乳腺癌患者血清中中期因子、血小板因子4以及黏蛋白1含量检测对病情评估的价值

赵丽娟，徐卫云，张晓红，张珍，张靖

（四川省绵阳市中心医院乳腺外科，四川绵阳621000）

乳腺癌患者血清中中期因子、血小板因子4以及黏蛋白1含量检测对病情评估的价值

赵丽娟，徐卫云，张晓红，张珍，张靖

（四川省绵阳市中心医院乳腺外科，四川绵阳621000）

目的分析乳腺癌患者血清中中期因子（MK）、血小板因子4（PF4）以及黏蛋白1（MUC1）含量检测对病情评估的价值。方法选取2012年11月-2015年1月在绵阳市中心医院接受治疗的乳腺癌患者178例作为观察组对象，根据病理分型不同分为非浸润性癌组32例，早期浸润性癌组50例，中晚期浸润性癌组96例。另取同期在本院接受体检的女性108例作为健康对照组。比较各组研究对象的血清MK、PF4以及MUC1含量；CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平；CEAmR NA、SurvivinmR NA、MMP-2mR NA、TIMP-2 mR NA表达等差异。进一步分析血清中MK、PF4以及MUC1含量与乳腺癌恶性生物学指标值之间的相关关系。结果乳腺癌患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量明显高于健康对照组，25-OH-D水平低于健康对照组（P<0.05）；中晚期浸润性癌组患者的血清MK、PF4、MUC1、CA153、VEGF及D-Dimer、CEA mR NA、Survivin mR NA、MMP-2 mR NA、TIMP-2 mR NA含量高于早期浸润性癌及非浸润性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸润性癌及非浸润性癌患者（P<0.05）。结论乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效准确的评估患者的病情严重程度，可以作为远期评价临床治疗效果及治疗预后的指标之一。

乳腺癌；病情评估；血清指标

乳腺癌是危害女性健康的主要恶性疾病之一，发病率在全球呈上升趋势。目前，乳腺癌的临床诊断及治疗已经获得巨大的进步，但是仍有一部分乳腺癌患者死于复发或者转移[1]。提高乳腺癌的早期诊断一直是临床研究的重点，最新的研究发现中期因子（Midkine，MK）含量、血小板因子4（platlet factor 4，PF4）、黏蛋白1（mucin 1，MUC1）均在乳腺癌患者的血清中存在异常表达，有望成为早期诊断乳腺癌的全新标志物[2]。本次研究主要分析乳腺癌患者血清中MK、PF4以及MUC1含量检测对病情评估的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2012年11月-2015年1月在绵阳市中心医院接受治疗的乳腺癌患者178例作为观察组。均经空芯针穿刺病理确诊为乳腺癌，且为原发性单侧、未接受放化疗及内分泌治疗。根据病理分型不同包括非浸润性癌组32例，早期浸润性癌组50例，中晚期浸润性癌组96例。另取同期在本院接受体检的健康女性108例作为健康对照组。观察组患者年龄40～72岁，平均（57.92±6.05）岁；对照组患者年龄38～71岁，平均（54.67±6.11）岁。两组研究对象的基线资料差异无统计学意义，P>0.05。

1.2样本处理

在采取干预措施前，抽取所有入组对象的晨起空腹外周静脉血2 ml，经1 000 r/min离心3 min（离心半径17.5 cm），静置取上层血清后放入-80℃冰箱内保存待测。

1.3检测指标

采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定入组对象的MK含量、PF4、MUC1水平。采用电化学发光免疫分析法测定血清糖类抗原153（CA153）水平，采用ELISA法测定血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、25-羟基维生素D（25-OH-D）水平，采用免疫比浊法测定D-二聚体（D-Dimer）水平。静脉血加入枸橼酸钠抗凝后，用淋巴细胞分层液分离外周血单个核细胞，加入Trizol 1 ml后，用经典方法抽提总RNA。经反转录获得cDNA及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）后，测定血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2mRNA水平。

1.4统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，用方差分析，相关性分析用Pearson检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1血清MK、PF4以及MUC1含量

乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量明显高于健康对照组（P<0.05），经LSD两两比较发现中晚期浸润性癌组患者的血清MK、PF4以及MUC1含量高于早期浸润性癌及非浸润性癌患者（P< 0.05）。见表1。

表1　各组研究对象的血清MK、PF4以及MUC1含量比较

表1　各组研究对象的血清MK、PF4以及MUC1含量比较

组别MK/（pg/ml）PF4/（ng/ml）MUC1/（u/ml）非浸润性癌组（n=32）267.39±21.67 0.25±0.0324.65±2.18早期浸润性癌组（n=50）403.27±37.88 0.31±0.0235.71±3.25中晚期浸润性癌组（n=96）672.55±58.62 0.38±0.2945.38±4.92健康对照组209.73±24.96 0.21±0.0217.95±2.17 F值9.3426.2857.481 P值0.0120.0190.015

