ESR和 FSHβ亚基基因在华特B系猪中多态性的研究分析

刘燕

河南农业职业学院牧业工程学院

ESR和 FSHβ亚基基因在华特B系猪中多态性的研究分析

刘燕

河南农业职业学院牧业工程学院

研究分析华特B系猪、大约克猪的ESR、FSHβ亚基基因的多态性及其与繁殖性能的关系。结果表明：ESR基因在2个猪种中AA和AB基因型均占优势，BB基因型频率很低，但BB基因型经产产仔较高。FSHβ亚基基因在华特B系猪中未检测到AA基因型，BB基因型占绝对优势，以AB基因型产仔数最高，但没有达到显著水平。

ESRFSHβ多态性华特B系猪

华特猪配套系的育成以甘肃地方猪种八眉猪、河西猪、苏联大白猪、长白猪和大约克猪为育种素材。选育经历新品种选育、专门化品系的选育和品系间的配套选育三个阶段完成。华特B系猪具有典型的瘦肉型猪体型，适应性强、繁殖率高、保姆性强，相对于华特A系、华特C系较优。猪产仔数是低遗传力性状，到一定年龄才表现且只在母猪一方面表现，还可能受到母体效应的影响，以数量遗传学为指导的常规选择方法所能取得的遗传进展十分有限。如采用标记辅助选择（MAS），则可提高选择的准确性和遗传进展。本文检测ESR、FSHβ亚基基因在华特B系猪中的多态性，为进一步探讨其对产仔数的影响，以期在华特B系群体中利用分子标记辅助选择方法提高产仔数。

一、材料和方法

1.实验材料

（1）实验动物。华特B系猪50头，大约克猪50头，由甘肃临泽新华种猪场，永登润通原种猪场，兰州猪场提供。采耳组织，-20℃保存，用于基因组DNA的提取。

（2）试剂。Taqase、dNTP、丙烯酰胺和Mark购于广东东盛生物公司，限制性内切酶PvuⅡ购于大连宝生物。其他试剂均为国产分析纯。

2.实验方法

（1）猪耳组织DNA的提取。采用酚-氯仿抽提法提取耳组织样的DNA。

（2）PCR扩增。PCR引物由大连宝生物合成，ESR、FSHβ其序列分别如下：

（R1）：5'-CCT，GTT，TTT，ACA，GTG，ACT，TTT，ACA，GAG-3'

（F1）：5'-CAC，TTC，GAG，GGT，CAG，TCC，AAT，TAG -3'

（R2）：5'-CCT，TTA，AGA，CAG，TCA，ATG，GC-3'

（F2）：5'-ACT，GGT，CTA，TTC，ATC，CTC，TC-3'

PCR反应体系为 25ul：10×buffer（Mg2+15mM）2.5μl，Mg2+（25mM）1.5μl，dNTPs（10mM）0.5μl，引物（10μM）各 0.5μl，Template（100ng/μl）0.5μl，Taqase （2.5U/ul）0.5ul。ESR引物反应程序是94℃ 预变性3min；变性94℃1min，退火65℃1min，延伸72℃1min，共35个循环；最后72℃延伸10min；FSHβ引物反应程序是95℃预变性2min，变性95℃40s，退火58℃40s，延伸72℃1min，共35个循环；最后72℃延伸7min。

（3）酶切及电泳检测。ESR基因PCR产物的酶切反应体系为16ul，其中PCR产物6ul，PvuⅡ（15U/ul）0.5ul，Buffer 2.5ul，双蒸水7ul。37℃恒温过夜。PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测，酶切产物用8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。

二、结果与分析

1.ESR基因和FSHβ亚基基因的多态性

（各基因型的电泳图片）ESR基因进行PCRRFLP分析结果：121bp纯合子（AA基因型）；121、65、56bp杂合子（AB基因型）；65bp、56bp纯合子（BB基因型）；在华特B系猪群体内以AA基因型占绝对优势，BB基因型频率很低。在大约克猪群体内AA、AB基因型居多，BB基因型频率很低。FSHβ基因PCR扩增结果出现500bp纯合子 （AA基因型）；500、220bp杂合子（AB基因型）；220bp纯合子（BB基因型）3种情况。在华特B系猪群体内以BB基因型占绝对优势，且在华特B系猪群体内未发现AA基因型，而大约克群体内AA基因型频率很低。

