白细胞介素12基因 rs3212227多态性与甲状腺乳头状癌的关系

黄　蓉，程晓刚，金　虹，马　晶



白细胞介素12基因 rs3212227多态性与甲状腺乳头状癌的关系

黄蓉1，程晓刚2，金虹2，马晶3

目的明确中国汉族人群白细胞介素12(IL-12)基因rs3212227多态性与甲状腺乳头状癌(PTC)的相互关系。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性对211例PTC患者和216个健康对照的IL-12基因rs3212227多态性进行分析。结果PTC组和健康对照组IL-12基因rs3212227多态性差异无统计学意义，但PTC中携带有A/C和C/C基因型较携带AA基因型在甲状腺被膜浸润上的差异有统计学意义(P=0.047，P=0.035)。结论 IL-12基因rs3212227多态性与PTC的发生没有显著关系，但可能影响PTC对甲状腺被膜的浸润。

IL-12；单核苷酸多态性；甲状腺乳头状癌；

甲状腺癌是女性第五大肿瘤，也是最常见的内分泌恶性肿瘤。其中甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)是甲状腺恶性肿瘤中最常见的形式，占80%左右，其发病率在过去的几十年里迅速增加[1-3]。目前，PTC发病机制尚不明确，多数学者认为是由遗传和环境因素共同作用的结果，并发现基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与不同国家与种族的PTC发生相关[4-7]。

IL-12是二硫键连接的由IL-12p35 (由IL12A编码) 和 IL-12p40 (由 IL12B编码)组成的异源二聚体，可增强细胞毒性T淋巴细胞生成并提高其杀伤活性，抑制NK细胞和Th2型辅助性T细胞分化，具有较强的抗肿瘤作用[8-10]。目前，研究发现IL-12基因多态性与癌症发病风险之间的关系，包括胃癌、胶质瘤、结直肠癌、宫颈癌、肝癌等[11-15]。本研究拟探讨IL-12基因rs3212227多态性与PTC的发生、发展之间的关联，现报道如下。

1　材料与方法

1.1研究人群的临床特征收集2014年4月至2015年9月共211例华西医科大学就医的PTC患者，所有PTC诊断均经病理切片证实，年龄(43.63±12.95)岁。临床资料主要包括年龄、性别等资料，排除前期曾发生有癌症、化疗或放疗史者，同期随机选择年龄和性别匹配的健康个体216例，年龄(44.53±7.15)岁，无任何家族性癌症病史或其他严重的疾病，患者和对照组的性别和年龄分布差异均无统计学意义。研究中所有病例和对照均为汉族，生活在西南地区，并获得了所有受试者的知情同意，研究人群的临床特征见表1。

表1　研究人群的临床特征

1.2基因分型采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测IL-27基因rs3212227多态性。采用外周血基因组DNA提取试剂盒(北京bioteke公司)，根据试剂说明书提取基因组DNA，-80 ℃冻存。根据参考文献[14]设计PCR引物，具体为：上游引物F:5′-TTTGGAGGAAAAGTGGAAGA-3′，下游引物R:5′-AACATTCCATACATCCTGGC-3′。PCR反应条件为：总体积25 μL含100 ng基因组DNA，0.2 μM dNTPs，各0.5 μM上下游引物，2.0 mM MgCl2，10 mM Tris HCl(pH值8.8)，和2.5 U DNA聚合酶(Tiangen,China)，反应温度：94 ℃ 4 min预变性，94 ℃变性 45 s，60 ℃ 退火1 min，72 ℃延伸1 min共循环35次，最后延伸72 ℃ 8 min。PCR产物用Taq I酶(New England Bio-Labs,USA)进行酶切后，经6%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和1%硝酸银染色鉴定。分型结果采用测序以验证其正确性。

1.3统计分析采用SPSS 13.0软件进行统计分析，分类变量采用卡方检验，连续变量采用t检验。IL-12 rs3212227基因型和等位基因频率的比较采用卡方检验，比值比(OR)和95%可信区间(CI)用于评估相对风险，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

