简析牛结核病的检测

张学峰内蒙古包头市达茂联合旗农牧业局

简析牛结核病的检测

张学峰
内蒙古包头市达茂联合旗农牧业局

牛结核病（Bovine Tubercu1osis,BTB）是由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病，可通过感染牛的分泌物或排泌物或牛奶等经消化道或呼吸道传染人或者其它动物，此外，BTB还导致奶牛逐进性消瘦、产乳率和乳质下降、肺结核及其它器官结核和损害等。BTB对牛和人的健康仍然存在严重威胁，是国际动物卫生组织（OIE）规定必须通报的疾病之一，在我国列为二类动物疫病。在中国，由于奶牛饲养量增加和以个体或私营企业饲养为主的饲养模式，BTB呈现蔓延趋势。

一、BTB的免疫反应情况

准确监测是奶牛场有效防控BTB的前提，如何选择有效的检测方法就显得尤为重要。牛早期感染牛分枝杆菌，机体免疫为细胞免疫，此时应选择针对细胞免疫的检测方法如γ-干扰素检测法和结核菌素（PPD）试验；牛感染BTB到中后期才出现体液免疫，此阶段产生的特异性抗体可以被常见的抗体检测方法检测到，如：BTB抗体检测ELISA和胶体金试纸条。牛感染牛分枝杆菌后免疫反应示意图如下：

由于结核病的特殊的免疫学特性以及复杂的病理变化和免疫应答，一种诊断方法很难对结核病做出准确的诊断，医院在对人的结核病进行确诊时都要采用好几种方法进行反复试验；检测BTB也是如此，BTB的诊断也必须要综合几种不同的诊断方法互相弥补不足，尽可能地提高检测的敏感性和特异性、排除非特异性因素的干扰，降低因误诊带来的经济损失。

二、BTB检测方法介绍

γ-干扰素检测法：通过检测牛感染BTB后外周血中致敏淋巴细胞再次受到牛型结核菌素或禽型结核菌素刺激所释放的特异性γ-干扰素，针对牛结核病细胞免疫阶段，早期感染阶段。商品化的试剂盒采用ABS-ELISA方法，大大提高了检测灵敏度，是OIE推荐认可的BTB诊断方法。该方法克服了PPD判读的主观性，缩短了反应时间，已经在许多国家（澳大利亚、爱尔兰、美国）用于BTB的检测。

PPD试验：针对BTB感染中前期有效，在相当数量的PPD试验阳性牛中找不到特征病变，分不到细菌，或者分到非典型的分支杆菌，有5%的假阳性（7/ 98）。可以用比较结核菌素试验降低假阳性率，方法就是同时注射禽型PPD和牛型PPD，根据两种结核菌素的皮厚差值而判断结果。

抗体检测ELISA：ELISA试剂盒采用融合蛋白做为检测抗原能大幅度提高ELISA检测方法的敏感性，特异地检测到BTB体液免疫阶段所产生的抗体即中晚期（无变应期）的抗体，目前国内外很多厂家均有生产和销售商品化的BTB抗体检测ELISA试剂盒。

胶体金试纸条：运用胶体金层析技术特异性地检测BTB体液免疫阶段所产生的抗体即中晚期 （无变应期）的抗体，适用于临床上奶牛有咳嗽、消瘦或者是下痢的疑似结核病牛只的栏间现场检测，无需专业人士和仪器设备，具有快速、简便的优势。

几种检测方法的特点如下：

方法 　优势 　缺点 　检测阶段PPD试验 　价格相对便宜，传统方法 　耗时、费力、费人，结果因人为因素有所误差，可疑牛需重检，有假阳性结果中前期，细胞免疫阶段干扰素检测 　结果准确，OIE和出入境检疫的确诊方法操作较为繁琐，需要专业实验室和人员，成本较高中前期，细胞免疫阶段抗体ELISA 　特异、敏感、准确、快速，能大批量检测需要专业实验室和人员 　中后期，体液免疫阶段金标卡 　特异、准确、快速，无需仪器设备和专业人员，适合现场检疫敏感性不如 G-干扰素检测、ELISA等方法，成本略高中后期，体液免疫阶段γ-

目前采集血液进行实验室检测即可覆盖牛结核感染的所有阶段。

三、推荐BTB检测方案

方案1：实验室平行检测

PPD检测按照国标（GB/T18645－2002），应用牛提纯结核菌素皮内变态反应进行检测。当然采用PPD检测复核γ-干扰素阳性试验结果是比较稳妥的方式，但PPD试验比较费时费力，并不适用于大范围的检测，并且与非致病性环境分枝杆菌（土壤分枝杆菌、禽型分枝杆菌等）有交叉反应，假阳性率高；故此仅仅是推荐选择性采用。

平行检测的优势在于能快速、准确地检测全群所有阶段的感染牛，是普查牛群牛结核病最快捷和最全面的检测方案，减少了假阴性牛群的存在，对净化牛群意义重大；但需要全群做两项检测，增加了检测成本和阳性牛处理成本。

方案2：序列检测方案

序列检测方案使用牛结核γ-干扰素ELISA试剂盒进行初筛，阴性再用牛结核病ELISA试剂盒或胶体金试纸条进行检测，相较于方案1平行检测节约了检测成本，减少了假阳性牛的处理费用，节约了净化成本；但也可能保留了假阴性牛，对牛结核病感染情况的监测摸底不彻底，延长了净化时间。

四、检测要求分析

要达到牛结核病的净化，比较好的做法是：检测细胞免疫的γ-干扰素检测法或PPD试验与检测血清抗体的ELISA方法或胶体金试纸条配合使用，互相弥补不足，尽可能地提高检测的敏感性和特异性、排除非特异性因素的干扰，降低因误诊带来的经济损失。

1.发现病牛应立即扑杀，也可隔离饲养，定期检测。若有开放性结核病灶，立即扑杀，并无害化处理。优秀的高产奶牛或种牛，可用链霉素或者异烟肼利福平治疗。

2.对疑似牛隔离饲养，1月后复检。仍为疑似，继续隔离。过25～30天重检，结果仍疑似按照阳性处理。

3.污染牛群一年检疫4次。阳性牛进行分群。剩余的阴性牛应间隔30～45天，连续监测3次，阴性者为假定健康群。该群或阳性率3%以下，应该每年2次以上的检疫。若无阳性牛在经过1～1.5年连续3次检疫，结果为阴性者，确定为健康群。