猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测与分析

刘 鸽，于会举，张培生，张 倩，屈勇刚，杨慧敏

（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

猪繁殖与呼吸综合征免疫抗体检测与分析

刘 鸽，于会举，张培生，张 倩，屈勇刚*，杨慧敏

（石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003）

为了解北疆地区的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的免疫抗体水平，以便及时发现问题，及时淘汰病猪和做好PRRS的补免工作，本试验从北疆地区的19个现代规模猪场采集血液样品1 027份，采用ELISA抗体检测试剂盒对样品进行检测，结果发现有965份免疫抗体阳性血清，阳性率为93.96%；样品KQ平均值为80.25，变异系数平均值为0.36；免疫抗体阳性率超过90%的猪场有17个，占89.47%；有6个猪场的PRRS免疫抗体阳性率超过95%。本试验研究结果发现：北疆地区猪群的PRRS免疫抗体整体水平较高；不同构成成分的试验猪群间PRRS免疫抗体水平存在差异，种公猪的免疫抗体水平最高；虽然仔猪的整体PRRS免疫抗体水平较高，但免疫抗体水平有随日龄的增长而下降的趋势。希望本试验的研究成果对养猪企业的生产有所帮助，并为猪病研究的组织机构提供有价值的参考。

PRRS；ELISA；抗体水平；阳性率

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），又被称为猪蓝耳病（因猪感染后有耳朵发紫的症状而得名），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度接触性传染病［1］。PRRSV是冠状病毒科动脉炎病毒属的病毒。PRRS常会引起母猪的繁殖障碍、仔猪的呼吸道疾病和高死亡率［2］、公猪的生殖机能下降［3］。PRRS被国际兽医局（OIE）列为B类传染病，我国将之列为二类动物传染病。PRRS 在1987年出现于美国，随后在欧美和亚洲的一些国家和地区相继出现［4］，并于20世纪90年代初传入我国。1991年荷兰分离到1株PRRSV，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所在1993年从国内病猪体内分离到了PRRSV［5］。PRRS的特点是具有高度传染性、传播速度快、危害范围广，给国内外养猪业带来非常大的损失［6］。我国已经将PRRS列为强制免疫预防的动物疾病，检测免疫抗体是检验免疫效果的有效手段，免疫效果对PRRS的防控起到非常大的作用［7］。而且，PRRS没有非常有效的治疗方法，包括免疫接种在内的综合防治措施是最为有效的方法［8］。

为了解新疆北疆地区的PRRS的免疫抗体水平，以便及时发现问题，及时淘汰病猪和做好PRRS的补免工作，本试验从北疆地区（巴州、伊犁、克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台等不同区域）的19个现代规模猪场采集血液样品1 027份，使用猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒对样品进行检测，并对检测结果进行分析。希望本试验的研究成果对养猪企业的生产有所帮助，并为猪病研究的组织机构提供有价值的参考。

1　试验材料和方法

1.1 本试验的材料

1.1.1 试验样品的来源 2014年1月—2016年4月期间，从北疆地区（巴州、伊犁、克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台等不同区域）的19个现代规模猪场采集血液样品1 027份，其中包括不同类型的猪群（仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪、育肥猪）。

1.1.2 所需材料和必备仪器 猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物，141115）、自动酶标仪（美国 Bio Tek ）、一次性5 mL兽用采血器、微量移液器（Eppendorf公司）、若干个移液枪头、恒温培养箱（光明医疗仪器厂）、平板震荡仪等。

1.2 试验方法

1.2.1 试验采集样品的方法 用一次性兽用采血器（最大量程5 mL）从待检猪的前腔静脉或耳静脉一次性采血2～4 mL/头，在室温下静置一段时间，以便血清析出，收于采样箱中带回实验室（如果距离较远，一定要放有冰袋）。吸取1～1.2 mL血清（血清应清亮）到1.5 mLEP管（使用前高压灭菌处理），每个EP管上准确对应标记好，在4 000～10 000 r/min 、2～10 min的条件下离心，将上清液吸出作为待检血清。