PTC组和对照组之间的IL-12基因rs3212227多态性的基因型分布均符合哈迪—温伯格均衡。与对照组相比，PTC组IL-12基因rs3212227的多态性差异无统计学意义，见表2。

表2　两组IL-12 rs3212227基因多态性　例(%)

注：OR：比值比；CI：置信区间。

在IL-12基因rs3212227多态性与PTC的临床特征之间的关系中，PTC组IL-12基因rs3212227多态性与肿瘤大小、数目、颈淋巴结转移等差异均无统计学意义，但IL-12基因rs3212227携带有A/C和C/C基因型与携带AA基因型相比，在甲状腺被膜浸润上差异有统计学意义(分别为P=0.05和P=0.04)，见表3。

表3IL-12 rs3212227多态性与PTC临床特征例(%)

(续表)

基因型基因型频率肿瘤≥1cm肿瘤<1cmOR(95%CI)P值颈淋巴结转移(+)颈淋巴结转移(-)A/A37(32.17)28(29.17)1.00(Ref)A/C60(52.17)41(42.71)0.89(0.47-1.71)0.72C/C18(15.65)27(28.13)1.80(0.82-3.98)0.17被膜浸润(+)被膜浸润(-)A/A44(36.97)21(22.83)1.00(Ref)A/C53(44.54)48(52.17)1.94(1.01-3.74)0.05C/C22(18.49)23(25.00)2.31(1.05-5.11)0.04

注：OR：比值比；CI：置信区间。

3　讨论

IL-12是一种异源二聚体结构的前炎症因子，亚单位p35和p40分别由白细胞介素12A(interleukin-12A,IL-12A)和白细胞介素12B(interleukin-12B,IL-12B)基因编码。IL-12能诱导Th1细胞分化，促进IFN-γ的产生，并在固有免疫和获得免疫之间建立起重要联系，在Th1类免疫过程中处于核心地位。IL-12具有较强的抗病毒与抗肿瘤活性，它通过激活Th1获得性免疫和CTL在抗血管生成和消退肿瘤的过程中发挥作用[8-10]。基于IL-12的相关功能，有关IL-12基因多态性与肿瘤关系的研究报道，包括宫颈癌、胃癌、肺癌、非霍奇金淋巴瘤和其他肿瘤[11-15]。

本研究IL-12基因rs3212227单核苷酸多态性在PTC组与对照组的差异无统计学意义，说明IL-12基因rs3212227多态性对PTC的发生没有显著性影响。但PTC患者携带有A/C和C/C基因型与携带AA基因型相比，在甲状腺被膜浸润上差异有统计学意义上增加的差异，提示IL-12 rs3212227基因的遗传变异有可能影响PTC对甲状腺被膜的浸润，其具体原因尚待进一步研究。

本研究也有一定的局限性。首先，病例数和对照组样本较少，需要在更大范围人群中进行进一步验证；其次，因为没有检测IL-12的表达水平，因此无法得出此多态性对IL-12水平是否有影响，但多数研究认为IL-12 rs3212227基因的遗传变异对其表达没有显著性影响[5]；第三，环境和生活方式等因素未考虑在内，这可能影响探究IL-12基因rs3212227多态性与PTC风险关系的准确性。未来需要进一步在大样本人群中研究，探讨不同环境因素与PTC发生及IL-12基因多态性之间的复杂的相互作用。

[1]Brown RL,de Souza JA,Cohen EE.Thyroid cancer: burden of illness and management of disease[J].J Cancer,2011,2:193-199.

[2]Vigneri R,Malandrino P,Vigneri P,et al.The changing epidemiology of thyroid cancer: why is incidence increasing[J].Curr Opin Oncol,2015,27(1):1-7.

[3]Schneider DF,Chen H.New developments in the diagnosis and treatment of thyroid cancer[J].CA Cancer J Clin,2013,63(6):374-394.

[4]Kula D,Kalemba M,Jurecka-Lubieniecka B,et al.Genetic predisposition to papillary thyroid cancer[J].Endokrynol Pol,2010,61(5):486-489.

