HS-SPEM-GC-MS分析丹蒌片中的挥发性化学成分*

张　娜，李　琳，高　杉，朱　彦，王家明，张　鹏，于春泉

（1.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津　300193；2.天津国际生物医药联合研究院，中药新药研发中心，天津　300457；3.天津科技大学，生物工程学院，天津 300457）

·中药研究·

HS-SPEM-GC-MS分析丹蒌片中的挥发性化学成分*

张娜1，2，李琳1，高杉1，朱彦1，王家明3，张鹏1，于春泉1

（1.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津300193；2.天津国际生物医药联合研究院，中药新药研发中心，天津300457；3.天津科技大学，生物工程学院，天津 300457）

［目的］用气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术鉴定丹蒌片挥发性化学成分。［方法］采用顶空固相微萃取法（HS-SPEM）提取丹蒌片中的挥发性成分，利用GC-MS结合保留指数法（KI）对其主要挥发性成分进行分析鉴定。［结果］从丹蒌片挥发性成分中鉴定出44个组分，占总挥发性组分的72.46%。其中相对含量超过5%的成分有蒿本内酯（17.49%），β-榄香烯（11.07%），（-）斯巴醇（8.95%），3-丁烯基-1（3H）-异苯并呋喃酮（5.50%）等6个化合物。［结论］丹蒌片中的挥发性成分得到全面分析，根据其相对含量，丹蒌片中的挥发性成分主要来源于川芎、郁金、泽泻，为丹蒌片的质量控制和进一步药效研究提供一定的参考。

丹蒌片；挥发油；GC-MS分析

丹蒌片是临床治疗冠心病、心绞痛的常用复方制剂，由川芎、丹参、赤芍、泽泻、郁金等10味中药组成，主要用于治疗痰瘀互结所致的胸痹心痛，症见胸闷胸痛、憋气、舌质紫暗、苔白腻，冠心病心绞痛见上述证候者；具有宽胸通阳，化痰散结，活血化瘀之功效［1-2］。丹蒌片复方药味众多，成分复杂，董娟等［3］已用液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）技术分析丹蒌片中的非挥发性成分，但对丹蒌片中的挥发性成分尚未有研究报道。丹蒌片中的郁金［4］、川芎［5］、泽泻［6］等中药的挥发性成分主要包括酚酸、酮类、萜类和酯类等，其中的某些挥发性成分对心、脑血管疾病具有一定的预防和治疗作用［7-9］，因此对丹蒌片中挥发性成分值得研究。

气相色谱质谱技术（GC-MS）对挥发性成分的定性分析与鉴定常用的是NIST谱库检索的方法、保留指数法、谱库检索和保留指数法相结合的方法［10］，其中保留指数（KI）是被国际公认的气相色谱定性指标的一种参数，可以有效地区分结构上细微差别的同分异构体，将质谱检索和保留指数相结合分析可显著提高鉴定的准确性［11］。顶空固相微萃取技术（HS-SPEM）是固相微萃取技术的一种较常用的萃取模式，克服了水蒸气蒸馏法、超临界二氧化碳（CO2）萃取法等传统方法中操作复杂，费用高等缺点［12-14］。对于中药、生物样本，该方法能够很好的避免萃取固定相受到样品中的大分子物质和难挥发性物质的污染与干扰［15］，并且在处理一些不稳定的化学成分时，还可以防止它们出现加热分解与转化的现象［16］。该方法已经广泛应用于食品、药品、环境以及生物样品的分析。本文采用HS-SPEM提取丹蒌片中的挥发性成分，利用GC-MS结合KI［17］对其主要成分进行分析鉴定。以期为丹蒌片药效物质基础的研究提供实验基础。

1　材料和方法

1.1材料、试剂与仪器Agilent7890A-5975CGCMS气质联用质谱仪（美国Agilent科技公司），色谱数据处理系统（MSD ChemStation E.02.01，美国Agilent科技公司），NIST08.L谱库；HJ-3磁力搅拌加热器（金坛市医疗仪器厂），100μm聚二甲基硅氧烷涂层固相萃取头（PDMS，Supelco，Bellefonte，Pa），HP-5MS毛细管柱（美国Agilent科技公司），超纯水机（天津市奥佳科技有限公司）。

正构烷烃对照品溶液C8-C20（美国FLUKA公司），氯化钠为分析纯（天津市化学试剂一厂）。

丹蒌片（吉林康乃尔药业有限公司生产，批号20140602）。

1.2方法

1.2.1HS-SPEM法提取挥发油取5片丹蒌片粉碎，将粉碎过的样品0.6584 g、饱和氯化钠3.6g及12mL水放入顶空瓶中，在65℃磁力搅拌下萃取40min，取出，立即插入气相色谱仪进样口，解吸5min。进样口温度250℃，进样模式为不分流进样。

1.2.2色谱条件色谱柱：HP-5MS（60m×320μm× 0.25μm）；载气He，流量1mL/min；汽化温度：250℃；接口温度：280℃；色谱柱初始温度60℃（保持1min），以4℃/min升温速率升至150℃（保持5 min），以4℃/min升温速率升至240℃（保持3min）；溶剂延迟：0min。

