不同年龄稽留流产患者绒毛染色体异常特点观察

黄存 　潘维君

[摘 要] 目的：观察不同年龄段稽留流产患者绒毛染色体异常与流产关系。方法：选择2012年至2015年在安徽省马鞍山市妇幼保健院生殖中心就诊的稽留流产54例患者，在人工流产同时无菌留取绒毛组织进行染色体分析，分为≥35岁、30～34岁、≤30岁三组，分析各组绒毛染色体异常特点。结果：≥35岁组异常核型百分比及数目异常核型占比高于其余两组，组间差异有统计学意义（P<0.05）。30～34岁组和≤30岁组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：绒毛染色体核型异常是稽留流产主要原因，≥35岁孕妇绒毛染色体异常核型风险增高，对存在染色体结构异常者建议进一步检查，降低再次稽留流产发生率。

[关键词] 绒毛染色体；年龄；稽留流产

中图分类号：R731.9 文献标识码：B 文章编号：2095-5200（2016）04-102-03

DOI：10.11876/mimt201604039

稽留流产又称过期流产。是指胚胎或胎儿已死亡滞留宫腔内未能及时自然排出者[1]。引起稽留流产的原因有多种，包括遗传、子宫结构、内分泌、免疫、血栓形成倾向、感染以及环境因素等。大量文献报道，胎儿染色体异常是稽留流产的主要原因，胚胎染色体异常导致流产占50%～60%[2]。2012年以来我院开始对稽留流产患者绒毛染色体进行分析，探讨不同年龄段孕妇绒毛染色体异常与稽留流产关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2012年至2015年在我院生殖中心诊断为稽留流产，要求行绒毛染色体检查患者为研究对象。54例中≥35岁14例，30～34岁20例，≤30岁20例，孕周为8～13周。

1.2 绒毛染色体观察方法

电动吸引器真空吸引绒毛组织，无菌生理盐水漂洗抽吸取得绒毛组织去除血液，夹取绒毛组织约0.1g，去除蛻膜等异物，将绒毛组织剪成粥样。15mL无菌离心管加入1.5mL绒毛膜细胞处理液，放入剪碎绒毛组织立即摇匀。离心管置37℃水浴内，间歇摇动离心管，5～10min后观察组到绒毛组织松开并可见到细胞时，离心后弃上清，加入培养液吹打使细胞重新悬浮，转移细胞悬液至两个培养瓶。置CO2培养箱中培养，每天观察细胞生长情况，见到梭形细胞克隆，换液，见到较多圆形及双圆形细胞后收获。如果绒毛组织新鲜有活性，接种后10天左右可收获，若组织中活性细胞少则培养时间长达3～4周，超过1个月细胞仍不生长，为培养失败[3]。对收获细胞进行染色体制片分析，G显带320～400范围。

1.3 统计学方法

SPSS19.0进行统计分析，异常构成百分比以n（%）表示，组间χ2检查。以P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段染色体结果

54例稽留流产患者胚胎绒毛样本均培养成功，成功率 100%。异常核型32例，占59.2%。

如表1所示，≥35岁组14例中正常核型4例，异常核型10例，占71.6%（10/14），异常核型中以常染色体三体多见，未见结构异常；30～34岁组20例中正常核型9例，异常核型11例，占55%（11/20），异常核型中以三倍体及常染色体单三体多见，结构异常1例；≤30岁20例中正常核型9例，异常核型11例，占55%（11/20），异常核型中以三倍体及常染色体单三体多见，结构异常1例。≥35组异常核型百分比高于其余两组，组间差异有统计学意义。

2.2 不同年龄组异常核型占比比较

参照马光娟等[4]研究方法，计算各组异常核型构成比。结果如表2所示，≥35岁组数目异常核型占比高于30～34岁组和≤30岁组，组间差异有统计学意义（P<0.05）。30～34岁组和≤30岁组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。

3 讨论

流产病因复杂而不确定，反复流产者病因也不固定，多年研究发现，染色体异常是流产主要原因[5-6]，绒毛细胞是胚胎外胚层细胞，具有与胚胎组织相同遗传性状[7]。

本研究中各组染色体异常绝大部分属数目异常，常染色体三体占主要部分，≥ 35岁组染色体结构异常三倍体发生比例较低，非整倍体占异常染色体90%（9/10），在其他两组分别是45.5%（5/11）和63.6%（7/11），常染色体三体异常占比为主，与文献报道一致[8-9]。本研究显示≥35组数目异常核型占比高于30～34岁组和≤30岁组，35岁以上女性，卵巢储备功能下降，卵泡质量下降，容易出现纺锤体老化，导致染色体不分离，使三體发生率增加[10]。本研究见3例染色体核型示结构异常，47，XY，+5，13P+，其中13P+属于染色体多态性，是染色体微小变异，文献报道[11]，15p+ 多为家族性变异染色体，但一般不会有临床效应。46，XY，-8，+t（8：？）及46，XX，-18，+？18两例均缺失了一条正常常染色体，而由一条可疑异常常染色体替代，对这两对夫妇外周血染色体进行分析，核型均属于正常。

文献报道[12]，反复流产者绒毛染色体异常概率会增加。本研究病例有限未对流产次数与核型异常率相关性进行研究。胚胎植入前遗传学诊断（PGD）或筛查（PGS），即在体外受精-胚胎移植（IVF）基础上，对具有遗传风险夫妇卵母细胞或植入前胚胎进行活检[13]，选择正常胚胎进行移植。其中PGD适用于携带有遗传性疾病或遗传风险患者[14-15]，PGS适用于染色体非整倍性筛查[16]。若能证实自然流产次数与异常率相关，那么针对反复流产绒毛染色体核型连续为非整倍体者，下次妊娠胎儿染色体异常风险增加，可以考虑行PGD。

对稽留流产患者进行绒毛染色体分析，发现本次流产病因并对下一次妊娠有重要指导意义。采用荧光原位杂交（FISH）技术检测稽留流产绒毛染色体[17]快速简便，不须细胞培养。但是该技术成本费用较高，检查范围局限，且仅能检查部分非整倍体染色体，对结构异常者亦无法诊断，短时间内在马鞍山地区广泛开展意义不大。我院目前绒毛培养技术比较成熟，采用培养法检测绒毛染色体核型有一定优势，今后工作中要注意组织取材和保存，保持良好培养率。

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