HuR和p120在结直肠癌中的表达及意义

章　辉　杨朝晖　曹学全★　卢洪胜　顾华敏　陶芳芳

HuR和p120在结直肠癌中的表达及意义

章辉杨朝晖曹学全★卢洪胜顾华敏陶芳芳

目的 检测HuR和p120在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学方法（IHC）检测HuR和p120在45例结直肠癌组织中的表达。结果 结直肠癌组织中HuR表达高于正常结直肠组织（P＜0.05），而p120表达则低于正常结直肠组织（P＜0.05）。45例结直肠癌组织中，HuR、p120阳性表达率均与肿瘤的组织学分级、浸润程度及临床TNM分期有关（P＜0.05）；而与年龄、性别、肿块大小无关（P均＞0.05）；p120在有、无淋巴结转移组中表达差异有统计学意义（P＜0.05），而HuR 蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）；HuR 和p120表达呈负相关（r=-0.343，P＜0.05）。结论 结直肠癌中HuR高表达可能参与了肿瘤发生与增殖，而p120低表达可能与肿瘤浸润及淋巴结转移有关。

结直肠癌 免疫组织化学 HuR p120

结直肠癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤之一，预后较差。原发性结直肠癌的发病率呈上升态势，同时发病年龄趋向老年化［1］。人们对结直肠癌的发病机制尚不明确，因此，早期诊断仍是提高患者预后的有效手段［2］。HuR是Hu家族中至今发现的唯一在人体组织广泛表达的蛋白（除神经组织外），是目前公认的mRNA 结合蛋白之一，在肿瘤发生早期，即参与增殖分化、细胞凋亡、侵袭转移、血管新生和免疫逃逸中发挥作用［3］。p120连接素是近年来发现的一种细胞粘附分子，细胞内信号分化丧失和具有侵袭性，容易发生转移［4］。本研究采用免疫组织化学方法（IHC）检测HuR和p120在结直肠癌组织中的表达情况。报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 收集本院病理科2012年10月至2013年10月经手术切除且病史完整的结直肠癌石蜡包埋组织标本45例（患者45例）。其中男27例，女18例；年龄39～80岁，中位年龄58岁。均无远处转移。患者手术前均未接受放、化疗及内分泌治疗。其中低分化癌5例、中分化32例、高分化8例。TNM临床分期：Ⅰ期14例、Ⅱ期25例、Ⅲ期6例、Ⅳ期0例。包膜浸润35例、无浸润10例。有淋巴结转移者15例、无淋巴结转移者30例。另取经病理学检查证实无癌肿浸润的正常结直肠组织15例作为对照组。所有切片经病理科多位诊断医师阅片证实。

1.2主要试剂 （1）IHC一抗：鼠抗人HuR 单克隆抗体购自武汉博士德生物技术有限公司，鼠抗人p120连接素单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司。（2）IHC二抗：PV-8000检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。（3）DAB显色试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3检测方法 标本经10%中性缓冲福尔马林溶液固定，常规脱水、透明、浸蜡，石蜡包埋，4μm连续切片。IHC染色采用通用型二步法：切片经常规脱蜡至水，置于柠檬酸缓冲液（pH=6.0）中加热行抗原修复，室温冷却后磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH=7.2）洗涤，滴加一抗，置湿盒4℃冰箱过夜。PBS 洗涤后滴加二抗，室温中孵育15～20min，再行PBS洗涤后DAB显色，苏木素复染，常规脱水、透明、封片，显微镜下观察。用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4染色结果判断 在排除非特异性染色的前提下，HuR阳性染色定位于细胞核；p120阳性染色定位于细胞膜，p120无论膜表达情况如何，只要≥10%肿瘤细胞胞浆或核出现棕褐色颗粒则为异位表达。显微镜下定位区域出现清晰的棕黄色染色的细胞即为阳性细胞。观察＞5个高倍镜视野，计数≥1000个细胞中的阳性细胞数，阳性细胞数＜10%为阴性，≥10%为阳性。1.5 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验，相关性分析采用spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HuR、p120在结直肠癌及正常对照直肠组织中的表达 免疫组化结果显示，HuR定位于细胞核（癌旁正常直肠组织细胞偶有少量核染色），呈棕黄色颗粒（见图1A）；p120表达阳性细胞定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒（见图1B）；而p120异常表达主要表现为细胞膜表达减弱，胞膜表达正常但同时出现了胞质表达，以及胞膜表达减弱或缺失的同时出现胞质和（或）胞核表达。在正常对照结直肠组织中HuR均不表达，阳性率为0.00%（0/15）；而p120全部呈阳性，阳性率为100.00%（15/15）。在结直肠癌组织中，HuR阳性率为64.44%（29/45），p120阳性率为73.33%（33/45）。见表1。