2.2CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平

乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平明显高于健康对照组，25-OH-D水平低于健康对照组（P<0.05），经LSD两两比较发现中晚期浸润性癌组患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平高于早期浸润性癌及非浸润性癌患者，25-OH-D水平低于早期浸润性癌及非浸润性癌患者（P<0.05）。见表2。

2.3CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA表达

乳腺癌患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平明显高于健康对照组（P<0.05），经LSD两两比较发现中晚期浸润癌组患者的血清CEA mRNA、SurvivinmRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平高于早期浸润性癌及非浸润性癌患者（P<0.05）。见表3。

表2　各组研究对象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比较（±s）

表2　各组研究对象的血清CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer水平比较（±s）

组别CA153/（u/ml）VEGF/（pg/ml）25-OH-D/（nmol/L）D-Dimer/（mg/ml）非浸润性癌组（n=32）24.89±2.36152.93±11.724.72±0.38196.23±14.52早期浸润性癌组（n=50）30.61±2.86251.48±19.633.56±0.39261.06±20.55中晚期浸润性癌组（n=96）54.28±4.77382.71±29.552.71±0.23378.55±29.63健康对照组12.37±0.1998.23±6.715.93±0.49123.62±10.87 F值7.93711.2736.3819.279 P值0.0150.0110.0190.013

表3　各组研究对象的血清CEA mRNA等水平比较（±s）

表3　各组研究对象的血清CEA mRNA等水平比较（±s）

组别CEA mRNA非浸润性癌组（n=32）9.75±0.83早期浸润性癌组（n=50）13.61±1.73中晚期浸润性癌组（n=96）20.45±2.11健康对照组7.13±0.69 F值9.341 P值0.014 SurvivinmRNAMMP-2mRNATIMP-2mRNA 4.76±0.398.43±0.76156.28±12.71 5.88±0.4519.25±0.17190.33±17.52 7.93±0.6830.82±3.14218.62±19.37 3.12±0.293.27±0.39101.72±9.55 6.3849.83212.047 0.0190.0070.002

2.4相关关系

采用一元线性回归法分析血清MK、PF4以及MUC1含量与乳腺癌恶性程度指标值之间存在的相关关系。结果显示，MK、PF4以及MUC1含量与CA153、VEGF、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA水平呈正相关，与25-OHD水平呈负相关（P<0.05）。

3 讨论

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤性疾病，检测血清肿瘤标志物是判断疾病预后的良好方式，具有无创便捷等特点。中期因子（MK）在多种人类恶性肿瘤组织中均呈过度表达，已经有研究证实MK在乳腺组织中呈高表达且具有高度特异性。目前国内对于MK的研究多侧重于其在肿瘤组织中的表达，忽略了其血清学检测[3]。血小板因子4（PF4）是内源性血管新生抑制物，属于血小板特异性蛋白，可以抑制VEGF功能而发挥作用。黏蛋白1（MUC1）是分布于机体正常黏膜表面的高分子量糖蛋白，分子由肽核心及糖链组成，对正常上皮起润滑和保护作用，还有介导信号转导、免疫活化及抑制作用[4]。在乳腺肿瘤组织中MUC1可出现量与质的改变，目前认为MUC1有望成为新型肿瘤标志物用于乳腺癌的早期诊断及预后判断。本次研究中首先检测了各组患者血清中MK、PF4、MUC1的含量情况，结果显示MK、PF4、MUC1在乳腺癌患者的血清中均呈高表达，且随着肿瘤浸润程度加重其水平上升。MK、PF4、MUC1作为临床新发现的肿瘤组织特异性表达分子，在患者血清中也有显著的异常表达，使其可以成为观察患者病情进展、指导临床治疗及判断预后的有效指标。

糖类抗原153（CA153）最先发现于乳腺癌细胞中，是乳腺细胞上皮表面糖蛋白的变异体，当细胞发生癌变时可引起细胞表面糖类的变化，由癌细胞向血循环中释放，是临床乳腺癌筛查的有效指标。血管内皮细胞生长因子（VEGF）是目前已知的作用最强的促血管生成因子之一，许多肿瘤细胞均可分泌VEGF并促进肿瘤侵袭转移[5]。VEGF已经成为判断肿瘤侵袭力的常用指标，VEGF表达量高的患者多将早期发生远处转移及预后不佳。25-羟基维生素D（25-OH-D）可以通过抑制肿瘤细胞周期进展、诱导乳腺癌细胞凋亡、下调c-myc、c-fos等前癌基因提升机体的抗肿瘤能力。随着细胞内钙离子浓度上升，Bax/Bcl-2比值增大，可以进一步引起不依赖Caspase-3途径的细胞凋亡[6]。25-OH-D是检测乳腺癌恶性程度的又一敏感指标，其水平过低是乳腺癌发病的潜在促发因素。D-二聚体（D-Dimer）是交联蛋白的特异性产物，其水平增高反映机体继发性纤溶增强。最新研究表明血浆D-Dimer水平可以作为预测肿瘤发生血栓的独立因素，乳腺癌患者尤其是晚期患者常伴有凝血功能异常。早期检测乳腺癌患者的D-Dimer水平可以作为判断预后及术后复发转移的指标之一。本次研究对上述指标的血清水平均进行检测，结果显示，乳腺癌患者的血清CA153、VEGF及D-Dimer水平呈高表达，25-OH-D水平较低，且随着乳腺癌浸润程度加深这种变化趋势更为明显。这一变化与各个分子在乳腺组织细胞癌变过程中的演变过程一致，进一步提示CA153、VEGF、25-OH-D及D-Dimer在判断乳腺癌病情程度及预后方面的有效性及实用性。

