非小细胞肺癌组织中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表达及临床意义

俞婷婷, 刘　莉, 王若峥

(新疆医科大学附属肿瘤医院, 1. 肺内科; 2. 头颈放射治疗科, 新疆 乌鲁木齐, 830011)



非小细胞肺癌组织中Snail、E-cadherin及N-cadherin的表达及临床意义

俞婷婷1, 刘莉1, 王若峥2

(新疆医科大学附属肿瘤医院, 1. 肺内科; 2. 头颈放射治疗科, 新疆 乌鲁木齐, 830011)

目的探讨指转录因子Snail、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)及神经钙黏素(N-cadherin)在非小细胞肺癌组织中的表达及其之间的相关性。方法采用免疫组化法检测63例非小细胞肺癌(NSCLC)手术切除标本及30例癌旁组织中Snail、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达，并分析相互间关系及其临床意义。结果 与癌旁组织比较, NSCLC组织中E-cadherin表达显著减少, N-cadherin和Snail表达明显增加(P<0.01)。NSCLC组织中, Snail的表达与N-cadherin呈明显的正相关(P<0.05,r=0.33), 与E-cadherin呈显著负相关(P<0.05,r=-0.41), N-cadherinl的表达与E-cadheri也呈明显负相关(P<0.05,r=-0.56)。Snail表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P<0.05); E-cadherin表达阳性率与TNM分期和有无转移相关(P<0.05); N-cadherin表达阳性率与组织学分型、TNM分期和有无转移相关(P<0.05)。结论NSCLC癌组织中Snail、E-cadherin和N-cadherin表达水平与肿瘤的浸润转移密切相关，可作为临床诊断和治疗靶点的参考指标。

非小细胞肺癌; 锌指转录因子; 上皮细胞钙粘蛋白; 神经钙黏素; 免疫

在中国，原发性肺癌是常见的恶性肿瘤，早期诊断困难和转移率高导致其在发病率和死亡率居恶性肿瘤的首位，其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占85%[1]。肿瘤的侵袭和转移是造成NSCLC患者预后不良的重要原因。近年来，有研究[2-4]发现, EMT与多种上皮源性恶性肿瘤的侵袭转移过程密切相关，即上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)表达下调的同时伴有神经钙黏素(N-cadherin)表达的增高，即引发肿瘤细胞的侵袭和转移。本研究通过检测NSCLC患者Snail、E-cadherin及N-cadherin的表达，探讨相互之间的关联性及与临床病理因素的关系。

1　资料和方法

1.1一般资料

选取2015年1月―2016年3月新疆医科大学附属肿瘤医院收治的NSCLC患者63例，所有入组患者排除接受放疗或化疗治疗。取63例患者的手术切除标本为实验组，同时取癌旁组织标本30例为对照组(经病理检验均无癌细胞浸润)。63例患者中男38例，女25例；患者年龄42～68岁，中位年龄52岁；腺癌29例，鳞癌34例；根据肺癌TNM临床分期Ⅰ期14例, Ⅱ16例, Ⅲ期20例, Ⅳ13例; 有淋巴结转移例36例，无淋巴结转移27例。所有患者均知情同意，且本研究经伦理委员会批准。

1.2试剂和方法

1.2.1试剂：兔抗人Snail多克隆抗体、兔抗人E-cadherin多克隆抗体及兔抗人N-cadherin多克隆抗体(Abcam公司)，正常羊血清，DAB显色试剂盒，苏木素等。

1.2.2检测方法: 4 μm石蜡切片放在(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷(APES)1∶50丙酮溶液中浸泡3 min, 晾干，将切片置于二甲苯中浸泡10 min, 2次。再入100%、95%、90%、80%、70%等各级酒精溶液中各3～5 min, 再放入蒸馏水中水化3 min。将切片进行抗原修复(标本置于煮沸的柠檬酸钠缓冲液中浸泡30 min); 消除标本内源性过氧化物酶活性(于3%的H2O2溶液中浸泡15 min); 5%正常羊血清封闭90 min, 滴加一抗(阴性对照以PBS缓冲液代替一抗)在4℃孵育过夜。二抗及DAB显色按照试剂盒说明书使用，苏木素复染后将标本进行脱水最后封片。

