华.被动吸烟对大鼠肺组织、肺泡灌洗液、血清中NO及NOS的影响[J].广东医学，2011，32(3)：296.

[5]侯亚利，张玉平，雷慧，等.益母草注射液减少DIC大鼠多个组织器官一氧化氮合成与释放的实验研究[J].时珍国医国药，2010，21(12)：103.

(编辑陶珠)

1001-6910(2016)02-0073-02

R587.2

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.02.34

南阳市科技局科技攻关项目(2012GG069)；南阳医学高等专科学校自然科学项目 (2NYYZ2004)

2015-06-30；

2015-11-17