1.2.3质谱条件电离方式：EI源，能量70 eV；离子源温度:230℃；四极杆温度:150℃；质量范围：（35～800）AMU；电子倍增器电压:1 400 V。谱图检索：采用NIST08.L谱库进行检索。

1.2.4KI值测定取正构烷烃混合对照品，按1.2.2项下条件分析，记录各正构烷烃保留时间，根据化合物的保留时间找到相邻的两个正构烷烃后按下式计算待测化合物的KI值：KI=100Z+100［TR（x）-TR（z）］/［TR（z+1）-TR（z）］

式中：TR（x），TR（z），TR（z+1）分别代表待测化合物及碳数为Z，Z+1正构烷的保留时间。且TR（z）＜TR（x）＜TR（z+1）［18］。

2　结果

取1.1项下的丹蒌片供试品，按1.2.1项下条件提取供试品中的挥发性成分，按1.2.2项下条件对丹蒌片中的挥发性化学成分进行GC-MS分析，见图1。

图1丹蒌片在GC-MS中的TIC图

采用峰面积归一化法计算各组分相对含量，对总离子流图中各色谱峰计算其KI值，利用各色谱峰对应的质谱图进行NIST标准谱库检索，选取质谱匹配度高的10个可能物质，并检索其理论保留指数（KI*）值，以质谱图和KI值匹配度都高的化学结构为最佳鉴定结果，见表1。

3　讨论

通过GC-MS分析丹蒌片中挥发性成分，经NIST08质谱库检索与保留指数双重定性的方法鉴定出44种主要成分，其相对含量总和占总挥发性组分的72.46%。由总离子流图和挥发性成分鉴定结果可知，丹蒌片挥发性成分十分复杂，种类较多，且相对含量差别较大。其中相对含量高于5%的成分有蒿本内酯、β-榄香烯等6个成分，相对含量1%～5%的成分有环氧香橙烯、吉马酮等4个成分。

丹蒌片挥发性成分中含量最高的化合物通过NIST标准谱库比对的匹配度只有69%，低于一般标准匹配度80%（匹配度高于一般标准的化合物，可直接定性）。为了确证该化合物的结构，根据其保留时间，选取了C8-C20正构烷烃，测定了其KI值，采用NIST匹配与保留指数法相结合方法鉴定该化合物，该化合物的实际KI值与反式蒿本内酯KI*值比较，标准偏差阈值小于10%［19］，可确定该化合物为反式蒿本内酯，对于保留时间在C8-C20正构烷烃范围内的挥发性成分，本文同时计算了其KI值，对其进行了双重定性。

反式蒿本内酯是本复方制剂中川芎的主要活性成分之一，具有改善微循环［20］、舒张血管［21］、抑制血管平滑肌细胞增殖［22］等作用。同时其他挥发性成分如β-榄香烯［23］等，也具有抗凝血、溶血栓、抗动脉粥样硬化等的功效。由此推测，丹蒌片复方制剂中的挥发性成分也是其发挥抑制心肌缺血、抗动脉粥样硬化、降脂等功效的活性成分，本实验结果为后期进一步研究其药效物质基础提供了实验依据。

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HS-SPEM-GC-MSanalysisof the volatile componentsof Dan-lou tablets

ZHANGNa1，2，LILin1，GAOShan1，ZHUYan1，WANG Jia-ming3，ZHANGPeng1，YUChun-quan1
（1.Tianjin University of TraditionalChineseMedicine，Tianjin State Key Laboratory ofModern Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin International JointAcademy of Biomedicine，Research and DevelopmentCenter of Traditional Chinese Drug，Tianjin 300457，China；3.Tianjin University ofScienceand Technology，Engineering CollegeofBiology，Tianjin 300457，China）

［Objective］Using gas chromatography-mass spectrometry technology（GC-MS）to identify the chemical composition of volatile oil of Dan-lou tablets.［Method］In this paper，volatile components of Dan-lou tabletswere extracted by headspace solid phasemicroextraction（HS-SPEM）.Their structureswere identified based GC-MS database combined with Retention Index（KI）calculated.［Results］Fourty-four kinds of volatile oil compoundswere identified from Dan-lou tablet，which accounted 72.46%of the total volatile oil components.The ingredients which have content more than 5%were Ligustilide（17.49%），β-Elemenone（11.07%），（-）-Spathulenol（8.95%），3-butenyl-1（3H）-isobenzofuranone（5.502%）et al.［Conclusion］Volatile components of Dan-lou tablet are fully analyzed.The identifiedcompounds havemultiple activities according the prevent reports. Thisarticle providesa scientific basis forquality controland furtherpharmacological research ofDan-lou tablets.

Dan-lou tablet；volatile oil；GC-MS；analysis

R284

A

1673-9043（2016）04-0258-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.04.10

国家自然科学基金青年项目（81303183，81403198）；国家重点基础研究发展计划（“973”计划）项目（2014CB542902）。作者简介：张 娜（1990-）女，硕士研究生，主要从事药物化学研究。

张鹏，E-mail:zhp8270@sina.com.cn；于春泉，E-mail:ycq-4@163.com。

2016-04-02）