1.2.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测方法 把浓缩洗涤液恢复至室温，摇匀，对其进行20倍稀释。在血清稀释板上，对待检血清进行1∶40稀释，对照血清作1∶4稀释。对合适数量的抗原包被板进行洗涤后，各取待检血清和阴、阳对照血清100 μL于各自的抗原包被板微孔中。要求每个待检样各设一孔，阴、阳对照各设两孔。用平板震荡器轻摇15 s左右，放到37 ℃恒温箱中温育30 min后，再用稀释好的洗涤液洗5次。在每个微孔中加100μL羊抗猪酶标二抗，经37 ℃孵育30 min后，再洗5次。然后，在每个抗原包被板微孔中加底物A 1滴（大约50 μL）、底物B1滴，在室温避光条件下显色10 min左右。最后，加50μL终止液到每个孔中，尽快测定OD630nm值。

1.2.3 试验结果判定标准 各孔的OD630nm值在酶标仪上读出。试验成立必须满足：阳性对照孔 OD630nm值均≥0.7，阴性对照孔OD630nm值均＜0.3。

计算，KQ值=（样品OD630nm值/阳性对照平均值）×100%

若KQ≥20，判为PRRS免疫抗体阳性；若KQ＜20，判为阴性。

1.2.4 统计分析试验结果的方法

使用Excel 软件和SPSS 软件对本试验结果进行分析，计算本试验猪场的PRRS免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数。

2　试验结果

2.1 试验猪场的PRRS免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数

北疆地区的19个试验猪场用英文字母A～S进行编号。根据统计结果发现，1 027份试验样品中有965份被检测为PRRS免疫抗体阳性，计算该阳性率为93.96%，KQ平均值为80.25，变异系数平均值为0.36。试验猪场的PRRS免疫抗体阳性率中最大值为100%，且有2个这样的猪场，占试验猪场的10.53%，最小阳性率为86.67%；免疫抗体阳性率超过90%的猪场有17个，占89.47%；有6个猪场的PRRS免疫抗体阳性率超过95%，占31.58%；各猪场的KQ平均值中最大的为95.12，最小的为48.56；试验猪场的变异系数小于0.4的猪场有13个，占68.42%，变异系数都在0.14～0.68之间。统计试验结果见表 1 。

表 1 各猪场的PRRS免疫抗体阳性率、KQ平均值、变异系数

2.2 北疆地区试验猪场不同构成成分猪群的PRRS免疫抗体水平

对北疆地区所有试验猪场不同构成成分猪群的PRRS免疫抗体水平进行分析发现，仔猪、后备母猪、经产母猪、种公猪、育肥猪的免疫抗体阳性率分 别 为：94.18%、94.35%、98.73%、98.80%、55.56%。不难发现，免疫抗体阳性率最高的是种公猪的，其次是经产母猪的，育肥猪的PRRS免疫抗体阳性率最低，只有55.56%；仔猪和后备母猪的抗体阳性率虽然比较接近，但前者的低于后者的。试验统计结果见表2 。

表 2 不同构成成分猪群的PRRS免疫抗体水平

2.3 试验猪场所有0～30 d仔猪PRRS免疫抗体阳性率

试验共采集0～30 d的仔猪血液样品275份，其中有259份经PRRS免疫抗体检测呈阳性，占94.18%。对所有试验猪群中0～30 d的仔猪的PRRS免疫抗体阳性率进行统计发现：0～10 d的仔猪抗体阳性率最高，为97.78%；其次是11～20 d的仔猪的，阳性率为96.67%；21～30 d仔猪的PRRS免疫抗体阳性率最低，为88.42%，虽然最低，但其免疫抗体阳性率仍大于85%。试验统计结果见表 3 。

