高效液相色谱-DAD法检测饲料中三类（8种）农药残留

高　林，高文惠*（1.河北科技大学生物科学与工程学院，河北石家庄 050000；2.河北省发酵工程技术研究中心，河北石家庄 050000）

高效液相色谱-DAD法检测饲料中三类（8种）农药残留

高林1，2，高文惠1，2*
（1.河北科技大学生物科学与工程学院，河北石家庄 050000；2.河北省发酵工程技术研究中心，河北石家庄 050000）

本实验建立了同时分离检测饲料中三嗪类除草剂（莠灭净、莠去津）、三唑类杀菌剂（戊唑醇、联苯三唑醇、烯唑醇）和菊酯类杀虫剂（胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯）三类（8种）农药的高效液相色谱（HPLC）-二极管阵列检测器（DAD）方法。结果表明，8种农药在10m in内实现了基线分离，线性相关系数为0.9996～0.9999，检出限为0.003～0.02μg/m L。该方法可用于饲料及其他样品中三类农药残留的高效、灵敏、快速检测。

饲料；三嗪类除草剂；三唑类杀菌剂；菊酯类杀虫剂；二极管阵列检测器；高效液相色谱法

［Abstract］A high performance liquid chromatography（HPLC）-diode array detector（DVD）method was developed for the determination of eight pesticides including ametryn，atrazine，tebuconazole，bitertanol，diniconazole，tetramethrin，cyhalothrin and dimefluthrin in feed samples.The results showed that complete sparation of the eight pesticideswas achieved within 10 min，the detection limits were 0.003～0.02μg/mL.Themethod was efficient，sensitive and fast，which could determine simultaneously the three classes of pesticide residues in feed or other samples.

［Key words］feed；triazine herbicide；triazole fungicide；pyrethroid insecticide；diode array detector；high performance liquid chromatography

三嗪类除草剂作为预防农田杂草生长的高效除草剂使用广泛，因其结构具有3个碳和3个氮对称排列的六元环结构母体，因此又被称作均三氮苯类除草剂。三嗪类除草剂由于用量大、性质较稳定、残留时间较长，而且具有较高水溶性，因此使用过程中可能对土壤、农作物、地表水和其他饮用水源造成污染，从而对人类健康和环境造成严重危害（王晓春等，2011）。三唑类杀菌剂是指含有1，2，4-三唑环的化合物，主要用于防治植物病害，对病原微生物有杀死作用或抑制生长作用，因其高效、广谱、低毒以及长效性而广泛地应用于粮油作物等病虫害的防治（胡艳云等，2014）。该农药在农作物、土壤和水体中的残留给生物安全和人体健康带来了负面影响（孙瑞娟等，2013）。菊酯类农药是目前广泛使用的一类杀虫剂，其毒性比有机磷农药低，但具有一定的毒性和蓄积性（Trunnelle等，2014）。随着三嗪类、三唑类及菊酯类农药的广泛应用，其在食品、饲料和环境中的残留问题也逐渐引起人们的关注。

冯蕾等（2011）通过优化固相萃取（SPE）条件，采用SPE前处理，结合超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS）检测乳制品中11种常用三嗪类除草剂，即西码津、莠去津、西草净、阿特拉津、仲丁通、扑灭通、莠灭净、扑灭津、特丁津、扑草净、特丁净的残留量。赵春娟和高文惠（2015）建立了同时分离检测饲料样品中腈菌唑、戊唑醇、联苯三唑醇、烯唑醇4种三唑类杀菌剂残留的高效液相色谱法。

本实验利用二极管阵列检测器（DAD）的可变波长功能，结合溶剂梯度对饲料样品中三嗪类除草剂、三唑类杀菌剂及菊酯类杀虫剂残留进行灵敏、快速的分离与检测。

1　材料与方法

1.1仪器与材料Waters 1525-2988高效液相色谱仪 （美国沃特世科技有限公司）；LD-52A低速离心机（北京雷勃尔离心机有限公司）；SK5200LHC型超声波清洗器（上海科导超声器有限公司）；SZ-93自动双纯水蒸馏器 （上海亚荣生化仪器厂）。

甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；莠灭净（98％，浙江中山化工集团有限公司）、莠去津（97％，浙江中山化工集团有限公司）、戊唑醇（97％，郑州绿康化工有限公司）、联苯三唑醇（99％，郑州绿康化工有限公司）、烯唑醇（98％，郑州绿康化工有限公司）、胺菊酯（95％，广东立威化工有限公司）、三氟氯氰菊酯（96％，广东立威化工有限公司）、四氟甲醚菊酯（94％，广东立威化工有限公司）。

