广东花生主要品种对黑腐病菌的抗性水平鉴定

蓝国兵, 何自福, 佘小漫, 汤亚飞

广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室，广东 广州 510640



广东花生主要品种对黑腐病菌的抗性水平鉴定

蓝国兵, 何自福*, 佘小漫, 汤亚飞

广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室，广东 广州 510640

【背景】寄生帚梗柱孢霉是花生黑腐病的病原菌，被我国列为重要的进境植物检疫性有害生物。该病菌2009年已入侵我国广东，造成花生植株基部腐烂而死亡，严重威胁花生生产安全。筛选与种植抗病品种是防控该病害的重要措施。【方法】收集广东推广种植的15个主要花生品种，通过人工接种方法，鉴定这些品种对花生黑腐病菌的抗性水平。【结果】15个供试花生品种中，湛红2号、湛油62等2个品种表现为抗病；湛油75、湛油82、粤油390、粤油410、仲恺花44、仲恺花99、汕油诱1号等7个品种表现为中抗；花育33号、汕油523、汕油辐1号、粤油18、湛油53等5个品种表现为感病；仲恺花332表现为高感。【结论与意义】目前广东生产上推广种植的花生品种多数对黑腐病菌表现为抗病或中抗水平，部分品种表现为感病或高感。该结果可为我省花生品种的推广与布局提供依据。

花生品种； 花生黑腐病菌； 抗病性

花生黑腐病是一种真菌性病害，由冬青丽赤壳菌CalonectriailicicolaBoedijin & Reitsma侵染引起，该病原菌的无性阶段为寄生帚梗柱孢霉CylindrocladiumparasiticumCrous, Wingfield & Alfenas(盖云鹏等，2014; Bel & Sobers，1966； Crousetal.，1993)。该病最早在美国的佐治亚州被发现，现已扩散到美国所有的花生产区，造成的产量损失一般在10%左右，严重的超过50%，对美国花生产业构成了严重威胁(Wrightetal.，2010)。2007年，我国将寄生帚梗柱孢霉列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》中。2009年我国最先在广东省发现花生黑腐病，田间病株率超过50%(Panetal.，2009)。该病害的典型症状是花生茎基部、果针和豆荚以及整个根系变黑腐烂；在温暖潮湿条件下，罹病部位产生大量红色小点，并导致植株萎蔫和死亡(潘汝谦等，2011a)。据风险性评估，花生黑腐病菌在我国属于高度风险性有害生物，对我国的花生和大豆等作物的生产以及生物安全等都将构成严重的威胁(潘汝谦等，2012)。

花生黑腐病是典型的土传和种传病害，其中种子传播是病害迅速蔓延扩散的主要原因，病害防治难度大(潘汝谦等，2011b; Dongetal.，2008)。种植抗病花生品种是最经济、有效的防控手段，不仅可以减轻病害损失，而且可以减少农药使用量。目前，我国还没有花生品种对黑腐病抗性鉴定和评价的报道。本研究通过人工接种方法鉴定广东省推广种植的15个花生品种对黑腐病的抗性，为我省花生品种的推广与布局提供依据。

1　材料与方法

1.1供试菌株

花生黑腐病菌分离自广东省河源市紫金县的花生病株，病原菌保存于广东省农业科学院植物保护研究所，选择其中致病力中等的菌株(编号ZJ-HSHF1)用于本次抗病性鉴定。

1.2供试花生

湛红2号、湛油62、湛油75、湛油82等4个花生品种由湛江市农业科学研究院提供，粤油18、粤油390、粤油410、湛油53、花育33号、汕油523、汕油诱1号、汕油辐1号、仲恺花99、仲恺花44、仲恺花332等11个花生品种由广东省农业科学院作物研究所提供。

1.3试验方法

1.3.1种子处理和育苗挑选各花生品种大小、饱满度等较为一致的健壮种子，直播于装有消毒土壤的育苗杯中，每杯播2粒种子。出苗后水肥管理按常规方法，每天傍晚浇一次水。试验过程中仅喷施杀虫剂防治害虫，不喷施杀菌剂。

1.3.2接种菌培养和孢子悬浮液制备取保存在4 ℃冰箱的病原菌，在PDA平板上28 ℃黑暗培养10 d，然后用无菌水洗下分生孢子，用血球计数板计算孢子悬浮液浓度，并用清水稀释成2×103个·mL-1的浓度。