图1　HuR在结直肠癌组织中的表达（×400）

表1　HuR、p120在结直肠癌及正常直肠组织中的表达［n（%）］

2.2结直肠癌组织中HuR表达与患者临床病理特征的关系 见表2。

表2　HuR、p120表达与患者临床病理特征的关系［n（%）］

2.3HuR和p120在结直肠癌组织中表达的相关性 在45例结直肠癌标本中，HuR和p120表达均为阳性的共14例，表达均为阴性的共1例。spearman 等级相关分析显示，HuR、p120表达呈负相关（rs=-0.343，P＜0.05）。

3　讨论

Hu家族又称类胚胎致死异常视觉（ELAVL）家族，有4个成员：HuB（He1-N1）、HuC、HuD和HuR，前3个成员主要在终端分化的神经组织表达并与神经发育有关，而HuR（又名ELAV1）是一种广谱mRNA结合蛋白，在许多组织细胞中广泛表达［5］。HuR 通过和细胞内mRNA 非翻译区富含Au元件（AREs）的结合，保持mRNA 的稳定性，使之不易被降解从而增强其表达，发挥其转录后的调控作用［6，7］。研究发现，HuR在众多肿瘤的发生、发展及转移中发挥作用，参与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、侵袭转移和免疫逃逸等［5，8～10］。本研究发现，HuR 蛋白在结直肠癌组织中表达的阳性率明显高于正常对照结直肠组织，提示HuR可能参与结直肠癌的早期事件之一，为进一步阐明HuR导致结直肠癌的发生机制提供了充分证据。通过HuR蛋白与结直肠癌临床病理特征分析结果显示，HuR蛋白表达与结直肠癌临床分期、分化程度及有无包膜浸润等相关，而与患者性别、年龄、肿瘤大小、有无淋巴结转移等无关，提示HuR蛋白可能参与结直肠癌的早期发生及与疾病预后相关。

p120是一种定位于细胞膜的细胞内糖蛋白，与E-cad的胞质区段结合，形成E-cad链蛋白复合体，是维持细胞粘附和上皮结构的首要中介蛋白［11］。在正常上皮组织中，p120表达以细胞膜尤其是细胞-细胞连接处为主，胞质表达微弱，胞核不表达，而在癌组织和癌细胞中p120会从胞膜转移至胞质中，表现为胞质和（或）胞核表达，胞膜表达减弱或消失，说明癌细胞中信号分子已出现转位或重新分布，易位至胞质和胞核的p120启动了癌基因的转录［12］。本研究结果显示，结直肠癌组中p120细胞膜表达阳性率明显低于对照组的正常结直肠组织，且随着分化程度的降低p120细胞膜表达的阳性率也相应降低，部分癌组织中表达缺失。免疫组化显示随着肿瘤分化的降低，p120在包膜表达逐渐降低；TNM分期晚、浸润程度深、有淋巴结转移的肿瘤细胞，p120表达水平低，提示随着p120胞膜阳性表达的减少，肿瘤的浸润转移能力增强，且在胞质出现易位表达，这可能是由于在肿瘤组织中p120以磷酸化的形式自胞膜转移至胞质的原因。因此，作者认为p120与肿瘤的分化、浸润、转移可能密切相关。

本资料中检测结果显示结直肠癌组织中HuR与p120的表达与结直肠癌的TNM 分期有关，对两者表达的相关性进行分析，发现两者的表达呈负相关关系（r=0.343）。说明HuR与p120在结直肠癌的发生发展中具有重要作用，提示在结直肠癌中HuR与p120两者可能通过共同或相同的通路在肿瘤的发生发展中发挥作用。阳性表达的HuR可能作为上游调控因子通过多种途径对p120基因产生调控，降低p120在胞膜的表达，而在胞质和（或）胞核表达，易位至胞质和胞核的p120启动了癌基因的转录［12］。

综上所述，在结直肠癌的发生、发展及转移过程中，HuR、p120呈现出不同程度的阳性表达，此两种蛋白为判断结直肠癌预后的一个重要指标。针对HuR、p120进行药物设计和开发，也有可能为结直肠癌的早期诊断和治疗开辟新的途径。

1 郝希山，王殿昌.腹部肿瘤学.北京：人民卫生出版社，2013.353～354.