[5]Eun YG,Lee YC,Kim SK,et al.Single nucleotide polymorphisms of the Fas gene are associated with papillary thyroid cancer[J].Auris Nasus Larynx,2015,42(4):326-331.

[6]Huang CJ,Jap TS.A systematic review of genetic studies of thyroid disorders in Taiwan[J].J Chin Med Assoc,2015,78(3):145-153.

[7]Brenner AV,Neta G,Sturgis EM,et al.Common single nucleotide polymorphisms in genes related to immune function and risk of papillary thyroid cancer[J].PLoS One,2013,8(3):e57243.

[8]Floros T,Tarhini AA.Anticancer cytokines:biology and clinical effects of interferon-a2,interleukin (IL)-2,IL-15,IL-21,and IL-12[J].Semin Oncol,2015,42(4):539-548.

[9]Tugues S,Burkhard SH,Ohs I,et al.New insights into IL-12-mediated tumor suppression[J].Cell Death Differ,2015,22(2):237-246.

[11]Zhao B,Meng LQ,Huang HN,et al.A novel functional polymorphism,16974 A/C,in the interleukin-12-3′ untranslated region is associated with risk of glioma[J].DNA Cell Biol,2009,28(7):335-341.

[12]Tao YP,Wang WL,Li SY,et al.Associations between polymorphisms in IL-12A,IL-12B,IL-12Rbeta1,IL-27 gene and serum levels of IL-12p40,IL-27p28 with esophageal cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2012,138(11):1891-1900.

[13]Wei YS,Lan Y,Luo B,et al.Association of variants in the interleukin-27 and interleukin-12 gene with nasopharyngeal carcinoma[J].Mol Carcinog,2009,48(8):751-757.

[14]Huang ZQ,Wang JL,Pan GG,et al.Association of single nucleotide polymorphisms in IL-12 and IL-27 genes with colorectal cancer risk[J].Clin Biochem,2012,45(1-2):54-59.

[15]Jafarzadeh A,Minaee K,Farsinejad AR,et al.Evaluation of the circulating levels of IL-12 and IL-33 in patients with breast cancer: influences of the tumor stages and cytokine gene polymorphisms[J].Iran J Basic Med Sci,2015,18(12):1189-1198.

Association of IL-12 rs3212227 Polymorphism with Papillary Thyroid Cancer in a Chinese Population

HUANG Rong1,CHENG Xiao-gang2,JIN Hong2,Ma Jing3

(1.School of pharmacy,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China;2.Department of Immunology,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China;3.Department of rehabilitation therapy,Chengdu Medical College,Chengdu 610083,China)

ObjectiveThe aim of the present study was to clarify the role of interleukin-12 (IL-12) gene rs3212227 polymorphism with the risk of papillary thyroid cancer (PTC) in a Chinese population.MethodsIL-12 gene rs3212227 polymorphism were genotyped in a case-control study of 211 PTC patients and 216 health controls using polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).ResultsNo significant difference was noticed in IL-12 rs3212227 polymorphism between PTC patients and healthy controls in the overall analysis.However,we found that PTC patients carrying the A/C and C/C genotypes in rs3212227 had significantly increased risks for developing extra-thyroidal invasion compared with those carrying the AA genotype (P=0.047,P=0.035,respectively).ConclusionThere is no obvious association between IL-12 gene rs3212227 polymorphism and PTC occurance.However,the data elucidate that the rs3212227 polymorphism of IL-12 gene might affect the PTC invasion to thyroid capsule.

IL-12；single nucleotide polymorphism；papillary thyroid cancer

1672-688X(2016)03-0180-03DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.03.006

2013年省级大学生创新实验计划项目(编号：201313705019)

2016-05-13

1.成都医学院药学院，四川成都 610083

2.成都医学院免疫学教研室，四川成都 610083

3.成都医学院康复治疗系，四川成都 610083

黄蓉(1993-)，女，四川成都人，从事基因多态性分析研究。

金虹(1978-)，女，博士，讲师，E-mail：Jingh04280@yahoo.com.cn

R736.1,Q754

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