2.ESR基因和FSHβ亚基基因与繁殖性能的关系

表1　不同猪群中ESR基因对繁殖性能的影响

表2　不同猪群中FSHβ亚基基因对生产性能的影响

由表1可得，所检测的2个群体ESR基因均表现出极端的偏态分布，华特B系猪和大约克猪样本中BB基因型样本太少，因此难以精确计算各基因型在产仔数上的差异。华特B系猪的ESR基因的AA基因型与BB基因型在头胎总产仔数、头胎产活仔数上无显著差异。但在经产总产仔数、经产产活仔数上差异极显著，AA基因型比BB基因型的经产总产仔数、经产产活仔数分别高1.8、1.1头。AA基因型和BB基因型在断奶重、乳头数上差异均极显著，且AA基因型比BB基因型断奶重高0.46千克。大约克猪AA基因型与BB基因型在头胎产活仔数上差异显著，BB基因型与AB基因型在头胎总产仔数、头胎产活仔数上差异均极显著。但在经产总产仔数、经产产活仔数上无显著差异，这与华特B系猪相反。大约克猪ESR基因各基因型在初生重、断奶重、乳头数上无显著差异。

由表2可得，FSHβ亚基基因在华特B系猪中产仔数AB基因型高于BB基因型，但没有达到显著水平。断奶重AB基因型比BB基因型高0.54千克，差异显著。BB基因型与AB基因型乳头数差异极显著，高0.05。FSHβ亚基基因在大约克猪中BB基因型与AA基因型在头胎总产仔数、头胎产活仔数上差异极显著，分别高出2.0、1.6头。经产总产仔数，经产产活仔数差异也极显著，BB基因型比AA基因型的经产总产仔数、经产产活仔数分别高2.27、2.31头。在初生重、断奶重上BB基因型比AA基因型分别高0.39千克、1.44千克，差异极显著。

三、讨论

虽有研究证明ESR基因是控制猪高产仔数的主效基因，与控制猪高产仔数的主要基因紧密连锁，但也有报道指出，PvuⅡ酶切多态性与母猪繁殖性能之间相关性不高。可能是由于母猪繁殖性能一方面受到各品种不同遗传背景的影响，另一方面同时受到猪场建筑设计、饲养管理和气候等因素的影响。试验所用猪群不是饲养在同一规模化种猪场内，其饲养管理、气候和栏舍条件等诸环境因素不一致所造成的。本研究2个群体中，ESR基因均表现出极端的偏态分布，BB基因型的样本太少，但由于受样本量的限制，本研究的结果还不能做出产仔数差异的准确结论。因此，加大样本量对该性状作进一步的研究非常必要。赵要凤等研究，在国外猪种中FSHβ优良基因为BB型。但我国的地方猪种中检测不到BB基因型，地方猪种的产仔数一般比外国猪种的产仔数高，这可能是因为FSHβ的不同基因型在不同的品种中作用不同。在本研究中，华特B系猪中未检测到FSHβ亚基基因AA基因型，且产仔数呈AB＞BB趋势。大约克猪的BB基因型比AA基因型头胎产仔数，经产产仔数分别高2.05、2.33头，且达到极显著水平。

［1］赵要凤，李宁，肖璐等.猪FSHβ亚基基因结构区逆转座子插入突变及其与猪产仔关系的研究［J］.中国科学（C辑），1999，29（1）：81-86

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［3］王继英，武英等.FSHβ亚基基因和ESR基因的多态性对莱芜猪合成系产仔数的影响［J］.中国畜牧杂志，2007，43（13）：4-6

［4］蔡更元，彭国良等.猪雌激素受体基因在"五丰"种猪群中的遗传变异分析［J］.养猪业，2003，（1）：5-7

［5］王宵燕，经荣斌等.ESR和FSHβ基因在苏姜猪世代选育中遗传变异的研究［J］.养猪，2007，（4）：30-31

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