1.3.3接种方法在花生花针期前进行接种，将浓度为2×103个·mL-1的孢子悬浮液直接淋到花生茎基部，每株淋10 mL菌液。每个处理30株，3次重复，区组随机排列。接种后的室内温度介于25～35 ℃，相对湿度介于50%～90%。以淋等量清水处理为空白对照。

1.3.4病情调查与数据统计当感病品种发病较为明显时进行第1次调查，记录无病株数、病株数和病级。此后每隔半个月调查一次，全期共调查3次。调查结束后，计算各处理病株率和病情指数，应用邓肯式新复极差法(DMRT)进行差异显著性分析，以各处理病株率基本稳定后的病情指数评价各品种对花生黑腐病的抗性水平。

根据对花生黑腐病发病过程的系统观察，制定了该病的症状分级标准：0级，茎基部无任何症状；1级，茎基部零星出现黑色小斑点；3级，茎基部全部变黑，但不出现红色小点；5级，茎基部变黑，并出现红色小点；7级，茎基部变黑，出现红色小点，叶片褪绿，植株轻度萎焉；9级，茎基部变黑腐烂，植株萎焉死亡(图1)。花生品种对黑腐病的抗性评价标准：高抗(highly resistent,HR)，0<病情指数≤10；抗病(resistent,R)，10<病情指数≤30；中抗(moderately resistent,MR)，30<病情指数≤50；感病(susceptible,S)，50<病情指数≤70；高感(highly susceptible,HS)，70<病情指数。

2　结果与分析

接种10 d后，感病花生品种开始发病，表现为茎基部的茎秆出现零星黑色小斑点(1级)；随后黑色斑点慢慢扩大，茎基部全部变黑并出现红色小点(5级)；最终茎基部腐烂，植株萎焉，整株枯死(9级)。接种30 d后，感病的花生品种发病较为明显，病情逐渐发展；接种60 d后，各花生品种病株率不再增加，病情基本稳定。清水处理的植株生长正常，在整个试验过程中均未见发病。

调查结果(表1)显示，15个花生品种的病情指数和病株率存在较大差异。其中，仲恺花332病情指数最高，平均病指达73.40，病株率为86.06%,湛红2号的病情指数最低，平均病指为27.54，病株率为45.77%，二者的病情指数差异达到极显著水平；其余品种的病情指数介于63.38～28.78。根据花生品种对黑腐病的抗性评价标准，在供鉴定的15个花生品种中，湛红2号、湛油62等2个品种表现为抗病，占13.33%；湛油75、湛油82、粤油390、粤油410、仲恺花44、仲恺花99、汕油诱1号等7个品种表现为中抗，占46.67%；花育33号、汕油523、汕油辐1号、粤油18、湛油53等5个品种表现为感病，占33.33%；仲恺花332表现为高感，占6.67%。

图1　不同级别花生黑腐病的症状表现Fig.1　Peanut plants showing various levels of the peanut black rot diseasea：0级;B:1级;C:3级;D:5级;E:7级;F:9级。a： Grade 0, symptomless, resistent plant; B: Grade 1; C: Grade 3; D: Grade 5; E: Grade 7; F: Grade 9, highly susceptible plant.

3　结论与讨论

品种抗性鉴定的可靠性与接种方法密切相关。通过前期大量试验，本研究团队建立了花生品种对黑腐病抗性鉴定方法。该方法模拟花生黑腐病菌在田间自然侵染花生的状态，采用中等浓度病原菌孢子悬浮液淋根接种，可以较好地鉴定出各花生品种对花生黑腐病的抗性水平。应用该方法鉴定与评价了广东省生产上推广种植的15个花生品种对黑腐病的抗性水平，结果表明：2个品种表现为抗病，7个品种表现为中抗，两者占60%；5个品种表现为感病，1个品种表现为高感，两者占40%。这说明我省生产上推广种植的花生品种多数对黑腐病表现为抗病或中抗水平，但也有不少品种对花生黑腐病表现为感病甚至高感。因此，花生黑腐病对我省花生生产安全仍具有较大威胁，应引起花生育种单位和农业技术推广部门的重视。下一步需要对入侵广东省甚至我国各地理区域的菌株致病性进行分析，为花生品种抗病性综合评价提供依据。

致谢: 广东省农业科学院作物研究所李少雄研究员和湛江市农业科学研究院陈新起农艺师提供花生种子，特此致谢。

表1　15个花生品种对黑腐病菌的抗性Table 1　Resistance of 15 peanut cultivars to black rot disease

表中数据为接种后第60天的调查结果；同列数据后附不同大写字母者表示差异极显著(P<0.01)。

Datas in the table are the results in 60 days post inoculation (dpi); Different capital letters after data within the same column express significant difference among treatments atP<0.01. HS: Highly susceptible; S: Susceptible; MR: Moderately resistent; R: Resistent.