标准储备液配制：分别准确称取莠灭净、莠去津、戊唑醇、联苯三唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯和四氟甲醚菊酯各150mg，用乙腈溶解后分别定容于100mL容量瓶中。

鸡饲料、猪饲料和牛饲料，均为市售。

1.2样品处理称取5.00 g样品，研磨后用30mL甲醇提取（分别提取两次，每次 15 mL），超声20 min，于4000 r/min离心10min，合并2次上清液，定容至30 mL，混匀，取10 mL过0.45μm微孔滤膜，超声脱气后备用（曹小妹等，2012）。

1.3色谱条件色谱柱Symmetry®C18（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水，溶剂梯度和流速洗脱程序见表1；进样量：20μL；柱温：30℃；检测波长范围：200～300 nm。

表1　梯度洗脱程序

2　结果与讨论

2.1检测波长的选择DAD的优势之一在于其能对每一个待测组分进行光谱扫描，由扫描结果可知，8种农药的最大吸收波长在203～222 nm，综合考虑溶剂和各物质的紫外吸收情况，检测波长范围选定为200～300 nm。在该范围内，DAD对被分析物质提取最大吸收波长，以提高检测灵敏度。

2.2流动相的选择本实验对8种农药的分离条件进行了优化。以甲醇-水为流动相，当甲醇∶水=83∶17（V/V）时，8种农药可实现分离，但整体的分离时间较长。在5 min时将甲醇-水的比例提高到87∶13，但此时在5～6 min出峰的戊唑醇和联苯三唑醇不能完全分离，故在5～6 min时将甲醇-水的比例降到85∶15，随着甲醇比例减少，戊唑醇和联苯三唑醇实现了分离，此后逐步将甲醇的比例提高到100％，此时8种农药在10 min内实现了基线分离（图1）。

图1　混合标准溶液的分离色谱图注：图中1～8分别为莠灭净、莠去津、戊唑醇、联苯三唑醇、烯唑醇、胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯。

2.3线性关系和检出限将标准储备液配制成浓度为0.001～100μg/mL的标准混合溶液，在1.3的色谱条件下测定，以峰面积对浓度绘制标准曲线，结果见表2。8种农药具有良好的线性相关性，其线性相关系数为0.9996～0.9999，检出限为0.003～0.02μg/mL。由于有效地发挥了DAD的优势，与相关文献（孟潇等，2013；金射凤等，2012）比较，对被分析物质检测的灵敏度明显提高。

表2　8种农药的线性关系及检出限

2.4样品测定饲料样品按照1.2中样品处理方法处理，在1.3色谱条件下进行测定，其色谱分离图如图2所示。结果显示，在鸡饲料、猪饲料和牛饲料中未检出此8种农药。

注：a为鸡饲料样品，b为猪饲料样品，c为牛饲料样品。图2　饲料样品色谱分离图

2.5回收率和精密度实验对鸡饲料、猪饲料和牛饲料在1μg/mL和50μg/mL 2个添加水平下进行加标回收率实验，结果见表3。结果表明，样品加标平均回收率（AR）为91.3％～108.4％，相对标准偏差（RSDs）为1.56％～3.92％（n=5）。表明该方法回收率和精密度高，分析方法可行。

表3　样品加标回收率和精密度（n=5）

3　结论

本实验建立了同时分离检测饲料中三嗪类除草剂（莠灭净、莠去津）、三唑类杀菌剂（戊唑醇、联苯三唑醇、烯唑醇）和菊酯类杀虫剂（胺菊酯、三氟氯氰菊酯、四氟甲醚菊酯）3类（8种）农药残留的高效液相色谱-DAD法。8种农药在10 min内实现了基线分离，其线性相关系数≥0.9996，检出限为0.003～0.02μg/mL。样品加标平均回收率为91.3％～108.4％，相对标准偏差（RSDs）为1.56％～3.92％（n=5）。该方法灵敏、准确、简便、快速，可用于饲料及其他样品中这8种农药的检测。

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［5］孟潇，邵华，张志虎.高效液相色谱法测定尿中拟除虫菊酯及其代谢产物的方法研究［J］.中国辐射卫生，2013，22（2）：215～217.

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S816.17

A

1004-3314（2016）08-0037-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160810

河北省科技支撑计划项目（14227504D，14236602D-13）