CEA属于上皮组织特异性标志基因，通常作为消化道肿瘤的标志物。目前研究显示，CEA高表达于乳腺癌组织中，正常血液、骨髓、淋巴结等组织中则不表达，故CEAmRNA检测可以作为判断乳腺癌转移的方式之一。MMP-2属于基质金属蛋白酶（MMPs）家族成员，可以降解基底膜和基质、突破基质屏障并促进肿瘤的侵袭转移，主要表达于乳腺癌细胞胞质中，在正常组织及良性组织中极少表达[7]。TIMP-2是MMP-2的特异性抑制物，可以抑制肿瘤细胞的侵袭转移，以1∶1的非共价键形式与活化的MMP-2形成复合物，有效抑制MMP-2的胶原分解活性及明胶活性。在乳腺癌患者中存在MMPs与TIMPs之间的平衡失调，有研究显示乳腺癌患者中TIMP-2与MMP-2表达均高于正常组织，是由于肿瘤细胞受到肿瘤刺激后产生更多的TIMP-2，增强机体抑制原发性肿瘤生长、局部浸润转移的作用。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员，其具有肿瘤特异性，只表达于肿瘤及胚胎组织中，且与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移等关系密切[8-9]。有研究测定Survivin在乳腺癌中的表达时发现其表达阳性率高达90.2%，在紧邻正常组织中仅为23%，故Survivin成为诊断乳腺癌的有效、独立的标志物。本次研究检测上述肿瘤标志物的血清表达情况，结果显示，乳腺癌患者的血清中CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA均呈高表达，且随着肿瘤浸润程度增加其表达量上升，进一步说明其与肿瘤进展变化的紧密关系[10]。

MK、PF4以及MUC1是乳腺癌检测的新指标，CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA是判断乳腺癌进展程度、预后等的传统指标。MK、 PF4以及MUC1具有检测方便、可重复测定等优势，关于其与传统乳腺癌恶性指标间的相关性，本次研究做进一步分析，结果显示，MK、PF4、MUC1指标水平与CA153、VEGF、25-OH-D、D-Dimer、CEA mRNA、Survivin mRNA、MMP-2 mRNA及TIMP-2 mRNA等均存在直接的相关关系，提示可以通过测定MK、PF4、MUC1水平全面准确地评价乳腺癌患者的肿瘤恶性程度，判断临床治疗的有效性，对治疗结局做合理地预估，减少乳腺癌患者的血液指标检测项目但是并不降低检测准确性及有效性。

综上所述，得出以下结论：乳腺癌患者的血清MK、PF4以及MUC1含量可以有效准确地评估患者的病情严重程度，并可以作为远期评价临床治疗效果及治疗预后的指标之一，具有现实应用价值。

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（张蕾编辑）

Value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of severity of disease

Li-juan Zhao，Wei-yun Xu，Xiao-hong Zhang，Zhen Zhang，Jing Zhang
（Department of Breast Surgery，Central Hospital of Mianyang，Mianyang，Sichuan 621000，China）

Objective To analyze the value of serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients in assessment of disease condition.Methods A total of 178 breast cancer patients treated in our hospital between November 2012 and January 2015 were chosen as the subjects of observation group.According to differentpathological types，the breast cancer patients were divided into early-invasive cancer group（n=50），non-invasive cancer group（n=32）and advanced-invasive cancer group（n=96）.At the same time 108 cases of healthy women undergoing medical examination in our hospital were chosen as control group.The differences in serum MK，PF4 and MUC1 content，CA153，VEGF，25-OH-D and D-Dimer levels，and CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA，TIMP-2 mRNA expressions were compared among the groups.The correlations of serum MK，PF4 and MUC1 content with malignant breast cancer indexes were further analyzed.Results Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels of the breast cancer patients were significantly higher than those of the healthy control group，while their 25-OH-D level was lower than that of the healthy control group（P＜0.05）.Serum MK，PF4，MUC1，CA153，VEGF，D-Dimer，CEA mRNA，survivin mRNA，MMP-2 mRNA and TIMP-2 mRNA levels were significantly higher while 25-OH-D level was significantly lower in theadvanced-invasive group than in the early-invasive carcer and non-invasive cancer groups（P＜0.05）.Conclusions Serum MK，PF4 and MUC1 content of breast cancer patients can be effectively and accurately assess the severity of the disease，and can be used as long-term evaluation indicators of therapeutic effect and prognosis.

breast cancer；assessment of disease condition；serum index

R 737.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.18.012

1005-8982（2016）18-0060-04

2016-02-22