盖云鹏, 潘汝谦, 徐大高, 邓铭光, 丁三寅, 2014. 进境检疫性有害生物——寄生帚梗柱孢霉. 植物检疫, 28(4): 76-81.潘汝谦, 关铭芳, 徐大高, 邓铭光， 2011a. 警惕花生黑腐病菌的入侵. 植物保护, 37(1): 164-165.潘汝谦, 关铭芳, 徐大高, 纪春艳, 邓铭光， 2011b. 花生黑腐病菌的生物学特性. 华中农业大学学报, 30(6): 701-706.潘汝谦, 徐大高, 邓铭光, 纪春艳， 2012. 外来入侵花生黑腐病菌在中国的风险性评估. 中国农业科学, 45(15): 3068-3074.

Bel D K and Sobers E K, 1966. A peg, pod and root necrosis of peanuts caused by a species ofCalonectria.Phytopathology, 56(12): 1361-1364.

Crous P W, Wingfield M J and Alfenas A C, 1993.Cylindrocladiumparasiticumsp. nov., a new name forC.crotalariae.MycologicalResearch, 97(7): 889-896.

Dong W B, Brenneman T B, Holbrook C C and Culbreath A K, 2008. Evaluation of resistance toCylindrocladiumparasiticumof runner-type peanut in the greenhouse and field.PeanutScience, 35(2): 139-148.

Pan R, Guan M, Xu D, Gao X, Yan X and Liao H, 2009.Cylindrocladiumblack rot caused byCylindrocladiumparasiticumnewly reported on peanut in China.PlantPathology, 58(6): 1176.

Wright L P, Davis A J, Wingfield B D, Crous P W, Brenneman T and Wingfield M J, 2010. Population structure ofCylindrocladiumparasiticuminfecting peanuts (Arachishypogaea) in Georgia, USA.EuropeanJournalofPlantPathology, 127(2): 199-206.

(责任编辑:杨郁霞)

Identification of the resistance to black rot disease in peanut (Arachishypogaea) cultivars caused byCylindrocladiumparasiticumin Guangdong Province, China

Guo-bing LAN, Zi-fu HE*, Xiao-man SHE, Ya-fei TANG

GuangdongProvincialKeyLaboratoryofHighTechnologyforPlantProtection/PlantProtectionResearchInstitute,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou,Guangdong510640,China

【Background】Cylindrocladiumparasiticum, the pathogen causing the peanut black rot disease, is listed as an important quarantine pathogen in China, but the pathogen invaded Guangdong Province in 2009. The pathogen is threatening the peanut production. Screening and planting resistant cultivars is an important measure to control the spread of the disease. 【Method】 Fifteen peanut cultivars widely grown in Guangdong Province were collected, and their resistance to peanut black rot disease was identified and evaluated by artificial inoculation. 【Result】 The cultivars cv. Zhanhong NO.2 and cv. Zhanyou NO.62 were resistant to peanut black rot disease. Cv.s Zhanyou NO.75, Zhanyou NO.82, Yueyou NO.390, Yueyou NO.410, Zhongkaihua NO.44, Zhongkaihua NO.99 and Shanyouyou NO.1 were moderately resistant, while cv.s Huayu NO.33, Shanyou NO.523, Shanyoufu NO.1, Yueyou NO.18 and Zhanyou NO.53 were susceptible. Cv. Zhongkaihua NO.332 was a highly susceptible cultivar. 【Conclusion and significance】 The majority of the peanut cultivars grown in Guangdong were at least moderately resistant to black rot disease at present, but some popular cultivars showed high susceptibility. These results could be used to modify the range of layout of peanut cultivars in Guangdong.

peanut cultivars;Cylindrocladiumparasiticum; resistance

2016-05-21接受日期(Accepted)： 2016-07-11

国家科技支撑计划(2015BAD08B02)； 科技部对发展中国家科技援助项目(KY201402015); 广东省科技计划项目(2014B070706017)

蓝国兵， 男， 助理研究员。 研究方向： 植物真菌病害。 E-mail： languo020@163.com

Author for correspondence), E-mail: hezf@gdppri.com

10. 3969/j.issn.2095-1787.2016.03.011