表 3 0～30 d仔猪PRRS免疫抗体阳性率

3　讨论

3.1 北疆地区试验猪群的PRRS免疫抗体整体水平较高

使用猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒对采集的北疆地区的不同区域的1 027份试验样品进行检测，发现有965份血清样品检出PRRS免疫抗体阳性，占93.96%，高于2012年我国农业部制定的70%的合格标准。由试验研究结果发现，进行试验的19个猪场中有17个猪场的PRRSV免疫抗体阳性率高于90%，占89.47%，且其中有2个猪场的抗体阳性率为100%，有6个猪场的抗体阳性率大于95%；免疫抗体阳性率最低的为86.67%；各试验猪场KQ平均值为较高，为80.25；变异系数平均值较低，为0.36，符合我国农业部在2012年指定的离散度低于0.40的标准［9］。该试验研究结果说明：北疆地区猪群的PRRS免疫抗体整体水平较高，有接近九成的试验猪场的免疫抗体阳性率高于90%，且比较稳定；也比较容易发现，虽然整体水平较高，但仍然存在PRRS免疫抗体呈阴性的个体，应及时对这样的猪再次进行检查，或采取补免措施。

3.2 所有猪场的不同构成成分猪群间PRRSV免疫抗体水平存在差异

试验研究发现，不同构成成分的试验猪群间PRRS免疫抗体水平存在差异：种公猪的免疫抗体水平最高，抗体阳性率接近100%，为98.80%；经产母猪的抗体水平也较高，接近于种公猪的免疫抗体阳性率；育肥猪的免疫抗体水平最低，为55.56%，这可能与猪场对育肥猪的疾病预防意识淡薄有关系，甚至是不适当的思想在作怪（育肥猪的饲养周期相对较短，发生疾病的风险小，一旦发病就可把猪处理掉，所以不想在育肥猪身上花更大的预防接种的成本，这种思想很可怕，因为传染病对猪群的危害都很大）。对试验猪群中的0～30 d仔猪的免疫抗体水平进行分析发现：虽然仔猪的整体PRRS免疫抗体水平较高，但免疫抗体水平有随日龄的增长而下降的趋势，这可能与母源抗体随时间延长而降低有关，所以应适当加强对妊娠母猪的PRRS免疫接种，提高母源抗体对出生仔猪的保护，抵抗饲养环境中PRRS对出生仔猪的感染；当然，也与种公猪精液品质有关，在配种前应对种公猪进行严格筛选。

3.3 增强猪场疾病预防工作，及时有效地进行免疫接种

针对PRRS流行性较广的特点，建议各猪场应制定针对PRRS的科学合理的免疫程序，采取及时有效的免疫接种，以此对猪群进行保护，因为免疫接种是预防PRRS的最为有效的措施之一，并搞好环境消毒工作。在选择疫苗时要慎重，要根据自己猪场的具体情况而定，虽然弱毒苗的临床效果较好，但存在一定的风险，可能引起病毒的返祖或散毒现象的发生［10］。应重视PRRS的免疫接种工作，并且PRRSV在一定程度上可抑制猪对猪瘟疫苗的免疫应答［11］。建议可在免疫接种前后饲喂适当的黄芪多糖，以提高猪群的免疫效果和抗病能力［12］。在免疫接种前10 d左右，不要使用影响免疫效果的药物，如卡那霉素。

［1］ CAVANAGH D.Nidoviralses：a new order comprising Coronaviridae a n d A r t e r i v i r i d a e［J］. A r c h Virol，1997，142： 629-633.

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［6］ 权中会，阴明亮，权凤英，等.我国猪繁殖障碍性疾病的流行状况和综合防制［J］.畜禽业，2003（4）：7-9.

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［12］ 甘建苗，戚一鸣，刘晓瑛，等.ELISA检测猪蓝耳病抗体效价变化［J］.畜牧兽医科技信息，2011（1）：27-28.

2016-05-31）

新疆石河子市农业科技攻关项目（编号：2013NY04）

作者 ：刘 鸽（1986-），男，山东省淄博人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作

屈勇刚（1971-），男，陕西省渭南人，副教授，主要从事动物传染病诊断与防治工作