1.3检测结果判定

结果根据免疫染色阳性率及其强度判断：在显微镜下观察，以细胞染色呈棕黄色为阳性，未着色则为阴性[5]。根据染色深浅强度计分：阴性为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，沈棕色且无背景着色为3分。按阳性细胞百分比评分：1%～10%为1分，10%～50%为2分，50%～80%为3分；80%以上为4分。然后将阳性细胞与染色强弱的乘积计积分，≥4分为阳性。

1.4统计学方法

数据采用SPSS 17.0软件分析处理。计量资料采用t检验，率的比较采用χ2检验，采用Spearman等级相关分析检测Snail、E-cadherin和N-cadherin表达的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白在NSCLC组织中的表达

63例NSCLC患者组织中，Snail与N-cadherin的蛋白表达主要位于细胞核，而E-cadherin的蛋白表达主要位于细胞膜。Snail与N-cadherin表达阳性率显著高于对照癌旁组织，而E-cadherin的蛋白表达阳性率显著低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的相关性

采用Person相关性分析显示Snail的表达与N-cadherin呈显著正相关(P<0.05,r=0.33)，与E-cadherin呈负相关(P<0.05,r=-0.41)，N-cadherin的表达与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05,r=-0.56)。

表1　Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达情况[n(%)]

与癌旁组织比较, **P<0.01。

2.3Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达与临床病理的关系

63例肺癌患者的临床资料包括年龄、性别、病理类型、组织学分级、淋巴结转移和临床分期见表2。分析显示, Snail在Ⅲ、Ⅳ期病例中阳性率38.10%(24/63), 明显高于Ⅰ期、Ⅱ期的17.46%(11/63)(P<0.05); 有转移阳性率34.92%(22/63), 明显高于无转移病例20.63%(13/63)(P<0.05); E-cadherin在Ⅰ、Ⅱ期病例中阳性表达率33.33%(21/63), 高于Ⅲ、Ⅳ期病例的15.87%(10/63)(P<0.05), 有转移E-cadherin阳性率3.17%(2/63), 显著低于无转移的22.22%(14/63)(P<0.05), E-cadherin的表达与组织学分型、临床分期无相关性。N-cadherin表达阳性率在腺癌中为36.51%(23/63), 明显高于鳞癌的11.11%(7/63) (P<0.05); Ⅲ、Ⅳ期病例中阳性率39.68%(25/63), 明显高于Ⅰ期、Ⅱ期的7.94(5/63)(P<0.05); 有转移阳性率34.92%(22/63), 明显高于无转移病例12.70%(8/63)(P<0.05); 三者与性别年龄均无相关性。

表2　肺癌组织Snail、E-cadherin及N-cadherin蛋白表达与临床病理的关系(n)

3　讨　论

浸润和转移是肿瘤细胞独有的生物学特性，这一特性的前提是肿瘤细胞需克服细胞间的黏连[6]。EMT使上皮细胞丧失极性，从上皮组织分离或脱落至其他位置，这是包括NSCLC在内的多种肿瘤细胞获得侵袭转移能力的重要机制[7]。随着分子生物学的研究和发展，影响肿瘤细胞侵袭和转移的细胞黏附分子已成为近年来研究的重点和热点。

