便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫抗体水平的效果试验

胡珊莲

(上海市静安区江场西路上海光明荷斯坦牧业有限公司，上海静安 200436)



便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫抗体水平的效果试验

胡珊莲

(上海市静安区江场西路上海光明荷斯坦牧业有限公司，上海静安 200436)

采用便捷式液相阻断ELISA试剂盒和传统液相阻断试剂盒，同时对117份牛血清样品进行口蹄疫O型抗体水平检测，以探讨其相关性和特点。结果表明：便捷式液相阻断ELISA试剂盒与传统液相阻断试剂盒的检测结果相比，kappa值为0.84，具有高度一致性；检测时间，便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测为2 h，传统式检测则需时5.25 h。应用便捷式液相阻断ELISA试剂盒对上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场检测牛血清样品8729份，O型口蹄疫免疫抗体合格率为96.9%。

O型口蹄疫；液相阻断ELISA试剂盒；免疫抗体；荷斯坦牛

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，主要侵害偶蹄动物。口蹄疫病毒(FMDV)属小RNA病 毒科，口蹄疫病毒属。完整的FMDV，无囊膜，仅由衣壳包裹。我国将口蹄疫与牛瘟、牛传染性胸膜肺炎、牛海绵状脑病等动物疫病列为一类动物疫病。

口蹄疫在世界多个地区广泛流行，发病率高，给养殖业造成了重大经济损失(特别是养牛业和养猪业)，我国每年投入大量人力、物力用于疫苗免疫。因此，采用科学合理的检测方法对疫苗抗体水平进行检测显得十分重要。传统液相阻断ELISA试剂盒因其灵敏、准确、可以半定量等优点，在口蹄疫免疫抗体检测中应用广泛，但步骤繁琐、反应时间较长等弊端给检测工作带来了不少麻烦。为进一步了解和评价便捷式液相阻断ELISA试剂盒的应用效果，试验通过便捷式液相阻断ELISA试剂盒和传统式液相阻断试剂盒对117份牛血清样品进行牛O型口蹄疫抗体水平检测，并结合便捷式液相阻断试剂盒对上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场8729份牛血清样品进行牛O型口蹄疫抗体水平检测，以考察其应用效果。

1　材料与方法

1.1血清采样随机采集上海光明荷斯坦牧业有限公司下属牧场荷斯坦牛血清样品117份；另于2015年11月至2016年4月期间采集荷斯坦牛送检血清样品8729份，检测牛O型口蹄疫抗体水平及免疫抗体合格率。所有样品均为口蹄疫疫苗普免后21-23 d采集的新鲜血清样品。

1.2检测试剂盒便捷式液相阻断ELISA检测试剂盒由河南洛阳某信息科技有限公司生产，生产批号：E151027。传统式液相阻断ELISA检测试剂盒由中国农科院某兽医研究所生产，生产批号：20150624101-2。

1.3检测方法严格按两种检测试剂盒说明书操作。便捷式ELISA检测试剂盒以病毒抗原阻断50%反应的450 nm处OD值为临界值，待检样品OD值>临界值,判为阴性；待检样品OD值≤临界值，判为阳性。每份待检样品系列梯度稀释中，阳性孔的最高稀释倍数即为该待检样品的抗体效价。牛、羊：抗体效价≥1∶128，99%以上保护。传统式ELISA检测试剂盒以病毒抗原对照D492nm值的50%为临界值，被检血清稀释孔D492nm值>临界值，判为阴性；D492nm值≤临界值，判为阳性，阳性孔的D492值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清样品的抗体滴度。牛、羊抗体滴度≥1∶128，为保护。

2　结果与分析

2.1检测步骤与时间详见表1。

表1　两种试剂盒检测步骤与时间比较

由表1可见，便捷式液相阻断ELISA检测试剂盒操作简便，检测总试时间较短，仅为传统式液相阻断ELISA检测试剂盒操作时间的1/3左右。且便捷式检测试剂盒显色液不需要现用现配，避免了工作人员接触OPD底物的隐患(有报道称OPD具有致异变性)。

2.2检测结果比对详见表2。

由表2可见，两种模式检测血清样品117份的合格率分别为76.92%和74.36%，两者合格样品的符合率为97.70%，不合格样品符合率为83.33%。经kappa值比较，两种试剂盒检测结果的kappa值大于0.8(Kappa判定： 大于0.8为高度一致， 0.6-

表2　两种检测试剂盒的检测结果比对

0.8为一致，0.4-0.6为一般，小于0.4为差)。检测结果表明，便捷式和传统式液相阻断ELISA试剂盒检测牛血清O型口蹄疫抗体水平的符合率为高度一致。

2.3便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫免疫抗体水平结果2015年11月至2016年4月，经对上海光明荷斯坦牧业有限公司所属牧场牛群于口蹄疫疫苗普免后21～23 d采集血样，采用便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测血样8729份。经检测，免疫合格样品8462份，合格率为96.9%，检测方法简便、快速，并未发现便捷式液相阻断ELISA试剂盒有何不稳定现象。

3　小结与讨论

根据本次检测结果，便捷式液相阻断ELISA试剂盒在加样步骤和反应时间方面进行了适当改进，实验原理仍为液相阻断ELISA：血清中特异性抗体阻断病毒抗原与包被抗体酶结合物结合。

检测结果表明，便捷式液相阻断ELISA试剂盒与传统液相阻断ELISA试剂盒检测结果具有高度一致性，采用便捷式液相阻断ELISA试剂盒检测牛O型口蹄疫抗体水平，可提高工作效率，降低人工成本，未见任何不稳定现象，值得推广应用。

2016-07-01

S858.23

A

1005-7307(2016)05-0004-003