2 Ross JS.Biomarker update for breast，colorectal and non-small cell lung cancer.Drug News Perspect，2010，23（1）：82～88.

3 GubinM M，Calaluce R，Davis J W，et al.Overexpression of the RNA binding protein HuR impairs tumor growth in triple negative breast cancer associated with deficient angiogenesis.Cell Cycle， 2010， 9（16）： 3337～3346.

4 Cheung LW，Leung PC，Wong AS.Cadherin switching and activation of p120 catenin signaling are mediators of gonadotropin-releasing hormone to promote tumor cell migration and invasion in ovarian cancer.Oncogene，2010，29（16）：2427～2440.

5 Liao WL，Wang WC，Chang WC，et al.The RNA-binding protrein HuR stabilizes cytosolic phospholipase A2α mRNA under interleukin-1β treatment in nonsmall cell lung cancer A549 cells.J Biol Chem，2011，286（41）：35499～35508.

6 Vzquez-Chsntada M， Ferndndez-Ramos D， Embade N， et al.HuR/ methyl-HuR and AUF1 regulate the MAT expressed during liver proliferation， differentiation，and carcinogenesis. Gastroenterology，2010，138（5）：1943～1953.

7 Kang MJ，Ryu BK，Lee MG，et al.NF-kappaB activates transcription of the RNA-binding factor HuR，via PI3K-AKT signaling，to promote gastric tumorigenesis. Gastroenterology，2008，135（6）：2030～2042，e1～3.

8 Heinonen M，Fagerholm R，Aaltonen K，et al.Prognostic role of HuR in hereditary breast cancer.Clin Cancer Res，2007，13（23）：6959～6963.

9 Niesporek S， Kristiansen G， Thoma A， et al. Expression of the ELAV-like protein HuR in human prostate carcinoma is an indicator of disease relapse and linked to COX-2 expression.Int J Oncol， 2008， 32（2）： 341～347.

10 胡跃云，昊宏菊，辛彦，等.HuR蛋白在胃癌组织中的表达及其意义.中华临床医师杂志，2011，5（1）：91～95.

11 Liu Y，Wang Y，Zhang Y，et al.Abnormal expression of p120-catenin，E-cadherin，and small GTPases is significantly associated with malignant phenotype of human lung cancer.Lung Cancer，2009，63（3）：375～382.

12 Stairs DB，Bayne LJ，Rhoades B，et al.Deletion of p120-catenin results in a tumor microenvironment with inflammation and cancer that establishes it as a tumor suppressor gene.Cancer Cell，2011，19（4）：470～483.

Objective To investigate the expression of HuR and p120 proteins in colorectal carcinoma and the clinical significance. Methods The expressions of HuR and p120 in 45 cases of colorectal carcinoma and 15 samples of normal rectal tissue were detected by immunohistochemical （PV-8000 method）. Results The expressions of HuR in colorectal carcinoma tissues were significantly higher than those in normal rectal tissue （both P＜0.05），while p120 was lower than those in normal rectal tissue （P＜0.05））.The expressions of HuR and p120 in colorectal carcinoma tissues were correlated with the clinical stage，infiltrationand and histological grade （both P＜0.05）； while not correlated with age，gender and tumor size（both P＞0.05）. The lymph node metastasis was correlated with p120 expression （P＜0.05），but not with HuR expression （P＞0.05）. HuR expression was positively was negatively correlated correlated with p120 expression in colorectal carcinoma（r=0.343，P＜0.05）. Conclusion Overexpression of HuR may be involved in the tumorigenesis and tumor proliferation，while lowexpression of p120 might be related to the tumor invasion and lymph node metastasis in colorectal carcinoma。

Colorectal carcinomat Immunohistochemical HuR p120

318000 浙江省台州市中心医院病理科