钙黏附素家族是一组存在于细胞膜上的介导同种细胞间相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，其表达量的变化直接与肿瘤的侵袭和转移密切相关[8]。E-cadherin是钙黏蛋白家族中第一个被发现的成员，一类依赖钙离子的细胞间黏连跨膜糖蛋白分子，主要表达于细胞膜，其表达量下调与EMT过程密切相关。与正常组织相比，常见人类肿瘤细胞的E-cadherin表达下调或丧失，影响细胞间的黏连[9]。N-cadherin作为钙黏附素家族另一个重要成员，其表达能直接介导肿瘤细胞由上皮向间叶转化，加强肿瘤的侵袭作用，影响肿瘤细胞的扩散[10-11]。N-cadherin在肿瘤组织中也呈膜表达。Khan等[12]研究发现，肿瘤细胞从良性到恶性转化的过程中N-cadherin表达逐渐增强，可见N-cadherin表达与细胞的恶性进程及侵袭转移能力有关。锌指转录因子Snail为EMT强诱导子, De Craene等[13]研究发现，肿瘤细胞Snail蛋白表达可影响肿瘤EMT，促进肿瘤细胞间质浸润和转移。

本研究结果显示NSCLC组织中E-cadherin的蛋白表达阳性率显著低于癌旁组织，其阳性率与TNM分期和有无转移有关(P<0.05)；提示其表达下调，细胞间黏附力减弱，增加了肿瘤细胞转移的能力，在NSCLC进程中起到一定的作用。而N-cadherin蛋白的表达阳性率显著高于癌旁组织，与组织学分型、TNM分期和有无转移有关(P<0.05)，腺癌中N-cadherin阳性表达率明显高于鳞癌，此发生机制还需加大样本量完善研究；且与E-cadherin的表达呈负相关，提示N-cadherin表达的增加对肿瘤的侵袭和转移有促进作用，抑制N-cadherin的表达可以作为肿瘤治疗的新靶点。同时, NSCLC组织中Snail表达也显著增高, Snail表达阳性率与TNM分期和有无转移有关

(P<0.05)，与N-cadherin呈明显的正相关，与E-cadherin呈负相关，提示Snail高表达可能对E-cadherin的表达有抑制作用。

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Expression of Snail，E-cadherin and N-cadherin in tissues of non-small cell lung cancer and its clinical significance

YU Tingting1，LIU Li1，WANG Ruozheng2

(1.DepartmentofPulmonaryDisease; 2.DepartmentofHeadandNeckRadiotherapy,CancerHospitalAffiliatedtoXinjiangMedicalHospital,Urumchi,Xinjiang, 830011)

ObjectiveTo explore the expression of Snail, epithelial-cadherin (E-cadherin) and nerve-cadherin (N-cadherin) in the tissues of non-small cell lung cancer (NSCLC) and their relationships. MethodsImmunohistochemical method was used to detect the levels of Snail, E-cadherin and N-cadherin protein expression in surgically resection tissue samples from 63 patients with NSCLC and para-cancerous tissues was obtained from 30 patients, and the relationships among them and their clinical significance were analyzed. ResultsCompared with para-cancerous tissues, NSCLC tissues had evidently decreased E-cadherin expression and notably increased expression of N-cadherin and Snail (P<0.01). In NSCLC tissues, the expression of Snail was in positive association with that of N-cadherin (P<0.05,r=0.33) and in negative connection with that of E-cadherin (P<0.05,r=-0.41), whereas expression of N-cadherinl was negatively related with that of E-cadheri (P<0.05,r=-0.56). The positive expression rates of Snail and E-cadherin were in close association with TNM staging and whether there was metastasis (P<0.05), whereas that of N-cadherin had close association with histological classification, TNM staging and whether there was metastasis (P<0.05). ConclusionThe expression levels of Snail, E-cadherin and N-cadherin in NSCLC cancerous tissues are associated with tumor infiltration and metastasis, so they can be used as reference indexes for the clinical diagnosis and therapeutic targets.

non-small cell lung cancer; Snail; epithelial-cadherin; nerve-cadherin; immunity

2016-05-13

中国高校医学期刊临床专项资金(11522488)

王若峥, E-mail: 38804632@qq.com

R 734.2

A

1672-2353(2016)17-029-03

10.7619/jcmp.201617009